miR-19a-3p在雌激素受体阳性乳腺癌化疗耐药中的作用及调控机制研究--中国期刊网

字体：大中小

首页> 原创作品> 正文

miR-19a-3p在雌激素受体阳性乳腺癌化疗耐药中的作用及调控机制研究

发表时间：2020/7/29 来源：《医师在线》2020年5月9期作者：刘艳翠孙成赵微李文媛孙平

[导读] 研究细胞水平下hsa_circ_0001946、miR-7-5P对乳腺癌化疗耐药的影响。

刘艳翠孙成赵微李文媛孙平
（牡丹江医学院；黑龙江牡丹江157011)
摘要：目的：研究细胞水平下hsa_circ_0001946、miR-7-5P对乳腺癌化疗耐药的影响。方法：研究我院2019年1月-2020年5月收治的30例化疗前乳腺癌患者，测定荧光素酶报告基因，进行动物植瘤实验，验证hsa_circ_0001946、miR-7-5P在乳腺癌组织中的差异表达，分析hsa_circ_0001946、miR-7-5P与化疗耐药之间的关系。结果：抑制 miR-19a-3p 的表达则提升了敏感细胞株药物作用浓度，差异具有统计学意义（P<0.05）。可见miR-19a-3p 对ER 阳性乳腺癌细胞顺铂耐药起着负调控作用。miR-19a-3p可负调控 PIK3CB。乳腺癌耐药细胞株研究过程中，转染 miR-19a-3p 可抑制其增殖。结论：研究hsa_circ_0001946、miR-7-5P对乳腺癌化疗耐药的影响与细胞周期调控，促进了乳腺癌化疗治疗效果提升。
【关键词】：miR-19a-3p；乳腺癌化疗；耐药性；miR-7-5P
　　　乳腺癌对女性身体健康以及生命安全具有极大威胁，目前常见的治疗方式之一是化疗，化疗效果与耐药性之间有着紧密联系，因此在化疗实施过程中要求加强对耐药性的研究，避免对乳腺癌治疗中产生无效化疗。hsa_circ_0001946、miR-7-5p在乳腺癌发生发展和化疗耐药中起着重要的作用。研究我院2019年1月-2020年5月收治的30例化疗前乳腺癌患者，研究我院2019年1月-2020年5月收治的30例化疗前乳腺癌患者，现报道如下。
1.资料与研究方法
1.1临床资料
　　　收集我院2019年1月-2020年5月收治的30例新辅助化疗前乳腺癌患者临床资料、病理资料、癌组织和癌旁组织，所有病例经临床和组织病理学检查均符合乳腺癌的诊断，验证hsa_circ_0001946、miR-7-5P在乳腺癌组织中的差异表达。
1.2研究方法
　　　采用RT-qPCR法检测癌组织、癌旁组织hsa_circ_0001946、miR-7-5P表达水平。取适量癌组织和癌旁组织，剪碎，加入1ml Trizol试剂充分研磨后，将磨碎的标本组织放入无RNA酶的EP管中，震荡混匀室温放置5min。提取总RNA后进行浓度和纯度检测，随后进行反转录和RT-qPCR检测。根据RT-qPCR检测结果，分析hsa_circ_0001946、miR-7-5P表达水平差异以及与临床资料、病理资料、化疗敏感性之间的关系。
　　　以MTT方法检测在耐药株乳腺癌细胞株中对阿霉素进行检测。荧光素酶报告基因测定确认hsa_circ_0001946、miR-7-5的结合。细胞转染所用negative control、siRNAs及cDNA片段均由上海生工公司合成。将目的片段分别与双酶切载体pGLV进行连接，通过PCR进行扩增。按照试剂盒说明书，将pGLV载体与pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染入细胞。
　　　将细胞接种6孔板中，接种细胞于96孔板中，将培养板于培养箱培养。在0h、24h、48h、72h时间点，每孔加20μlMTT液呈色，继续孵育4h后，每孔加入150μlDMSO溶解结晶。使用酶联免疫检测仪于490nm处检测吸光度值，绘制细胞生长曲线图。注：药物剂量设定如下：MCF-7/A02细胞中，阿霉素的浓度梯度为3.125μM、6.25μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM。按3×105细胞/25cm2接种于培养瓶，14d后多聚甲醛固定，结晶紫溶液染色、风干、拍照。以对数生长期的各细胞作为研究对象，DMSO作为对照。加入确定浓度的Taxol，处理结束后收集、重悬细胞，加入Annexin V-FITC，上机检测凋亡，了解干预表达hsa_circ_0001946、miR-7-5P对Taxol在各细胞系凋亡诱导作用的影响。

