[摘 要] 目的 研制罗氟司特片。 方法 以罗氟司特为主药，将其超声溶解于85%乙醇中喷浆制粒的方式制备固体片剂，采用高效液相色谱法检测样品的含量、溶出曲线、有关物质。 结果 自研罗氟司特片在性状、含量、溶出、有关物质、体内生物利用度方面综合评价，均与参比制剂无明显差异。且在长期条件、加速条件下留样6个月后，各指标均无明显变化，稳定性满足要求。结论 该罗氟司特片制备工艺简单，操作性强，重现性好，产品质量稳定。
[关键词] 罗氟司特；片；制备；质量控制
Preparation and quality control of roflumilast tablets
WU You-bin1,JIN Yin2,SUN Ji-li3，，LIU Xiao-qiang4
（1.Jiangsu Asieris Pharmaceuticals Technology Co., Ltd,Taizhou 225300；2. Amyvacc Biopharmaceutical (Jiangsu) Co., Ltd，Taizhou 225300；3.Jiangsu Asieris Pharmaceuticals Technology Co., Ltd,Taizhou 225300；4. Yangtze River Pharmaceutical Group，Taizhou 225300）
[Abstract] Objective Preparation of roflumilast tablets. Methods The solid tablets were prepared by ultrasonic dissolution of roflumilast in 85% ethanol by spray granulation, and the content, dissolution curve and related substances were detected by HPLC. Results There was no significant difference in the properties, content, dissolution, related substances and bioavailability between the self-developed and reference preparations. After 6 months of sample retention under long-term and accelerated conditions, all indexes have no obvious change, and the stability meets the requirements. Conclusion The preparation process of roflumilast tablets is simple, with strong operability, good reproducibility and stable product quality.
[Key words] roflumilast; tablets; preparation; quality control
罗氟司特片是一种口服的选择性磷酸二酯酶4（PDE4）抑制剂，用于治疗慢性阻塞性肺病(COPD) ，减少严重COPD急性发作（加重）频率、缓解症状恶化。2011年美国FDA批准其上市 [1]。由于罗氟司特片有规格小且原料难溶的特性，原研厂家为了提高药物在体内的生物利用度，采用了微粉化技术。此工艺相对复杂，对设备要求较高，同时收率低、静电吸附严重也是问题。笔者将处方、工艺创新，制得的片剂与原研在溶出、体内生物利用度等关键考察指标方面相似性好，质量稳定。
1 实验材料
1.1 仪器设备：FA1004型电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；KBG-250C湿法混合制粒机（温州康牌药机）；YK-160D整粒机（丹东市制药机械）；CT-C-II电热鼓风干燥箱（大江干燥设备厂）；ZPS008旋转压片机（上海天祥健台）；SBH-30L三维混合机（成都塞尔达机械厂）；KBG-150C高效包衣机（温州康牌药机）；KQ5200B超声波清洗机（昆山超声仪器厂）；FADT-1202RC全自动智能溶出仪（上海富科思）；LC-20AD高效液相色谱仪（上海岛津）。
1.2 试药：罗氟司特（药用，江苏亚虹医药生物科技有限公司，批号：19021801，含量：99.6%）；乳糖（药用，德国美剂乐，批号：L1922）；淀粉（药用，安徽山河药用辅料股份有限公司，批号：190301）；聚维酮K30（药用，安徽山河药用辅料股份有限公司，批号：190108）；硬脂酸镁（药用，安徽山河药用辅料股份有限公司，批号：191201）；薄膜包衣预混剂（药用，上海卡乐康包衣技术有限公司，批号：THL28561）；无水乙醇（药用，南京化学试剂股份有限公司，批号：19060623172）；参比制剂（商品名：Daxas，规格：0.5mg，NYCOMED.CO，批号：1910683095）；罗氟司特对照品（中检所，批号：19-02，含量：99.8%）；罗氟司特杂质A[2]（中检所，批号：SK-19-02，含量：99.6%）。
1.3 实验动物：比格犬（雌雄各半），体重约10kg，由上海甲干生物科技有限公司提供。实验动物合格证号：201002800606。实验动物房通风良好，装备空调，温度保持在16℃-26℃，湿度保持在40%-70%，明暗照明各12h，每只比格犬均用耳部文身标记，并在笼具上标注试剂编号和剂量。
2 处方及制备
2.1 处方：罗氟司特65g，乳糖25.87kg,淀粉6.98kg，聚维酮K30 270g，硬脂酸镁330g，无水乙醇适量，纯化水适量，薄膜包衣预混剂适量。
