材料与方法
仪器
（1）日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪（带紫外检测器）。
（2）AS-A型系列超声波清洗器（天津奥特赛恩斯化器有限公司）。
（3）超纯水机（台湾艾柯仪器公司）。
（4）分析天平，感量0.1mg。
（5）高速匀浆机（转速能达到10000r/min）。
（6）往复机械振荡器（振荡频率能达到100次/min，振幅能达到20mm）。
（7）离心机（转速能达到5000r/min）。
（8）真空抽滤泵及配套玻璃抽滤装置。
试剂
（1）水，符合GB/T6682中一级水的要求。
（2）甲醇（色谱纯）。
（3）冰乙酸（分析纯）。
（4）乙酸铵（分析纯）。
（5）对羟基苯甲酸甲酯，纯度99.9％。
（6）对羟基苯甲酸乙酯，纯度99.9％。
（7）对羟基苯甲酸丙酯，纯度98.0％。
（8）对羟基苯甲酸丁酯，纯度99.5％。
试剂配制
（1）乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g优级纯乙酸铵用水溶解后定容至1000mL，经0.45μm水系滤膜用真空泵抽滤。
（2）乙酸-乙酸铵缓冲溶液
准确称取3.855g乙酸铵于100mL烧杯中，加入3.0mL冰乙酸，用水溶解后转移至1000mL容量瓶中定容至刻度。
（3）萃取溶剂
甲醇和乙酸-乙酸铵缓冲溶液按体积比1：1混合。
色谱条件
色谱柱：Inertsil ODS-3 5μm 4.6×250mm（日本岛津），流动相：甲醇：乙酸铵=60：40，总流速1.2mL/min，柱压20MPa，柱温40℃，检测波长256nm，进样量20μL，采集时间20min。
检测部分
标准溶液配制
（1）一级标准储备液。
分别用100mL烧杯精确称取0.1mg对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯，用甲醇溶解，转移至100mL容量瓶中摇匀，定容至刻度，在2℃—8℃下密封保存，有效期为6个月。
（2）二级标准储备液。
准确移取2.5mL一级标准储备液至25mL容量瓶中，用萃取溶剂定容至刻度并摇匀，在2℃—8℃下密封保存，有效期为1个月。
（3）标准工作溶液。
分别准确移取0.10mL、0.25mL、0.05mL、1.00mL、2.50mL二级标准储备液至10mL容量瓶中，用萃取溶剂定容至刻度，在2℃—8℃下密封保存，有效期为1周。
五个级别的标准工作溶液经0.45μm有机滤头过滤后上机检测，绘制标准曲线。
根据对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯纯度不同，最后配制好的标准工作溶液见表1。
表1 五个级别标准工作溶液
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将五个级别的标准工作使用液按仪器设置好的色谱条件上机检测，以峰面积为纵坐标，以各组分的含量为横坐标，得到标准曲线，线性回归方程、相关系数、保留时间见表2。
表2 线性回归方程、相关系数、保留时间
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样品测定。精确称取1g样品于150mL锥形瓶中，准确加入50mL萃取溶剂，超声萃取20min，取1mL提取液用有机滤头过滤后上机检测，采用外标法与标准曲线比较定量。待测试样待测组分浓度在标准曲线线性范围内，超出线性范围则应稀释后再进样分析。
结果计算
计算公式：X=
式中：
X——试样中待测组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
c——由标准曲线得出的试样液中待测物的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
V——试样萃取液体积，单位为毫升（mL）；
m——试样质量，单位为克（g）；
样品测定回收率
在三份不同的烟用料液中分别加入对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯各2mg/kg进行加标回收实验，回收率在95.0％—98.5℃，见表3。
表3 样品回收率结果
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结果与讨论
（1）样品处理萃取时可用高速匀浆机在10000r/min转速下匀浆2.5min；或用振幅为20mm的往复式振荡器100次/min频率振荡萃取40min。
（2）难过滤样品先在5000r/min转速离心5min后取上清液经0.45μm有机滤头过滤。
（3）国家烟草行业标准YC/T423采用梯度洗脱，方法设置复杂，采集时间较长（46min）。而本人采用不同的流动相可以实现等度洗脱分析，方法设置简单，分离效果好，采集时间短（20min），定量测定的灵敏度和准确度高，完全能满足YC/T423标准要求，非常值得本专业人士借鉴。