【摘要 】目的 探究c-erbB-2和MTA1蛋白的表达与贲门癌的浸润、转移和分化程度之间的关联，以及c-erbB-2和MTA1蛋白表达的相关性。方法 采用免疫组织化学方法对60例贲门癌组织和18例癌旁组织中c-erbB-2和MTA1蛋白的表达情况进行检测。结果 c-erbB-2的表达与贲门癌的浸润、转移呈正相关，与分化程度呈负相关(P值分别是0.018、0.040、0.016)；MTA1的表达与贲门癌的浸润深度无显著相关性，与贲门癌的淋巴结转移呈正相关，与分化程度呈负相关(P值分别是0.045和0.039)。Spearman等级相关分析显示，c-erbB-2与MTA1的表达呈显著正相关(rs = 0.276，P<0.05)。结论 c-erbB-2的高表达能促进贲门癌的生长，增强贲门癌侵袭和转移的能力；MTA1的高表达促进贲门癌的淋巴结转移；c-erbB-2的表达与MTA1的表达呈显著正相关。
【关键词】贲门癌；c-erbB-2；MTA1；浸润；转移；分化；相关性；免疫组织化学
Clinicopathological study of c-erbB-2 and metastasis-associated protein 1 (MTA1) expression in gastric cardia cancer
【Abstract】Objective To detect the expressions of c-erbB-2 and MTA1 protein, and investigate their relationship in gastric cardia cancer. Methods SP immunohistochemical technique was used to detect the expressions of c-erbB-2 and MTA1 protein among the 60 gastric cardia cancer samples and 18 cases of adjacent mucoca tissues. Results C-erbB-2 over-expression was significantly correlated with the depth of invasion, lymphatic metastasis and was inversely correlated with the differentiation of gastric cardia cancer(P<0.05). MTA1 over-expression indicated there was no relationship in the depth of invasion of gastric cardia cancer, and was significantly correlated with lymphatic metastasis, inversely correlated with the differentiation(P<0.05). There was an positive correlation between MTA1 and c-erbB-2 expression, by using the Spearman Correlation test to analyse the data(rs = 0.276, P<0.05). Conclusion Over-expression of c-erbB-2 and MTA1 might play an important role in invasion and metastasis of human gastric cardia cancer. A positive correlation was found between MTA1 and c-erbB-2 expression.
【Key words】Gastric cardia cancer; C-erbB-2; MTA1; Invasion; Metastasis; Differentiation; Correlation; Immunohistochemistry
