李云娇
（中源协和生物细胞存储服务（天津）有限公司；天津300384）
摘要：脂肪干细胞（ADSCs）属于间充质干细胞，可以从脂肪组织中分离获得，具有多向分化能力，在不同诱导液诱导下，能够分化为多种细胞，应用于临床治疗中。本文结合以往学者研究，针对ADSCs分离、分化以及应用展开研究。
关键词：脂肪干细胞；分离培养；细胞分化；易学应用
前言：ADSCs是通过脂肪组织提取的MSCs，如今技术研究逐渐深入，分离提取ADSCs的方法逐渐完善。目前常见酶消化法、胶原酶、机械分离以及悬浮培养法等多种方法，提取ADSCs需要关注试剂、冻存试剂、离心转速以及传代代数等多个方面。凭借其分化优势，在临床研究中受到了极大关注。
1 ADSCs的分离培养
提取ADSCs的方法有多种，但目前广泛使用吸脂术提取脂肪，在无菌环境中制作脂肪粒，将血管以及结缔组织剔除后，进行包膜。使用Ⅰ型胶原酶在恒温环境中消化处理1h。停止消化后，设定1800r/min离心速度，获取基质血管成分，使用过筛网过滤至培养皿中进行培养。经过换液传代后，可以获得ADSCs样本。冻存液配比1:4:5的DMSO：含胎牛血清培养液：胎牛血清，使用程序降温法冻存，保存温度为-80℃最好[1]。
2 ADSCs的分化
ADSCs分化能力强大，在不同环境中，能够分化为不同胚层源细胞，分别为内胚层、中胚层以及外胚层。
2.1 内胚层
第一，分化为肝细胞样细胞，通过无血清培养ADSCs后，使用HGF、烟酰胺以及bFGF继续培养2周，可以促进ADSCs诱导为肝细胞样细胞。使用HGF、FBS、FGF配置诱导液，经过3周诱导后，能够检测出肝细胞标志物，证明能够诱导为肝细胞样细胞。第二，分化为胰岛细胞。有学者使用烟酰胺、激活素、HGF等配置诱导液，进行ADSCs培养，经过15d诱导，可检测到胰岛素基因蛋白以及促进因子，证明成功诱导分化为胰岛样细胞[2]。
2.2 中胚层
首先分化为心肌细胞，有研究指出，在氮杂胞苷的诱导下，可推动ADSCs分化为心肌细胞，由于氮杂胞苷也存在一定毒性，需要寻找有效试剂取代氮杂胞苷。有研究指出，使用AngⅡ能够将ADSCs诱导为心肌细胞，诱导时长约为4周。经过检测，Con43、MHC、cTn-Ⅰ检测为阳性，代表使用AngⅡ可以作为诱导剂，对ADSCs起到诱导的作用，促进其分化。其次分化为骨骼肌细胞，有研究指出可使用氢化可的松以及马血清配制为诱导液，经过6周诱导后，可使用免疫组织化学法对MHC和MyoD1进行鉴定，同时可出现多核细胞，形成肌管[3]。通过对微环境的变化，诱导ADSCs形成骨骼肌，将骨骼肌和ADSCs进行培养基培养，促进ADSCs转化为肌细胞，提高成肌比例。共同培养肌源性肝细胞以及ADSCs，能够诱导ADSCs为肌管。最后分化为内皮细胞，通过对培养条件的调节，促进ADSCs诱导为内皮样细胞。含有生长因子、FBS等的诱导剂，能够在10d内将ADSCs诱导为内皮细胞。经过对ADSCs的2周培养后，使用氢化可的松、VEGF以及胰岛素样生长因子，进行共同培养2周。
2.3 外胚层
第一，分化为神经细胞，在培养基中使用胰岛素、吲哚美辛等作为诱导液，对ADSCs进行2周培养，只有20~25%细胞分化后，表现出神经形态学特点。使用表皮生长因子、bFGF等作为诱导液，进行ADSCs的培养，检测出神经球，继续诱导分化，可检测出抗原MAP-2阳性。第二，分化为表皮细胞，使用全反式维甲酸、FBS以及DMEM培养基诱导液进行培养，能够有效诱导ADSCs分化为表皮细胞，诱导率约为80%[4]。使用KGF、FBS、地塞米松作为诱导液，进行12d诱导后，可检测到表皮细胞中的特异性标记物，添加HaCaT上清液至诱导液中，能够提高ADSCs分化能力。
3 ADSCs的应用
3.1 临床治疗
利用ADSCs的分化能力，在临床治疗中，得到广泛应用。如心肌相关疾病，通过促进ADSCs分化，能够提高心室壁厚度，改善左心室功能，让心肌功能得到改善，治疗慢性心脏病具有一定优势。在修复骨骼肌损伤上，利用ADSCs分化能力，也能够促进其分泌生长因子，有助于再生骨骼肌，改善患者肌肉萎缩，重新恢复肌肉能力。治疗骨质疏松上，也经常应用ADSCs，利用ADSCs分化能力，促进繁殖骨细胞，让患者骨密度得到提高，有利于骨形成。在口腔修复中，应用ADSCs分化营养因子的能力，能够促进内膜成纤维细胞分化繁殖，促进患者康复。有研究指出，ADSCs有利于修复切除成釉细胞瘤出现的骨缺损[5]。
3.2 美容整形
由于ADSCs在科学诱导后，能够分泌生长因子，包括HGF、Ang、PIGF以及VEGF等几种生长因子，有助于创面愈合，在美容整形中具有巨大的应用空间。由于ADSCs的分化能力，能够替代部分组织细胞，分泌细胞因子，有利于提高患者免疫力。有研究使用ADSCs治疗面部轮廓整形患者，提高了整形美容的安全性和有效性。
综上所述，ADSCs具有良好的分化能力，在临床治疗中具有巨大的应用空间，ADSCs能够从自体脂肪中获取，排异性较低，能够通过诱导，向不同种类细胞分化，分化后细胞稳定。但ADSCs安全性还需要进一步分析，在治疗中的应用和诱导体系有待探究。
参考文献：
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[2]柳幸子,全红,刘君君,等.不同浓度人脂肪干细胞与脂肪颗粒混合种植对裸鼠脂肪细胞增长的影响[J].同济大学学报(医学版),2019,40(01):16-21.
[3]崔梦莹,郭澍,佟爽,等.脂肪干细胞来源外泌体通过Wnt/β-catenin信号通路促进脂肪干细胞成骨分化[J].中国医科大学学报,2019,48(02):114-118.
[4]郑武洪,罗莉,李玲,等.脂肪干细胞移植对野百合碱诱发的肺动脉高压大鼠肺动脉压的量效和时效作用[J].中华细胞与干细胞杂志(电子版),2018,8(06):321-327.
[5]李响,吴志贤,刘宏伟,等.脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖影响的分子机制[J].中国组织工程研究,2019,23(01):61-67.