摘要:选择几种基于不同原理的鉴定设备对药品中出现的污染微生物进行分析,其中用到的原理既包括传统的反应技术又囊括了先进的生物技术。分别利用基于这两类原理的设备进行菌株间的鉴定对比。快筛设备A、微生物全自动生化检定仪B以及基因测序仪C分属于不同类别的设备,三者各有千秋,本文就以三类检测设备为主展开讨论,希望能够使其在合适的场合发挥最大的作用。
关键词:自动化鉴定;原理;微生物
要想保障用药的安全性,现代化鉴定技术的应用效果是不可忽视的,利用该技术就可以在较短时间内准确完成微生物的鉴定,效果突出。本文所涉及的鉴定设备的原理基本上都离不开生理生化反应或者分子生物学技术。这是两种截然不同的原理技术,前者代表传统,后者代表先进。本文探究的主要设备有快筛设备A、微生物全自动生化检定仪B以及基因测序仪C,其中B代表传统原理,其余两者是先进技术的代表。A设备在特定细菌鉴定中占据优势,但这也说明其适用范围比较狭隘,同时还要支付高额的成本费用,这类设备适合应用于急快检的情况。B设备可以实现大部分格兰阳性菌、格兰阴性菌的鉴定,且鉴定准确性较高,鉴定费用居中,但是面对芽孢杆菌或者酵母菌时,检测效果不甚理想。C设备无论是对真菌还是细菌的鉴定都处于较优的水平,但是费用也与鉴定质量成正比。三者各有优劣,我们在实际应用时应准确把握其特征,将其放在最为合适的情况中。
1仪器与材料
1.1仪器设备
实验场所选在Ⅱ级生物防护实验室,同时需要用到30%外排生物安全柜、压力蒸汽灭菌器、快筛设备A、微生物全自动生化检定仪B以及基因测序仪等。
1.2试验菌株
大肠埃希菌Escherichiacoli[CMCC(B)44102,ATCC 8739,HY1]、金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus [CMCC(B)26003,ATCC6538,HY2]、枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis [CMCC(B)63501,ATCC 6633,HY3]、沙门菌Salmonellagroup[CMCC(B)50094,ATCC 14028,HY4]、铜绿假单胞菌Pseudo-monasaeruginosa [CMCC(B)10104,ATCC 9027]等。生孢梭菌[CMCC(B)64941,ATCC 19404]上述菌株中HY打头的菌株均为本人在环境监测中分离所得,其余菌株均以正当购买方式所得。
2方法
2.1菌液的制备
2.1.1细菌组
首先拿到所需菌株的新鲜培养物,将其放在10毫升事先准备好的培养基-胰酪大豆胨肉汤中,之后在温度为35°的条件下培养为期24小时;生孢梭菌的培养需要用到硫乙醇酸盐流体培养基,将厌氧工作站的温度设为35度,从中培养24小时。
2.1.2真菌组
将要培养的菌株放在沙氏葡萄糖液体培养基中,在温度条件为25度的情况下继续培养24小时。
2.2鉴定
选择出单个菌落,然后将其放在显微镜下进行细致观察,首先需要分析是否存在杂菌,之后分别利用两类或者三类设备对菌落进行鉴定分析,比较各设备的特点。
3结果与讨论
3.1细菌鉴定的具体分析
A设备可以用来鉴定微生物致病菌,但是利用该设备得到的信息非常有限,只能得到检出状态,如已检出或未检出,这一设备不能为我们提供相似度的参考,并且该设备的鉴定范围较小,在本实验的众多菌株中,只对黄金色葡萄球菌、沙门菌群这两种菌株起作用。想要验证设备A对大肠O157的检测结果的可靠性,我们同时还利用相对应的试剂盒进行了鉴定。
3.1.1需氧菌及兼性厌氧菌