期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆

　　　1.3观察指标
　　　验证hsa_circ_0001946、miR-7-5P在乳腺癌组织中的差异表达，分析hsa_circ_0001946、miR-7-5P与化疗耐药之间的关系。
1.4 统计学方式
　　　实验数据用平均值±标准差来表示。多组数据间利用统计软件SPSS 22.0，使用单因素方差分析（ANOVA）法进行分析是否有组间差异，以P＜0.05视为有统计学意义。
2.结果
　　　合成 miR-19a-3p 类似物转染MCF7-RE，抑制物转染 MCF7-CTRL，miR-19a-3p 过表达降低了耐药浓度，并提升对顺铂药物的敏感度。与此同时，抑制 miR-19a-3p 的表达则提升了敏感细胞株药物作用浓度，差异具有统计学意义（P<0.05）。可见miR-19a-3p 对ER 阳性乳腺癌细胞顺铂耐药起着负调控作用。
　　　研究 miR-19a-3p对乳腺癌细胞顺铂敏感的作用机制可见，30例化疗前乳腺癌患者中， miR-19a-3p 调控靶标基因为癌基因 PIK3CB，两者为负相关关系，r=-0.125 75。转染 miR-19a-3p 类似物与抑制物，通过Western印迹、实时荧光定量 PCR 验证蛋白表达水平、RNA水平，可见 miR-19a-3p可负调控 PIK3CB。乳腺癌耐药细胞株研究过程中，转染 miR-19a-3p 可抑制其增殖。
3.讨论
　　　目前，一般认为circRNA可以作为microRNA的sponge来吸附它们，从而调节转录和剪切的过程[11-15]。因此，探寻乳腺癌化疗耐药性相关circRNA、microRNA及其之间的关系，能够促进对乳腺癌的深入研究，并在此基础上制定相应的治疗方案。ncRNA广泛存在于各种生物中，主要包括：piRNA（Piwi-interacting RNA）、gRNA（guide RNA）、miRNA（microRNA）、lncRNA（long noncoding RNA）及circRNA（circular RNA）等。
　　　本次研究中，hsa_circ_0001946、miR-7-5P均在包括乳腺癌在内的多种肿瘤发生发展或化疗药物耐药/敏感中起着重要的作用，且生信分析预测结果强烈提示hsa_circ_0001946、miR-7-5P可能存在相互作用区域。
　　　综上所述，通过对hsa_circ_0001946/miR-7-5P在乳腺癌化疗耐药/敏感性中的机制的研究，对乳腺癌的诊断以及个体化治疗提供新的指导策略，具有重要而深远的意义。
　　　【参考文献】：
　　　[1]余红波, 符策岗, 王俊杰. Mechanisms of resistance in estrogen receptor positive breast cancer%雌激素受体阳性乳腺癌耐药机制的研究进展 [J]. 生命的化学, 2018, 038(004):624-630.
　　　[2]陈锐. 1.c-MYC调控ER阳性乳腺癌他莫昔芬耐药后化疗敏感性的机制研究 2.Ki67对不同分子亚型乳腺癌新辅助化疗效果的预测作用[D]. 2019.
　　　[3]梁国华, 张清媛, 赵文辉. 雌激素受体阳性乳腺癌中长链非编码RNA与他莫昔芬耐药关系的研究进展[J]. 中国肿瘤, 2018, 027(009):690-694.
　　　[4]何艳霞, 闫俊, 李洪滨,等. HOXD3在乳腺癌细胞干性和化疗耐药性中的作用及机制研究%The role and mechanism of HOXD3 in the stemness and chemotherapy resistance of breast cancer cells[J]. 中国肿瘤临床, 2018, 045(012):614-619.
　　　[5]杨珊珊, 杨昊, 穆旭东,等. 雄激素受体在乳腺癌他莫昔芬耐药中的作用和机制研究进展[J]. 现代肿瘤医学, 2018, 026(017):2801-2804.

基金项目，黑龙江省卫生健康委科研课题（2019-382）