贲门癌的侵袭、转移是其主要的致死原因，是一个复杂的、多阶段的、长期的病变过程，涉及多个基因的改变。c-erbB-2和MTA1基因被认为与多种恶性肿瘤（包括胃癌、肝癌和乳腺癌等）的侵袭和转移密切相关。本研究采用SP免疫组织化学方法，检测了60例贲门癌组织和18例癌旁组织中c-erbB-2和MTA1的表达情况，分析它们与贲门癌的侵袭和转移等临床病理特征的关系；分析c-erbB-2的表达和MTA1的表达是否有相关性，并试图揭示其意义。
1 材料与方法
1．1 标本选择及切片 选取广东省揭阳市人民医院病理科60例贲门癌标本为实验组，以18例癌旁组织为对照组。全部病例均经外科手术切除和病理检查,获取详细资料。所有标本经常规甲醛固定、石蜡包埋。每例组织蜡块4微米连续切片10张, 1张切片ＨＥ染色作光镜下诊断复查, 另2张切片作c-erbB-2和MTA1免疫组织化学染色，其余备用。
1．2 临床资料 实验组贲门癌标本60例为揭阳市人民医院1998年~1999 年间的手术标本，其中男46例，女14例；最大年龄73岁，最小年龄43岁。根据2002年WHO关于胃肿瘤的新分类[1]将其分为乳头状腺癌、管状腺癌、未分化癌等。其中，腺鳞癌1例，未分化癌2例，乳头状腺癌6例，管状腺癌51例。为了方便统计，将乳头状腺癌与高分化管状腺癌列入高分化腺癌组，将未分化癌列入低分化腺癌组,并将高分化腺癌组与中分化腺癌组合并为一组。
1．3 试剂及来源 一抗分别为Santa Cruz公司的浓缩型山羊抗人MTA1多克隆抗体（工作浓度1：200）以及福州迈新公司的即用型鼠抗人c-erbB-2单克隆抗体。即用型SP超敏试剂盒购自福州迈新公司，严格按SP法步骤操作。用PBS液代替一抗作为阴性对照，已知阳性标本作阳性对照。
1．4 免疫组织化学染色 采用SP法，常规脱蜡至水化，以枸橼酸盐缓冲液微波炉抗原修复法修复抗原，其它步骤均严格按照说明书操作。
1．5 结果判断 c-erbB-2阳性染色主要定位在细胞膜，部分细胞胞浆也有阳性表达，呈棕黄色颗粒状；MTA1蛋白主要在细胞核表达，部分细胞胞浆也呈阳性反应，呈棕黄色颗粒状；采用Barnes半定量法[2]进行阳性结果判定，具体如下：阳性细胞数量计0～4分: 无计0分, ≤25%计1分, 26%～50%计2分, 51%～75%计3分, >75%计4分。染色强度计0～3分: 无色计0分，浅黄色计1分, 棕黄色计2分, 棕褐色计3分。将两项指标评分相乘, 根据总分分为四级: 即0分为阴性（-）, 1～2分为弱阳性（+）, 3～4分为阳性（++）, 大于4分则为强阳性（+++）。
1．6 统计学处理 在SPSS10.0统计软件包上行χ2检验和Spearman等级相关分析。
2 结果
2.1 c-erbB-2和MTA1表达与贲门癌侵袭、转移以及分化程度的关系
如表1所示，在60例贲门癌标本中有31例c-erbB-2表达阳性，阳性表达率是51.7%，显著高于癌旁组织22.2%的阳性表达率（P = 0.028）。其中，浸润浆膜层组c-erbB-2的阳性率为62.5%，浸润肌层组c-erbB-2的阳性率为30.0%，两组相比较具有显著性差异（P = 0.018）；有淋巴结转移组c-erbB-2的阳性率为63.6%，无淋巴结转移组c-erbB-2的阳性率为37.0%，两组相比较具有显著性差异（P = 0.040）；低分化腺癌组c-erbB-2的阳性率为73.7%，高、中分化腺癌组c-erbB-2的阳性率为40.0%，两组相比较具有显著性差异（P = 0.016）。
表1 c-erbB-2表达与贲门癌浸润、转移以及分化程度的关系
c-erbB-2的表达
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如表2所示，在60例贲门癌标本中有33例MTA1表达阳性，阳性率是55.0%，显著高于癌旁组织11.1%的阳性率（P = 0.001）。其中，浸润浆膜层组MTA1的阳性率为55.0%，浸润肌层组MTA1的阳性率为55.0%，两组相比较无显著性差异；有淋巴结转移组MTA1的阳性率为66.7%，无淋巴结转移组MTA1的阳性率为40.7%，两组相比较具有显著性差异（P = 0.045）；低分化腺癌组MTA1的阳性率为73.7%，高、中分化腺癌组MTA1的阳性率为45.0%，两组相比较具有显著性差异（P = 0.039）。
表2 MTA1表达与贲门癌浸润、转移以及分化程度的关系
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2.2 c-erbB-2与MTA1表达的相关性
