【摘要】目的：研究尿微量白蛋白（Microalbuminuria，UALB）、血管性假性血友病因子（Von Willebrand factor，vWF）、β2微球蛋白（β 2-microglobulin，β2-MG）在糖尿病肾病患者血清中的表达水平及相关性研究。方法：选取2018年5月-2019年5月我院收治的2型糖尿病肾病患者70例为糖尿病肾组，另外选取同期在我院进行健康体检的健康志愿者70例作为对照组，对比两组研究对象UALB、vWF、β2微球蛋白水平，根据患者病情严重程度、不同病程分期，分析UALB、vWF、β2微球蛋白水平与病情严重程度及不同病程之间的关系，采用Pearson分析UALB、vWF、β2微球蛋白水平之间的相关性。结果：糖尿病肾病组、正常组在性别、年龄、体重、血压比较中，无统计学差异（P＞0.05）；糖尿病肾病组UALB、vWF、β2-MG水平高于正常组，具有统计学差异（P＜0.05）；重度UALB、vWF、β2-MG水平高于轻度、中度，具有统计学差异（P＜0.05）；＞10年患者UALB、vWF、β2-MG水平高于＜5年、5-10年，具有统计学差异（P＜0.05）；UALB、vWF成正相关（r=0.435,P=0.001）；UALB、β2-MG成正相关（r=0.615,P=0.001）；vWF、β2-MG成正相关（r=0.323,P=0.006）。结论：UALB、vWF、β2微球蛋白是检测糖尿病肾病的敏感指标，三项联合检测对于早期检测糖尿病肾病及病情的进展具有重要意义。
【关键词】尿微量白蛋白；血管性假性血友病因子；β2微球蛋白；糖尿病肾病
Study on the expression level and correlation of UAlb, vWF and β 2-microglobulin in the serum of diabetic nephropathy patients
【Abstract】Objective:To study the expression and correlation of urinary microalbuminuria (UAlb), von Willebrand factor (VWF), β 2-microglobulin (β 2-MG) in the serum of diabetic nephropathy patients.Methods：Selection in May 2018 - May 2019 type 2 diabetic nephropathy patients of our hospital 70 cases of diabetic kidney group, in addition to choose in the same period in our hospital for physical examination of 70 cases of healthy volunteers as control group, compared two groups of subjects UALB, vWF, β 2 microglobulin levels, according to the patients with severe degree, different course in installment, analysis UALB, vWF, β 2 microglobulin level and condition, the relationship between the severity and duration of using UALB, vWF, Pearson analysis the correlation between the β 2 microglobulin level.Results:There was no significant difference in gender, age, weight and blood pressure between the diabetic nephropathy group and the normal group (P > 0.05).The levels of UALB, vWF and 2-mg in the diabetic nephropathy group were higher than those in the normal group, with statistically significant differences (P < 0.05). Severe UALB, vWF, and 2-mg levels were higher than mild and moderate levels, with statistically significant differences (P < 0.05). The levels of UALB, vWF and 2-mg in patients with > at 10 years were higher than those of < 5 years and 5-10 years, showing statistical differences (P < 0.05). UALB and vWF were positively correlated (r=0.435,P=0.001). UALB and 2-MG were positively correlated (r=0.615,P=0.001). VWF and 2-MG were positively correlated (r=0.323,P=0.006).Conclusion:UALB, vWF, and 2 microglobulin are sensitive indicators for the detection of diabetic nephropathy.
