摘要：目的 通过比对移液器与容量瓶两种稀释方式，比较用移液器与容量瓶稀释同一样本对酶联免疫实验结果有无影响。方法：用检定周期内的移液器和容量瓶两种工具稀释同一样本溶液，之后使用R&D公司的EPO体外诊断试剂盒对样本溶液进行活性检测，组间对比分析实验结果，最后进行数据统计分析。结果：无论样本浓度多大，只要正确使用移液器与容量瓶对同一样本进行稀释，两种稀释方式结果CV%均小于5%，用JMP软件对实验数据进行分析，结果为使用两种方式稀释各浓度样品其检测结果无显著性差异，说明两种稀释方式对实验结果无影响。结论：在酶联免疫实验中，两种稀释方式无差别，既可用移液器也可用容量瓶来对样本溶液进行稀释。由于容量瓶所需样本量多，且操作繁琐，所以日常实验中可用定期检定移液器稀释样本来提高工作效率。
关键词：移液器；容量瓶；酶联免疫实验
目前定量实验中溶液稀释经常选取可调移液器与容量瓶作为稀释工具。可调移液器因移取方便、快速、准确，故在检验、药理研究、放射免疫 、酶标记研究等临床和科研工作的定性、半定量、定量实验中得到广泛应用［1］。容量瓶是一种细颈梨形的平底瓶，带有磨口玻璃塞或塑料塞，主要用于把准确称量的物质准确地配制成一定体积的溶液，或将浓溶液准确地稀释成稀溶液［2］。但是与容量瓶相比，移液器稀释样本可减小工作强度、减少工作量、提高工作效率。
酶联免疫实验（ELISA）具有灵敏度高，特异性好，操作简单，技术可靠，试剂稳定等优点，广泛应用于传染性疾病，肿瘤标志物以及激素等项目的检测［3-4］。
酶联免疫实验的操作步骤并不复杂,但影响实验结果的因素却较多。其中任何步骤操作不当,都可能出现”花板”现象［5］,其中样本稀释准确与否直接影响实验结果，从而影响实验结果判断。所以本实验的研究目的是在同等实验环境下研究移液器与容量瓶两种稀释方法对酶联免疫实验结果是否有影响。
1 研究方法
1.1 仪器与试剂
1.1.1仪器 Magella酶标仪 Thermo移液器 天玻容量瓶 知楚恒温震荡培养箱 Thermo摇床
1.1.2 试剂 EPO体外试剂盒（R&D公司）
注：所选仪器均在检定周期范围内，所选试剂均符合国家标准规范。
1.2 操作步骤
此次实验为了保证实验结果准确，全部过程由同一操作人员对同一样本分别采用移液器和容量瓶两种方式进行稀释，选取3000IU/ml（低）、6000IU/ml（中）和10000IU/ml（高）浓度产品，同时每种浓度点产品抽取3支作为检测样本，然后用EPO体外诊断试剂盒采取ELISA法对样本重复测定两次。
分别用Thermo移液器和天玻容量瓶对样本溶液进行稀释，最终将样本溶液稀释至终浓度为20-50 mIU/ml。具体稀释过程如下：
.png)
2. 结果
第一次实验中低浓度3个样本分别用移液器和容量瓶两种方式稀释结果CV%分别为0.28、0.28和0.12 ，中浓度3个样本分别用移液器和容量瓶两种方式稀释结果CV%分别为0.33、1.24和0.44，高浓度3个样本分别用移液器和容量瓶两种方式稀释结果CV%分别为0.50、0.90和1.37；第二次实验中低浓度3个样本分别用移液器和容量瓶两种方式稀释结果CV%分别为0.26、0.50和0.63，中浓度3个样本分别用移液器和容量瓶两种方式稀释结果CV%分别为1.18、1.62和1.13，高浓度3个样本分别用移液器和容量瓶两种方式稀释结果CV%分别为1.18、1.40和0.33。用统计软件JMP对以上实验数据进行统计分析，用JMP软件对实验数据进行分析，结果为使用两种方式稀释各浓度样品其检测结果无显著性差异，分析结果见图1。
.png)
图1：JMP软件处理实验数据结果
3 讨论
根据ELISA方法检测原理可知样本溶液稀释是否正确直接影响实验结果，分别用移液器和容量瓶两种稀释方式，进行组间比较，两种稀释方式结果CV%均小于5%。用JMP软件对实验数据进行分析，结果为使用两种方式稀释各浓度样品其检测结果无显著性差异，也就是说用移液器和容量瓶两种稀释方式对酶联免疫实验结果无影响，两种稀释方式得出的结果均可靠。综上所述，在酶联免疫实验中，采用移液器和容量瓶对样本溶液进行稀释对实验结果没有影响。考虑移液器操作简单且准确，日后酶联免疫实验中可使用定期检定移液器稀释样本来提高工作效率。
参考文献
［1] 张贵龙．易新欣．杨新燕．卫生理化检验中可调移液器的应用研究[J]．社区医学杂志,2013,11(10):43-45
［2] 陈金.东张霞．常用玻璃量器使用注意事项[J]．化学分析计量，2001，10(4)：29-30
［3] 张静.王慧玲.酶联免疫吸附试验结果判读的影响因素分析［J]，总装备部医学学报,2012,14(1):41-42
［4] 李金明.临床酶免检测技术［M]，北京：人民军医出版社，2006:11
［5] 邢培清，刘玉振，实用输血检验［M]，郑州：郑州大学出版社，2001:95