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血尿安胶囊急性毒性作用研究

发表时间：2020/2/25 来源：《医药前沿》2019年36期作者：熊静悦1,2 张莉2 罗实3 唐大轩2 石依坤2

[导读] 24h内多次灌胃给予小鼠和大鼠一定剂量的血尿安，观察动物在一定时间内出现的毒性反应，从而评价血尿安的急性毒性作用，旨在为临床安全用药的剂量设计提供参考依据。

        （1成都中医药大学四川成都 610072）
        （2四川省中医药科学院?国家中医药管理局中药质量生物评价重点研究室四川成都 610041）
        （3云南雷允上理想药业有限公司云南昆明 650503）
        【摘要】目的：24h内多次灌胃给予小鼠和大鼠一定剂量的血尿安，观察动物在一定时间内出现的毒性反应，从而评价血尿安的急性毒性作用，旨在为临床安全用药的剂量设计提供参考依据。方法：①取体重为18～22g的KM种小鼠40只，♀♂各半，禁食不禁水12h后，按体重随机分为对照组和血尿安组，对照组灌胃给予0.5% CMC-Na溶液，血尿安组以最大浓度（0.894 g原生药/ml）、最大体积（0.4 ml/10g.bw）给药量灌胃，间隔4h给药，共3次，累积给药量为107.22 g原生药/kg。观察并记录可能出现的毒性反应及死亡情况，连续14d。第14d处死小鼠，解剖进行大体观察，并取心、肝、脾、肺、肾称重，计算脏器指数。②取80只SD大鼠，初始体重160g-200g，♀♂各半，按体重随机分为对照组、血尿安40、20、10g原生药/kg剂量组，20只/组。所有大鼠禁食不禁水12h后分别灌胃0.5%CMC-Na溶液或相应剂量药物，间隔6h给药，共2次。于d0（给药前）、d1（给药当天）、d2、d3、d7、d14称大鼠体重，并测定d0、d1、d2摄食量，观察各组大鼠出现的毒性反应情况。并于d4和d14各取50%的大鼠进行系统检测。结果：①给予小鼠血尿安3次，给药当天见腹泻及自发活动减少；血尿安组与对照组脏器系数未见统计学差异。②给予大鼠血尿安2次，给药当天（d1），血尿安40g原生药/kg能显著减少大鼠的摄食量；给药后第7d，血尿安20g原生药/kg组AST、MPV、MCHC、PDW均显著下降，血尿安20、10g原生药/kg组CREA降低；给药第14d，血尿安40g原生药/kg组MO%升高，血尿安20g原生药/kg组A/G、Na+均升高，CK降低，10g原生药/kg组肝指数降低。结论：小鼠口服血尿安最大耐受量≥107.22原生药g/kg，大鼠口服血尿安最大耐受量≥40原生药g/kg。
        【关键词】血尿安胶囊；小鼠；大鼠；毒性
        【中图分类号】R05                      【文献标识码】B                   【文章编号】2095-1752（2019）36-0199-04
        1.材料和方法
        1.1 实验药物
        血尿安胶囊内容物：由肾茶、小蓟、白茅根水提物浸膏和黄柏生粉按处方（肾茶400，小蓟600，白茅根800及黄柏120）比例混合而成，其中肾茶、小蓟和白茅根1g水提物浸膏粉相当于5.89g原生药，1g黄柏生粉相当于原生药量1g。由云南理想药业有限公司提供，批号20131012。临用前肾茶、小蓟、白茅根水提物浸膏和黄柏生粉按2.55∶1的比例，用0.5%CMC-Na溶液配制成所需浓度的混悬液备用，本实验剂量按原生药g/kg计算。CMC-Na，批号20130320，成都市科龙化工试剂厂。
        1.2 动物
        KM小鼠，SPF级，由四川省中医药科学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK（川）2013-19。SD大鼠，SPF级，由四川省中医药科学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK（川）2013-19。
        1.3 试剂
