摘要：目的：研究几种中西药制剂微生物限度检查方法。方法：科学参照《中国药典》2010版实施试验，检测其有没有含抑菌成分。结果：按照相关制备方法，不同试验菌样品中的回收率都可达到80%以上。结论：因此可看出，几种中西药制剂所运用的检验措施，能有效清理药品的抑菌作用。总体测定结果准确，药品质量安全性高，可完成预期验证试验的目标。
关键词：微生物限度方法验证；回收率；药品质量
药品微生物限度检查属于控制药品质量非常关键的检查项目。中国药2010年版中规定，差异化的药品微生物限度检查中的细菌数及不同控制菌的检查，应该依据已验证的手段实施。部分中西药制剂因为药品自身的理化特点和抑菌活性，在一定程度上影响到药品污染的微生物计数测定等，使检查结果并不准确[1]。本文科学参照《中国药典》2010版实施试验，检测其有没有含抑菌成分，医学报告如下。
1.资料和方法
1.1药品
金莲花胶囊；脑得生胶囊，羟苯磺酸钙胶囊；庳通外用药液，所有药品店铺进行灭菌处理。
1.2培养基以及菌种来源
培养基：营养琼脂、营养肉汤、真菌培养基、玫瑰红钠琼脂以及亚碲酸盐肉汤等。按照CP2000版规定配比和灭菌。菌种：铜绿假单孢菌，金黄色葡萄球菌以及枯草芽孢杆菌。
1.3仪器
高压蒸汽灭菌器、电子天平以及培养箱等。
1.4方法
首先就是药品微生物计数的菌回收率试验方法，菌液制备，对照菌24h的新鲜培养液，细菌运用肉汤培养基进行稀释，白色念珠菌运用真菌培养基进行稀释；菌液的浓度：保持一定体积浓度的菌液加入供试液后，平均平板菌落数在40-320个。然后就是供试液的制备及试验，选择取供试品适量，运用灭菌0.8%NaCL溶液，适合方法溶解混合均匀， 稀释成1：10供试液，共4份，依次加入上述4种对照用菌液，作为试验组；另取等体积的0.8%溶液，共4份，也依次加入4种对照菌液，作为菌液组，都放置半个小时。按照中国药典2000版附录微生物限度检查法[2]。
其次就是控制菌检出率试验手段，首先就是控制菌对照菌的制备，大肠杆菌［CMCC(B)44102］、金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、铜绿假单胞菌［CMCC(B)10104］。然后就是菌液制备，按照供试药品的使用方法和处方，选取检查的控制菌。选择对照菌种24h的新鲜培养物，运用肉汤培养基稀释到50-120浓度，进行备用。 最后就是方法，取1：10的供试液12ml，加到增菌培养基中， 加入相关的对照菌液50-100，作为试验组；选择等体积的稀释剂，加到增菌培养基中，也加入等量的菌液，作为对照组。试验组以及对照组都放置半个小时，以下检查操作都按照药典控制菌相关检查方法实施，进行6次平行试验。计算控制菌检出率[3]。
1.5统计学分析
数据分析使用统计学软件SPSS 13.0，计量资料采用百分率（%）表示，；检验使用χ2；P值小于0.05，则说明统计学意义显著。
2.结果
按照相关制备方法，不同试验菌样品中的回收率都可达到80%以上。控制菌检查检出率试验结果：金莲花、脑得生以及羟苯磺酸钙胶囊检查检出大肠杆菌：试验组5次试验结果都检出，检出率都为100%。痹通外用药液检查铜绿假单胞菌：试验组5次试验结果都检出，检出率为100%；检查金黄色葡萄球菌：5次试验其中4次结果为检出，5次结果为未检出，检出率为45%；痹通外用药液检查金黄色葡萄球菌的方法改用培养基稀释法，5次试验结果都为检出，检出率为100%。
3.讨论
中西药制剂蕴含了较多成分的复合制剂，其中不管哪种成分具备抑菌作用，且影响到微生物限度检查的准确性，所以和其他研究方法相同，药品微生物限度检查也可证实所运用的手段非常适合，最大限度的确保检查方法的完整性以及准确性。医院制剂微生物限度检查法中细菌和酵母菌计数，往往运用平皿法进行，多年检测结果显示，当其中含有抑菌成分药材时，检测的结果会出现异常现象，一般无法代表制剂中实际污染的微生物数量[4]。
从上文的试验结果可看出，按照相关制备方法，不同试验菌样品中的回收率都可达到80%以上。控制菌检查检出率试验结果：金莲花、脑得生以及羟苯磺酸钙胶囊检查检出大肠杆菌：试验组5次试验结果都检出，检出率都为100%。痹通外用药液检查铜绿假单胞菌：试验组5次试验结果都检出，检出率为100%；检查金黄色葡萄球菌：5次试验其中4次结果为检出，5次结果为未检出，检出率为45%；痹通外用药液检查金黄色葡萄球菌的方法改用培养基稀释法，5次试验结果都为检出，检出率为100%。而其中金莲花胶囊的各菌回收率都较小，有些还没有回收，因此可看出抑菌作用较强，因此药品在药效上也是非常重要的清热解毒以及抗炎功效。另外这几种药品，运用药典常规平皿计数法测定，无法获取样品中污染细菌数的正确结果，因此运用方法学进行研究，运用适合的手段，排除其抑菌活性以及相关干扰。微生物计数验证用的铜绿假单胞菌在试验中发生回收率过高的情况，也就是试验误差较大，经过研究科看出，其在一定程度同该菌在加菌放置和试验过程中繁殖过快具有一定的关联性，另外验证试验中加菌后放置的时间控制必须引起高度关注。革兰阴性菌的代表菌可改用大肠杆菌，更好的控制误差，提升验证试验的可靠性和准确性[5]。
总而言之，上述试验研究结果都显示，对不同药品品种进行微生物限度检查的方法学研究，构建不同品种项下检查方法，才可更好的确保保检验结果的准确性。
参考文献
[1] 吴经耀;. 保妇康栓微生物限度检查方法验证实验[J]. 亚太传统医药, 2019, 15(7):62-64.
[2] 郭慧, 吕彩莲, 史永惠. 班泽十二味散微生物限度检查方法验证[J]. 海峡药学, 2019, 031(005):70-71.
[3] 倪玉佳, 朱文静, 戈煜,等. 复方硝酸咪康唑软膏微生物限度检查的方法学验证[J]. 药学服务与研究, 2019(6):409-412.
[4] 孙乃霞, 郭社民. 健脾补血颗粒微生物限度检查方法的验证[J]. 光明中医, 2019(12).
[5] 马海玲, 张咏梅, 沈花.胃炎灵颗粒剂微生物限度检查方法验证[J]. 安徽医药, 2019, 23(12):2531-2534.