【Key words】Keywords Microalbuminuria; Von Willebrand factor; β 2-microglobulin; Diabetic nephropathy
我国糖尿病发病率急剧增加，并发症发生率也在同步增长，糖尿病肾病是糖尿病常见微血管严重并发症之一，是引起慢性肾功能不全，慢性肾衰的重要因素[1]。严重者发展为尿毒症，威胁患者生命[2]。其发病机制还未完全阐明，研究证实，糖尿病肾病的发生与进展涉及多个血清因子的表达，UALB是糖尿病肾病预后判断与评估的重要指标[3]，患者发病初期一般存在微量蛋白尿的表现，随着病情发展，可能出现持续蛋白尿，最终发展成为肾功能衰竭、尿毒症；vWF是血管内皮细胞损害标志物，糖尿病患者血管内皮因缺血、缺氧导致血浆vWF水平升高[4]；β2-MG是一类低分子蛋白质，可经过肾小球滤过，曲小管重吸收。本文通过分别检测患者血清UALB、vWF、和β2微球蛋白探讨在糖尿病肾病患者血清中的表达水平及相关性研究，为临床糖尿病肾病的发病机制及防治提供相应的理论支持。
1资料与方法
1.1资料
研究对象：选取2018年5月-2019年5月我院收治的2型糖尿病肾病患者70例为糖尿病肾组，男38例，女32例，年龄28-70岁，平均年龄（39.5±5.3）岁，体重45-72kg，平均体重（67.35±5.22）kg，收缩压检测为（131.00±3.62）㎜hg，舒张压检测为（83.00±8.21）㎜hg；按照病情严重程度将患者分为轻度25例、中度26例、重度19例；并且根据患者的不同病程将患者分为＜5年25例；5-10年25例；＞10年20例。另外选取同期在我院进行健康体检的健康志愿者70例作为对照组，男40例，女30例，年龄40-70岁，平均年龄（42±5.8）岁，两组研究对象在性别、平均年龄等资料中对比，无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。本次研究所有患者家属均知情，均签署了家属知情同意书，且经过伦理委员会批准。
纳入标准：所有患者均符合2型糖尿病肾病诊断标准①年龄≤80周岁；②血糖控制稳定，空腹血糖＜7.0mmol/L，餐后2小时血糖7.8-11.1mmol/L；③无基础肾功能不全；④近3个月未服用过血管紧张素转化酶抑制剂；⑤无酮症酸中毒、高血压。
排除标准：①风湿性患者；泌尿系统感染患者；②原发性肾脏疾病、高血压疾病患者；③使用皮质类固醇患者；④存在感染和感染相关性患者；妊娠期或哺乳期女性；④长期服用激素类药物，免疫抑制剂患者；⑤近期出现糖尿病酮症酸中毒以及高渗昏迷者。
1.2方法
1.2.1 UALB水平检测 在晨起空腹下采取随机尿样5ml，经双抗体夹心酶标免疫分析法对尿微量蛋白（Urinary microprotein，UALB）水平进行检测。
1.2.2 vWF、β2微球蛋白水平检测 取两组研究对象清晨静脉血，置一次性的抗凝管中保存，使用3000r/min转速离心机离心，10min后，分离上清，在-80℃环境中保存。采用酶联免疫吸附法对vWF进行检测，取50mM碳酸盐包缓冲液对vWF进行稀释，且加入聚苯乙烯的反应孔中，加盖处理后，在4℃下置留24h，次日洗涤3次后，抛干，在每孔中均加入稀释液（pH值为7.4 0.02 mol/L Tris-HCl缓冲液）稀释待测标本0.1mL，加入阳性、阴性对照标本，在42℃下置留60min，将液体移除并洗涤3次后，抛干，在每孔中加入vWF抗体0.1ml，再次置留60min，将液体移除并洗涤3次，抛干，并在每孔中加入低物液（0.1 mol/L的Na2HPO4,0.05 mol/L的枸橼酸）混匀，且加入0.1mL邻苯二胺，遮光20min，再次加入2 mol/L H2SO4 0.05ml放置各孔内，终止反应。使用酶标仪检测A450，分析vWF水平。采用免疫比浊法在全自动生化分析仪上对β2微球蛋白水平进行检测。
1.3统计学处理
采用SPSS20.0统计软件进行分析，其中计数资料采用百分率描述，组间比较采用x2检验，两组间采用配对t检验，三组间比较采用F值检验，P＜0.05则说明差异具有统计学意义。采用Pearson进行相关性分析。
2结果
2.1两组研究对象一般资料统计
如表1所示，糖尿病肾病组、正常组在性别、年龄、体重、血压比较中，无统计学差异（P＞0.05）。
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2.2 UALB、vWF、β2-MG在糖尿病肾病患者中的表达比较
如表2所示，糖尿病肾病组UALB、vWF、β2-MG水平高于正常组，具有统计学差异（P＜0.05）。
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2.3不同病情程度糖尿病肾病患者UALB、vWF、β2-MG水平比较
如表3所示，重度UALB、vWF、β2-MG水平高于轻度、中度，具有统计学差异（P＜0.05）；中度UALB、vWF、β2-MG水平高于轻度，具有统计学差异（P＜0.05）。
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注：*表示与轻度相比，P＜0.05；#表示与中度相比，P＜0.05。