2.2 制备方法：将乳糖和淀粉过80目筛，备用；罗氟司特原料药超声溶解于6.5L 85%乙醇中，备用；将聚维酮K30溶解于60℃纯化水中，固含量6.0%，放至常温后备用；将过筛后乳糖和淀粉放入湿法混合制粒机中预混均匀，依次加入95%乙醇润湿、含原料的85%乙醇、6.0%聚维酮K30溶液制软材，过24目筛制粒；将湿颗粒于60℃烘箱中干燥，水分控制在1%-3%；烘干后颗粒过12目筛；依据干颗粒收率和处方比例折算应加入的硬脂酸镁量，投入三维混合机中混合均匀；用直径9mm圆形浅凹冲压片，片重约为260mg，硬度3kg-6kg；素片包衣，使其增重4%左右。包衣液由包衣粉和纯化水组成，固含量为12%[3]；检测合格后，进行内、外包装。
3 质量控制
3.1 性状：类黄色薄膜衣片，包衣片去除包衣后，显白色或类白色。
3.2 鉴别：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
3.3含量测定
3.3.1 色谱条件 [4]：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6*150mm，3μm），以乙腈-水（52:48）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为215nm，柱温为35℃。
3.3.2 供试品溶液的配制：取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于含罗氟司特0.5mg），置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。精密量取20μl，注入液相色谱仪。
3.3.3 对照品溶液的配制：取罗氟司特对照品，精密称定，加乙腈2ml溶解后，用流动相稀释制成每1ml约含对照品20ug的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
3.3.4 线性关系试验：精密称取罗氟司特标准品20.40mg置于100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为标准品储备液；精密量取储备液1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml至25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取各浓度标准品溶液20μL注入液相色谱仪，记录峰面积，以样品浓度作为X轴，罗氟司特峰响应值A为Y轴，作线性回归，得线性回归方程：Y = 111016X +38168，R2=0.9998。表明在0.24~0.57μg/ml范围内线性关系良好[5]。
3.3.5 回收率试验:精密称取罗氟司特原料药20.27mg，置于100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀作为原料药储备液；取空白辅料约270mg，精密称取9份，置于25ml量瓶中，分别加入原料药储备液2.0ml、2.5ml和3.0ml，每个浓度平行制备3份样品，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，作为供试品溶液；取罗氟司特标准品约25mg，精密称定，置于50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为罗氟司特标准品储备液；再精密移取储备液1.0ml至25ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为标准品溶液。取标准品溶液和供试品溶液进样，按“3.3”方法分别测定加标样品含量并计算回收率，试验结果见表1。
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3.3.6 样品测定：按“3.3”方法配制供试品溶液，测定含量。3批样品批号分别为200101、200102、200103。结果罗氟司特片的含量分别为标示量的98.9%、101.3%、99.0%。见表2。
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3.4 溶出曲线
3.4.1 溶出方法：取本品，照溶出度测定法，分别以pH6.8磷酸盐缓冲液（含0.3%SDS）、pH4.5磷酸盐缓冲液（含0.3%SDS）、pH1.2盐酸缓冲液（含0.2%SDS）、纯化水为四种介质，体积1000ml，每分钟50转，37.0℃，取样时间5min、10min、15min、30min、45min、60min。取溶液适量，滤过，续滤液照含量测定项下的方法，计算出每片的溶出量[6]。
3.4.2 线性关系试验[7]：精密称取罗氟司特标准品25.25mg置于50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为罗氟司特标准品储备液；精密量取储备液1.0ml于10ml量瓶中，流动相稀释至刻度，混匀；再精密量取上述溶液0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2 ml、1.4ml于100ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取各浓度标准品溶液20μL注入液相色谱仪，记录峰面积，以样品浓度（μg /ml）作为X轴，罗氟司特峰面积A为Y轴，作线性回归。得线性回归方程：Y = 119904X-636，R2=0.9976。表明在0.006~0.014μg/ml范围内线性关系良好。
