摘要:本文采用PCR法对白粉病的分子生物学进行了解析，并提取病原菌的总基因组DNA，用此方法扩增其核糖体基因内转录间隔区的保守序列并测量序号，利用聚类和MEAG软件建立系统发育树，推引出系统发生关系，运用分子来判定该菌株，并与其它白粉病菌株做了亲缘对比。从结果中可以看出，本研究所测序的姜黄的序列与土耳其菊芋的序列将近全部相似。本实验的创新之处在于对白粉病进行鉴定，并从分子水平解析其进化关系。
关键词: 百日菊；白粉菌；检测；解析序列
1准备材料和实验方法
1.1试验所需材料
从某实验的林场内选取白粉菌样本，并给该样本制定编号1，该样本来源于主体植物百日菊。选用专门的试剂盒来装取白粉菌基因组DNA。
1.2采取的实验方法
1.2.1收集样品白粉菌
收集白粉菌可以运用一定的方法，采用刀片轻轻地从叶片表层刮下该物质的混合物，放入提前准备好的离心管内，把该样品放在零下冰箱内储存。
1.2.2提取基因组DNA
在收集百日菊的白粉菌基因组的时候，可以运用KIT法:①把少量的白粉菌菌丝与液氮融合在一起进行研磨;②加入一定计量的缓冲液与RNA酶，进行摇晃混匀大致1分钟，放在室温内10min;③在溶剂里加入另外一种缓冲剂，使其均匀混合在一起，摇晃时间与上面一样，涡旋摇晃1min,12000r / min 离心 5 min，就可以把上清液移到新离心管内，重复操作这个环节;④把0.7倍多的异丙醇与上清液进行均匀混合，就会形成絮状的基因组，把沉淀物留下;⑤把含量70%的乙醇适当加入，晃动5秒，重复操作此步骤;⑥把盖子打开，倒着放置在室内10分钟进行晾干，把剩余的乙醇晾干;最后放入化学物品把DNA溶解掉，在这个过程中可以进行反复颠倒使其均匀混合，可以帮助提高溶解速度，就会得到基因组溶液。
1.2.3解析序列
可以把得到的基因组序号输入到DNA序列数据库，查找对比结果，可以从指定的DNA序号数据库中调取22种白粉菌，对其进行ITS保守序列，运用专业的多重序列比对程序升级版本，对测序白粉菌的结果以及不同白粉菌的ITS序号建立发育数系统，可以把该系统进行变化的关系演示出来。
2实验结论与分析
2.1提取基因组DNA与 PCR扩增的结果
用通用引物扩增的目的片段经凝胶回收试剂盒回收纯化，电泳检测结果( 图 1) 。
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2.2解析白粉菌ITS序列进化树构建结论
把所得到的序列用BLAST来查找其序列，可以从DNA序列数据库中抽取一部分植物的白粉菌的序列，对此次实验的测量序列的结果对比开展解析。将两者序号的白粉菌进行比较，结果显示两者数据接近。就说明对比的百日菊中白粉菌有相近亲缘关系。另外，以上所调取的白粉菌ITS序列部分区段之间有很高的一致性，因此，该区段具有保护功能，确保白粉菌性状稳定遗传。可以运用专门的软件来解析处理这些白粉菌，构建系统发育树。
2.3实验结果表明
这些白粉菌的ITS序列可以形成三个比较大的分支，此次实验所探究测量百日菊的白粉菌序列号，跟土耳其菊芋等植物白粉菌的ITS具有相似性。实验结果表明，本次探究白粉菌菌种与其他白粉菌有很近的亲缘关系，是由本地百日菊上面的白粉病所引发，可以用分子水平来考证。
3讨论
传统的白粉病根据不同寄主种类的形态特性、危害症状和显微观察进行对比和分类。只有对很多样本测量和数据进行比较，才能得出最终结果。这种方法不仅浪费时间和精力，而且由于研究工作人员的主观因素，往往造成片面或者错误的结果论述。许多白粉病由于环境条带对辅助丝的精细特征的影响不同，就会造成判定的效率和正确率偏低。PCR是诊断植物是否出现病害的一种技术，该技术很有效果。跟传统的检验方法相比，此技术具有速度快、准确性高等优点。其序列在不同真菌中高度保守，但物种间存在变化现象。利用ITS技术探究真菌的系统发育和检验已成为一种有效而成熟的方法。有人通过对甘蓝型油菜白粉病DNA片段的提取和分析，从分子水平上判断该油菜白粉病的病原菌。还有的人通过对某地区4种白粉病ITS序列的解析，建立了系统发育树，证明ITS序列可用于白粉病属内间的系统发育和分类学解析。
运用PCR针对具有特异性的引物进行扩大，对百日菊上白粉病DNA进行了扩增和序列测定。将测序结果与BLAST上传的该菌株进行比较，筛查出类似或相似程度高的菌株，从而构建出系统发育树。探究结果为该病原的检验、类别区分和判定提供了理论依据，对白粉病的监督测量具有重要意义。
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