2.4不同病程患者UALB、vWF、β2-MG水平比较
如表4所示，＞10年患者UALB、vWF、β2-MG水平高于＜5年、5-10年，具有统计学差异（P＜0.05），5-10年患者UALB、vWF、β2-MG水平高于＜5年，具有统计学差异（P＜0.05）。
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注：*表示与＜5年相比，P＜0.05；#表示与5-10年相比，P＜0.05。
2.4 UALB、vWF、β2-MG之间相关性分析
如图1所示，UALB、vWF、β2-MG之间具有相关性，UALB、vWF成正相关（r=0.435,P=0.001）；UALB、β2-MG成正相关（r=0.615,P=0.001）；vWF、β2-MG成正相关（r=0.323,P=0.006）。
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图1 UALB、vWF、β2-MG之间相关性分析
3讨论
糖尿病肾病是糖尿病严重并发症之一，是糖尿病微血管病变导致的肾小球硬化，是引起慢性肾功能不全，慢性肾衰的重要因素，威胁患者生命健康安全[6]。糖尿病肾病的发生，给患者和家庭带来极大的压力和负担，影响患者的生活质量。糖尿病肾病发病机制十分复杂，至今尚未明确，且临床发病隐匿，危害较重。因此糖尿病肾病发生机制的研究对诊断及预防糖尿病肾病具有重要意义，本文就三种重要的细胞因子与糖尿病肾病疾病关系进行探究。
UALB是判断糖尿病患者肾功能损伤的一项敏感有效的指标，其还是一种小分子蛋白，在正常人群中，其无法通过过滤膜，但在糖尿病肾病患者中，由于患者的肾小球基底膜蛋白质被糖化，会导致肾小球过膜改变，增加白蛋白的滤过量，最终导致蛋白尿的发生[7]。本文研究结果显示，糖尿病肾病组UALB水平高于正常组，此结果说明，UALB检测对于糖尿病肾病早期诊断有重要意义，是早期判断肾损伤的重要指标。正常情况下尿液中含量微小，当尿中出现白蛋白的增多时，反映糖尿病肾病临床病理改变，表明肾已经进入不可逆阶段，是早期肾脏损伤的标志[8]。肾小球基底膜增厚和系膜基质增多，反映肾功能损害的指标较多。肾小球滤过率是判断肾功能损害的重要指标之一[9]。肾小球基底膜有严重损害，因此临床监测尿微量白蛋白可反映肾小球基底膜滤出血浆蛋白的变化[11]。在本文研究中还显示，重度UALB水平高于轻度、中度，＞10年患者UALBG水平高于＜5年、5-10年，此结果说明，UALBG的表达与患者的病情程度及病程具有相关性。有研究表明[10]，糖尿病血管病变与血清UALB水平升高有一定的关系，当患者UALB升高时，可刺激患者血管损伤，早期UALB可及时了解肾小球的损害情况，为早期预防和治疗提供依据。
vWF是血管内皮细胞损害标志物，由内皮细胞和巨噬细胞合成具有黏附功能的糖蛋白，在血浆和血小板中均存在[12]。合成后由内皮细胞直接释放，当血管受损害时对血小板黏附有重要作用，是促血小板黏附损伤血管的因子[13]。在本文研究中显示，糖尿病肾病组vWF水平高于正常组，此结果说明，vWF检测对于糖尿病肾病早期诊断有重要意义。血管内皮细胞受损时vWF释放会增加，由内皮细胞释放，沉积作用于肾小球基底膜上，内皮细胞表面vWF与血小板相应受体相结合，使血小板粘附于内皮下基质，促进微血栓的形成，加剧内皮细胞损伤[14,15]。糖尿病患者血管内皮由于缺血、缺氧而受损，引起血浆vWF水平升高，加重血液的高凝状态，易形成血栓，在血栓形成的基础上会加重血管内皮的缺血、缺氧，使血浆vWF水平升高，形成恶性循环[16]。本文研究中，重度vWF水平高于轻度、中度，＞10年患者vWF水平高于＜5年、5-10年，此结果说明，糖尿病肾病患者内皮细胞功能状态可通过vWF在血浆水平中反映表达，是大血管内皮损伤或监测微血管最直接的证据，在糖尿病肾病的发展过程中，vWF具有重要作用，证实vWF与糖尿病肾病发生发展有关。
β2微球蛋白是一类小分子蛋白质，是经典的肾小管标志蛋白，可以直接反应肾小管功能[17]。由机体内核细胞产生，β2微球蛋白可经人体血液循环中肾小球滤过，重吸收在近曲小管，在肾小管的上皮细胞中被降解为氨基酸[18]。在本文研究中显示，糖尿病肾病组β2微球蛋白水平高于正常组，此结果说明，β2微球蛋白检测对于糖尿病肾病早期诊断有重要意义。正常人体血清中，β2微球蛋白通过肾脏排泄量是极少的。而在糖尿病肾病时β2微球蛋白表达会出现明显的增高，肾小球滤过功能会发生紊乱导致滤过功能下降，造成血清β2微球蛋白浓度出现增高的趋势，会使肾小球基底膜增厚，诱发肾小球滤过能力损伤[19,20]。本文研究结果显示，重度β2微球蛋白水平高于轻度、中度，＞10年患者β2微球蛋白水平高于＜5年、5-10年，因此β2微球蛋白对糖尿病肾病的早期诊断有影响。
UALB、vWF、β2微球蛋白之间在糖尿病肾病中有相关性表达，本文研究结果显示，随着糖尿病肾病病情的发展，UALB、vWF、β2微球蛋白呈正相关性增长，说明UALB、vWF、β2微球蛋白对糖尿病肾病的发生、进展有预测性。
综上所述，UALB、vWF、β2微球蛋白是检测糖尿病肾病的敏感指标，三项联合检测对于早期检测糖尿病肾病及病情的进展具有重要意义。
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