        戊巴比妥钠（Sigma公司）；PT测定试剂盒，APTT测定试剂盒均由四川迈克生物科技股份有限公司公司提供；TP试剂盒，CK试剂盒，TC试剂盒，TG试剂盒，ALT试剂盒，AST试剂盒，GLU试剂盒，BUN试剂盒，Alb试剂盒，Crea试剂盒，Tbil试剂盒，ALP试剂盒均由四川迈克生物科技股份有限公司提供；血液细胞稀释液（Sysmex公司，）；血清离子浓度测定HC-988 A标准液，HC-988 B标准液均由深圳航创医疗设备有限公司提供；氯化钠注射液（昆明南疆制药有限公司）。
        1.4 仪器
        2000i血液分析仪（Sysmex）；HC-9883电解质分析仪（深圳航创）；CD-4001半自动血凝分析仪（德国蓝波）；7020全自动生化分析仪（HITACHI）；TD5Z台式离心机（湖南凯达）；JY10001电子天平（良平仪器）；JA1003A电子天平（上海精天）。
        1.5 方法
        1.5.1血尿安胶囊小鼠急性毒性实验取40只KM种小鼠，初始体重18～22g，♀♂各半，禁食不禁水12h后，按体重随机分为对照组和血尿安组，对照组灌胃给予0.5% CMC-Na溶液，血尿安组以最大浓度（0.894 g原生药/ml）、最大体积（0.4 ml/10g.bw）给药量灌胃，间隔4h灌胃一次，共三次，累积给药量为107.22原生药g/kg。观察并记录可能出现的毒性反应及死亡情况，连续14d。第14d处死小鼠，解剖进行大体观察，并取心、肝、脾、肺、肾脏称重，计算脏器指数。
        1.5.2血尿安胶囊大鼠完全急性毒性实验取80只SD大鼠，初始体重160g-200g，♀♂各半，按体重随机分为对照组、血尿安40g/kg、20g/kg、10g/kg剂量组，20只/组。所有大鼠禁食不禁水12h后分别灌胃0.5%CMC-Na溶液或相应剂量药物，上、下午间隔6h给药，共两次。于d0（给药前）、d1（给药当天）、d2、d3、d7、d14称大鼠体重，并测定d0、d1、d2摄食量，观察各组动物出现的毒性反应情况。并于d4和d14各取50%的动物戊巴比妥钠溶液（40mg/kg，i.p.）麻醉取血后进行系统检测：大体解剖、血清生化学检测、血液细胞学检测、主要脏器称重并计算脏器指数。
        2.结果
        2.1 血尿安胶囊小鼠急性毒性实验给予血尿安3次（间隔4h），仅给药当天见腹泻及自发活动减少，给药组与对照组脏器指数未见统计学差异，小鼠口服血尿安最大耐受量≧107.22g/kg，见表1。
        2.2 血尿安胶囊大鼠完全急性毒性实验给药当天（d1），高剂量能显著减少大鼠的摄食量。给药第7d，中剂量组AST、MPV、MCHC、PDW均显著下降，中、小剂量组CREA降低。给药第14d，大剂量组MO%升高；中剂量组A/G、Na+均升高，CK降低；小剂量组雌性大鼠体重降低，肝脏系数降低。大鼠口服血尿安最大耐受量≧40g/kg。见表2～7。
        3.讨论
        小鼠给药当天见腹泻及自发活动减少，第2d恢复正常；大鼠给药当天见高剂量组摄食量显著减少，第2d恢复正常，此现象多为最大给药体积、最大给药浓度所致。大鼠给药第7d：血尿安20g/kg组AST、CREA、MPV、MCHC及PDW显著降低，血尿安10g/kg组CREA降低，但消化系统其他指标、肾功能其他指标、血液系统其他指标及肝脏系数、肾脏系数无异常，故认为该指标的变化无生理学意义。给药第14d：血尿安40g/kg组MO%升高，血尿安20g/kg组A/G、Na+升高、CK降低，血尿安10g/kg组♀大鼠体重及肝脏系数降低，上述指标的变化缺乏剂量-时间-效应的依赖关系，提示血尿安胶囊对大鼠的血液、生化功能及脏器系数无明显影响。本实验测得小鼠口服血尿安胶囊最大耐受量≧107.22原生药g/kg，大鼠口服血尿安胶囊最大耐受量≥40原生药g/kg。

        【参考文献】
        [1]国家食品药品监督管理局.《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则[Z]GPT2-1》.2005.
        [2]唐大轩,熊静悦,梁娅君,王尧,王莉,牟道华,向晓雪,谭正怀.川楝子对大鼠完全急性毒性作用研究.时珍国医国药,2011,10:2387-2389.

        表2 血尿安胶囊对大鼠完全急性毒性实验体重的影响（x-±s，g）


        表5 血尿安胶囊对大鼠完全急性毒性实验血清生化学指标的影响（x-±s）


        续表6   血尿安胶囊对大鼠完全急性毒性实验血液细胞学指标的影响（x-±s）