黄剑伟1 饶金2 李宁3 涂智毅4
（1 桂林医学院附属医院；广西桂林541001；2广东省人民医院；广东广州510080；3桂林医学院第二附属医院； 广西桂林541199；4肇庆人民医院；广东肇庆526000）
【摘要】目的：探讨支气管哮喘（简称哮喘）患者气道IL-4、periostin的表达与气道重塑严重程度的关系。方法：筛选2015年1月-2019年12月符合实验研究的哮喘合并肺癌患者作为实验组( n=12)、非哮喘肺癌患者作为对照组( n=12) 。检测气道中IL-4、periostin的表达。比较两组患者气道IL-4、periostin的表达和肺功能指标的差异水平。分析哮喘组IL-4、periostin与气道重塑、肺功能差异的关系。结果：（1）与对照组对比，实验组基底膜厚度、胶原蛋白沉积厚度、杯状细胞计数、成纤维细胞计数明显增高，FEV1%pred、FEV1/FVC%明显降低，P<0.05。（2）与对照组对比，实验组IL-4、periostin的表达病例数明显增多，P<0.05。（3）实验组IL-4、periostin与气道重塑呈明显正相关关系，与肺功能指标呈负相关关系，P<0.05。结论：哮喘患者气道IL-4、periostin的表达与气道重塑严重程度的关系密切，呈正相关关系。
【关键词】哮喘；气道；IL-4；periostin；气道重塑；严重程度；关系
支气管哮喘是一种常见的气道炎症性疾病，气道重塑是导致其发病的很重要的因素，对哮喘患者的肺功能造成严重的影响[1]。目前气道重塑的机理尚未完全明白，已经多种细胞因子或者受体参与到气道重塑过程。气道病变是导致哮喘发病的主要因素，其更是研究呼吸道疾病的最理想材料。本研究通过回顾性分析，研究合并哮喘的肺癌患者气道IL-4、periostin的表达水平与气道重塑严重程度的关系。
1.资料与方法
1.1基本资料
1.1.1实验分组
实验组：筛选2015年1月-2019年12月符合实验研究的哮喘合并肺癌的手术患者作为观察组( n=12)，观察组男患者8例，女患者4例，年龄平均在56.18±5.23岁。
对照组：筛选2015年1月-2019年12月符合实验研究的非哮喘肺癌的手术患者作为对照组( n=30)。男患者7例，女患者5例，年龄平均在56.28±5.32岁。两组患者基本资料无明显差异，P>0.05。
1.1.2人肺组织的获得
取自桂林医学院附属医院和广东省人民医院胸外科肺癌行肺切除手术的人肺组织。以上人体标本的收集经桂林医学院附属医院、广东省人民医院伦理委员会批准，在取人体组织标本时经患者同意并签署知情同意书。
兔抗人IL-4多克隆抗体（上海西唐生物科技有限公司）; 兔抗人periostin多克隆抗体(博士德生物有限公司)；STEMI2000型体视显微镜和AXIOVERT40型倒置显微镜；SW-CJ-2FD型超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司)；显微手术器械1套。
1.2方法
1.2.1检测气道重塑指标
两组实验对象经外科手术，切除包括肺癌组织在内的相关肺叶组织。本实验选取完整支气管横断面，直径为2-3mm，标本组织需距离癌灶至少5cm，肉眼观察无癌变组织。采用400倍光镜观察患者HE染色后的组织切片，选择支气管粘膜上皮，计数杯状细胞的数量；选择粘膜下肌层计数成纤维细胞的数量。镜下应用测微尺测量基底膜厚度，由支气管黏膜上皮下的基底部至网状层。镜下应用测微尺测量胶原蛋白沉积厚度。
1.2.2检测气道中IL-4、periostin
切片常规脱蜡、水化，高压抗原修复，去除内源性过氧化物酶，按试剂盒说明书进行。采用PV6000聚合物二步法，试剂盒包括兔抗人IL-4多克隆抗体、兔抗人periostin多克隆抗体，以PBS代替一抗作为阴性对照。IL-4、periostin均为胞质表达，每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞百分率。阳性表达为细胞染色呈棕黄色，阴性表达为细胞不着色。免疫组化评分=染色强度评分X阳性细胞百分率评分。
1.3观察指标
1.3.1气道重塑指标、肺功能指标
比较实验组和对照组气道重塑指标、肺功能指标。其中气道重塑指标包括基底膜厚度、胶原蛋白沉积厚度、杯状细胞计数、成纤维细胞计数；肺功能指标包括FEV1%pred、FEV1/FVC%。
1.3.2 IL-4、periostin
比较实验组和对照组患者IL-4、periostin的表达。分析实验组IL-4、periostin与气道重塑指标、肺功能指标的关系。
1.4统计学方法