3.4.3 回收率试验：精密称取罗氟司特原料药25.71mg，置于50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液5.0ml于50ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，备用，作为原料药储备液：取罗氟司特标准品约25mg，精密称定，置于50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀（约0.5mg/ml）。精密量取上述溶液5.0ml于50ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀（约50μg/ml）。精密量取50μg/ml溶液1.0ml于100ml量瓶中，流动相稀释至刻度作为标准品溶液；称取空白辅料约27mg，置于100ml量瓶中，平行称量9份，分别加入罗氟司特原料药储备液0.8ml、1.0ml、1.2ml，每个浓度平行制备3份样品，溶出介质溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。取标准品溶液和供试品溶液进样，进样体积20μL，记录色谱图，分别测定加标样品含量并计算回收率，试验结果见表3。
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3.4.4 溶出曲线测定：按“3.4.1”溶出方法配制供试品，检测溶出曲线。三批自制样品批号分别为200101、200102、200103，参比制剂批号为1910683095。四种溶出介质中的自制样品和参比制剂溶出曲线比较结果见图1-4。结果表明，现处方及工艺制得的样品溶出曲线重现良好，且与参比制剂拟合度高。
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图4 自制样品和参比制剂在纯化水中溶出曲线比较
3.5 有关物质测定
3.5.1 有关物质方法：取本品细粉适量，加溶剂（水：乙腈=55：45）溶解并制成每1ml中约含罗氟司特0.1mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用溶剂（水：乙腈=55：45）稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05M磷酸二氢钾溶液（调节pH3.5）-乙腈（55：45）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为215nm色谱柱，柱温为35℃，进样量50μl8]。
3.5.2 系统适用性[9]：称取罗氟司特和杂质A适量，加溶剂（水：乙腈=55：45）溶解并稀释制成每1ml含罗氟司特约150g、杂质A约1.5g的混合溶液，作为系统适用性溶液。结果杂质A和主峰之间分离度＞2.0，满足要求。
3.5.3 检测限：取杂质A和罗氟司特标准品，用流动相逐级稀释，记录色谱图，按信噪比（S/N）3：1计算检测限。结果杂质A检测限为0.0025μg/ml，罗氟司特的检测限为0.0210μg/ml，均符合检测要求。
3.5.4 仪器精密度：取对照溶液（供试品溶液稀释100倍）连续进样6次，计算罗氟司特主峰峰面积RSD。结果RSD=1.15%，符合检测要求。
3.5.5 耐用性：改变流速、pH值、乙腈比例、色谱柱型号及柱温，杂质A和主峰之间分离度大于2.0；罗氟司特片中杂质含量结果RSD小于10%；罗氟司特供试品总杂低于1.0%。方法耐用性良好。
3.5.6 有关物质测定：按“3.5.1”方法配制样品及检测。三批自制样品批号分别为200101、200102、200103，参比制剂批号为1910683095。结果表明自制样品和参比制剂有关物质方面无差异。详见表4。
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4 比格犬实验：研究比较自制样品和参比制剂在比格犬内的药代动力学及生物利用度。其中自制样品批号为200101，参比制剂批号为1910683095。实验前将比格犬称重，随机分成两组。给药前一天，比格犬禁食过夜。根据药品说明书推荐剂量，经口一次性内服罗氟司特片。给药前及给药后分别在固定时间点臂头静脉采血2.5ml。血样置于肝素抗凝的聚丙烯离心管中，3800rpm离心10min，吸取上层血清，-20℃保存送检。比格犬给药4h后可恢复进食，实验过程中可自由饮水。为确保片剂完全口服，给药后立即灌胃给与少量生理盐水（10-20ml）。结果表明，自制样品和参比制剂的相对生物利用度是98.7%[10]。具体数据见表5-6。
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5 稳定性考察
5.1 留样观察：将三批自制样品封装于高密度聚乙烯瓶内，分别放置在长期条件（25℃±2℃、RH60%±10%）、加速条件（40℃±2℃、RH75%±5%）[11]下6个月。结果性状、含量、溶出、有关物质均无明显变化。
6 讨论
6.1 本处方和工艺制得的罗氟司特片样品从性状、含量、溶出、有关物质方面综合评价，均与参比制剂无明显差异。且在长期条件、加速条件下留样6个月后，各指标均无明显变化，稳定性满足要求[12]。同时在比格犬实验中，自制样品和参比制剂相对生物利用度高达98.7%，说明两者体内、体外释放趋势一致。
6.2 考虑到参比制剂生产工艺中微粉化环节引起的一系列问题，现采用将罗氟司特超声溶解于85%乙醇中喷浆制粒的方式制备样品，结果表明片剂含量均匀度满足要求，溶出重现性好。
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作者简介：吴友斌 1988.11
性别: 男
籍贯（省市）: 江苏省泰州市
学历: 大学本科
职称: 初级工程师
研究方向（主要从事工作）:制剂研究