表3 c-erbB-2表达与MTA1表达的相关性
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结果如表3所示，在c-erbB-2阴性表达的29例贲门癌组织中，MTA1的阳性率是24.1%（7/29），在c-erbB-2阳性表达的31例贲门癌组织中，MTA1的阳性率是83.9%（26/31）,统计学分析结果显示两者的表达密切相关（?2 = 21.600，P = 0.000）。Spearman等级相关分析提示c-erbB-2表达与MTA1表达呈正相关（rs = 0.276, P<0.05）。
2.3 c-erbB-2/MTA1联合表达与贲门癌浸润和转移的相关性
在22例c-erbB-2(-)/MTA1(-)的贲门癌标本中，有7例浸润至浆膜层（31.8%），5例发生淋巴结转移(22.7%)；而在26例c-erbB-2(+)/MTA1(+)的贲门癌标本中，有19例浸润至浆膜层（73.1%），20例发生淋巴结转移(76.9%)。分别比较两组浸润至浆膜层的阳性率以及淋巴结转移率，均有显著性差异，P值分别是0.004和0.000。
3 讨论
3.1 贲门癌中c-erbB-2的表达及意义
许多研究显示，c-erbB-2原癌基因的过表达与乳腺癌、卵巢癌和胃癌等多种肿瘤密切相关[3-6]。本实验中，贲门癌组织c-erbB-2的阳性率显著高于癌旁粘膜组织，说明c-erbB-2的激活使细胞增殖失控，呈活跃增值状态。低分化腺癌组c-erbB-2的阳性率为73.7%，高、中分化腺癌组c-erbB-2的阳性率为40.0%，两组相比较具有显著性差异，说明c-erbB-2的高表达可能阻止贲门癌的分化成熟，与Piffanelli A的报道一致[4]。浸润肌层组c-erbB-2的阳性率与浸润浆膜组的阳性率分别为30.0%和62.5%，两者相比具有显著差异；无淋巴结转移组与有淋巴结转移组c-erbB-2的阳性率分别为37.0%和63.6%，两者相比具有显著差异，c-erbB-2的表达与贲门癌的侵袭、转移呈正相关（P<0.05），说明c-erbB-2的高表达增强了贲门癌细胞的浸润和转移的能力。此结果与Piffanelli A的报道一致[4]。
3.2 贲门癌中MTA1的表达及意义
本研究采用免疫组织化学方法，测定了MTA1蛋白在60例贲门癌和18例癌旁黏膜中的表达，结果表明，MTA1蛋白主要表达于细胞核和细胞浆，这与Moon WS[7]的报道一致。实验组MTA1阳性率（55.0%）显著高于对照组(11.1%),说明MTA1在贲门癌的发生中可能起作用。淋巴结转移组MTA1的阳性率(66.7%)显著高于无淋巴结转移组(40.7%)，说明MTA1的高表达能促进贲门癌的淋巴结转移,这与Toh Y[8]对食管癌及Moon WS[7]对肝癌的研究结果一致。本研究还表明，高、中分化腺癌组MTA1的表达(45.0%)显著低于低分化腺癌组(73.7%)MTA1的表达（P = 0.039），这与Toh Y[8]等人对食管癌研究结果一致，说明MTA1有可能阻止癌细胞分化成熟，有待于进一步研究和分析。本实验的结果表明，浸润肌层组MTA1的阳性率（55.0%）与浸润浆膜层组（55.0%）无显著性差异，这与诸多学者的研究报道不一致，这可能与样本量的大小有关。另外，本实验采用的是针对石蜡切片的免疫组织化学染色来研究MTA1蛋白的表达，而很多学者为mRNA水平的研究，研究方法的差异可能导致结果不一致。
3.3 c-erbB-2与MTA1表达的相关性
本实验的结果显示，随着c-erbB-2表达的增高，MTA1表达也随之增高，两者呈显著正相关，c-erbB-2(-)/MTA1(-)组浸润至浆膜层者较少，发生淋巴结者也较少，而c-erbB-2(+)/MTA1(+)组浸润至浆膜层多，易发生淋巴结转移，两组相比具有显著性差别。本研究认为， c-erbB-2可能对MTA1蛋白起上调作用，两者在贲门癌的侵袭和转移中起联合作用。因此联合检测c-erbB-2/MTA1，可以较客观、准确地反应贲门癌的侵袭和转移的趋势，为贲门癌的治疗和预后提供依据。
参考文献
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作者简介：谢海健(1979-),江西省赣州市南康区人，讲师，硕士研究生，从事医学教育和肿瘤研究工作。