采用SPSS20.0统计学软件进行统计分析，对正态分布的数据进行t检验，对非正态分布的数据进行卡方检验，采用平均数±标准差的形式表示数据的分布趋势，P<0.05表示数据的比较差异具有统计学意义。
2.结果
2.1比较两组患者气道重塑指标、肺功能指标
与对照组对比，实验组基底膜厚度、胶原蛋白沉积、杯状细胞计数、成纤维细胞计数明显增高，FEV1%pred、FEV1/FVC%明显降低，P<0.05。（如表1）
2.3分析实验组IL-4、periostin与气道重塑指标、肺功能指标的关系
实验组IL-4、periostin与气道重塑指标呈明显正相关关系，与肺功能指标呈明显负相关关系，P<0.05。（如表3）
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3.讨论
支气管哮喘是以气道高反应性、气道重塑为特征的慢性气道炎症性疾病。在支气管哮喘发病、发展过程中，多种细胞、细胞成分起到重要的作用[2-3]。气道重塑是一个病理过程，具不可逆的特点，对哮喘患者的肺功能造成严重的影响，还会降低哮喘患者对药物的敏感性，从而削弱了治疗的效果[4-6]。本研究显示，与对照组对比，实验组基底膜厚度、胶原蛋白沉积、杯状细胞计数、成纤维细胞计数明显更高，FEV1%pred、FEV1/FVC%明显更低，P<0.05。与对照组对比，实验组IL-4、periostin的表达病例数明显更多，P<0.05。实验组IL-4、periostin的表达与气道重塑指标呈明显正相关关系，与肺功能指标呈明显负相关关系，P<0.05。Th2 细胞占优势的 Thl/Th2 失衡是引起哮喘发病的重要病机。白细胞介素4(IL-4)促使B细胞产生IgE，从而介导诱发相哮喘反应，呼吸道慢性炎症是呼吸道重构发生、发展的前提条件，其可以激活呼吸道平滑肌细胞的STAT6，加速平滑肌细胞增殖，也可刺激其分泌TGFβ1，促进成纤维细胞分化并合成胶原，导致呼吸道重构[7]。Woodruff等发现哮喘患者气道上皮细胞中periostin基因的表达强度是正常人的4倍[8]。研究表明哮喘患者血清中periostin的水平与哮喘患者1秒用力呼气量的下降程度密切相关。periostin促进哮喘患者气道重塑的原因可能在于periostin被分泌后与细胞外基质蛋白相互作用，进而加剧上皮下纤维化。
综上所述，哮喘患者气道IL-4、periostin的表达与气道重塑严重程度的关系密切，呈明显正相关关系。
参考文献
[1]段圆方,杜春华.Periostin在支气管哮喘气道重塑的作用[J].国际呼吸杂志,2015,35(7):528-531.
[2]贺欣.呼吸道病毒感染对哮喘患儿气道重塑与炎症反应程度的影响[J].中国民康医学,2019,31(13):20-22.
[3]丁珊,方声,叶秀霞.呼吸道病毒感染对哮喘患儿气道重塑与炎症反应的影响[J].中华医院感染学杂志,2019,29(4):625-627,640.
[4]杨希,焦蓉,张闯.哮喘患儿血清中IgE、Eotaxin含量检测及其临床意义[J].海南医学院学报,2018,24(23):2058-2061.
[5]谭维,李英,罗银河, 等.咳喘宁对RSV诱发哮喘大鼠血清IL-4、IFN-γ的调节作用及对支气管平滑肌增殖活性的影响[J].湖南中医药大学学报,2016,36(11):5-8,17.
[6]王宜.内质网应激的标志CHOP通过IL-4/STAT6/Tfec/IL-4Rα促进巨噬细胞替代活化参与支气管哮喘发病机制的研究[D].湖北:华中科技大学,2017.
[7] Globalstrategy for Asthma Management and prevention: Global ihitiatie for Asthma ( GINA) ，2009. Available from www. ginasthma. org Datelast updated，2009.
[8] Woodruff PG，Bonshey HA，Dol ganov GM，et al．Genome-wideprofiling identifies epithelial cell genes associated with asthma and with treatment response to eorticosteroids [J] ．Proc Natl Acad Scitudinal information on pulmonary function and inflammation using USA，2007，104( 40) : 15858-15863.