枯草芽孢杆菌组同样有三种来源的菌株,分别应用不同的原理设备进行测定,结果显示B设备虽然对其的鉴定能够达到所属的水平,但是检测准确性不是特别高,C设备鉴定的准确性要比前者更高。
大肠埃希菌组存在三种来源的菌株,我们将采用三种方式对其进行鉴定。根据所得数据显示,设备A的大肠O157试剂盒在分析三种来源的菌株后,没有出现偏差,结果比较精确,显示结果均为未检出。B设备与C设备的检测结果一致性较高,准确率也非常理想。
沙门菌组中同样有三种来源的菌株,分别为CMCC(B)50094、ATCC 14028以及HY4,采用三种方式对其进行鉴定,结果显示A、B、C三种设备鉴定结果均保持一致,但是A设备不提供相似度方面的信息,其余两种设备的相似度高达99%以上,准确率非常高。在鉴定过程中B设备获得了沙门群的结果,但是如果想要更为深入地探究其亚种,则还要再进行血清试验,由于本次实验设备设施水平有限,并未深入进行鉴定。C设备的鉴定水平已经到了亚种。
探究铜绿假单胞菌组的情况,这里边存在两种来源的菌株,采用设备B以及设备C对其进行鉴定,结果显示两种设备鉴定结果有着高度的一致性。
3.1.2厌氧菌
生孢梭菌组中有两种来源的菌株,同样采用设备B以及设备C对其进行鉴定,结果显示两种设备鉴定结果有着高度的一致性。
3.2真菌中酵母菌类的鉴定考察结果
当前市面上存在的大部分类似A、B、C这样的设备都无法实现存在于真菌中的霉菌,因此本实验仅从酵母菌的鉴定方面进行了比较说明。从这方面的鉴定中,我们发现基于传统生理生化反应的B设备在鉴定效果上还是略差一些。
4小结
4.1设备的优势
我们利用A、B、C三种设备分别进行了需氧菌及兼性厌氧菌、厌氧菌以及酵母菌的鉴定谈论。在实际实验过程中我们可以明显感受到三种设备的不同之处,首先是A设备,它最为突出的优势就是快速、有效,此外还具有操作便捷的特点,适用于急需结果的样本鉴定;B设备是传统生理生化反应的代表设备,它在革兰阳性、阴性菌的鉴定方面具有突出优势,大部分情况下能够鉴定到种,并且该设备的鉴定成本较为合理,适用于日常鉴定。C设备基于分子生物学测序技术,是先进技术的重要代表,它的优势在于细菌与真菌的鉴定,通常情况下可以达到亚种水平,这种设备在确定关键样品的结果方面还是占有一定优势的。
4.2目前三种设备的主要问题及改进对策
A设备在检测范围方面受限严重,其能够检测的样本种类不多,并且只能在细菌的鉴定方面起到不错的效果,为了使其发挥更大的作用,我们可以根据其特点将其安排在特定项目的检测领域,对于设备的检测情况也可以跟厂家进行实时探讨,希望能够帮助厂家找到不足之处,将设备变得更加尽善尽美,特别是在检测范围上,希望能够有所改进。
微生物自动化鉴定仪B在芽孢杆菌、酵母菌鉴定方面的效果非常差,除了只能鉴定到属之外,还具有很大的不稳定性,因此可以将此类数据进行汇总归纳,将得到的数据结果反馈给厂家,使其在设备改进时有较为可靠的数据支持。。
基因测序仪C在鉴定准确性以及鉴定范围方面没有较多可指摘的地方,唯有一点,鉴定成本太高,针对这一问题,我们可以先将不着急要鉴定结果的菌株累计在一起,累积到一定数量后整体进行鉴定,如此能够节省一部分不必要的浪费。
总结:
通过上述讨论,我们对各类设备都有了一个清楚的认知,无论是传统技术的应用还是先进技术的实施都各有自己的优势所在,我们需要做的是灵活运用各类设备的长处,尽量规避设备的不足之处,在实际实验过程中需要牢牢遵守这一原则,取长补短,方能真正发挥出各类设备的作用,进而帮助我们在药品控制菌方面提供更为可靠的参考依据。
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