摘要：目的：分析临床检验标本中病原微生物的DNA/RNA快速提取技术。方法：采用三种方法进行病原微生物的DNA/RNA快速提取，主要包括柱式提取法、煮沸法和快速法，对以上三种提取方法的应用效率和提取效果进行分析。结果：柱式提取法、煮沸法和快速法的病原微生物DNA/RNA快速提取时间分别为55min、35min和4min，快速法的提取时间比较短，与其他两种方法相比应用优势较为明显。对三种提取方法的提取效果对比分析可以了解到，三者无明显差异。结论：使用快速发进行病原微生物DNA/RNA的提取能够在较短的时间内完成相关操作，提取效率比较快同时也可以保证提取效果，可以加强这种提取方法的应用。
关键词：临床检验标本；病原微生物；DNA/RNA快速提取技术
现代化科学技术在不断发展的过程中，多种新型的检测技术被研发出来并应用到了病原微生物的检测中，实时荧光聚合酶链式反应技术具有检测速率快、灵敏度高和重复性优秀的检测技术，在公共卫生应急处理中得到了广泛应用。但是这种技术的检测速度不能很好的满足公共卫生应急处理工作的开展，因此，如何提升这类技术的检测速度是目前需要重点研究的问题，本文主要对临床检验标本中病原微生物的DNA/RNA快速提取技术进行了探讨。
1.资料与方法
1.1一般资料
选择白斑综合症病毒和副溶血性孤菌为病原微生物，分别采用柱式提取法、煮沸提取法和快速法进行病原微生物中DNA/RNA的提取，采用的试剂分别为：QIARNAExtractionMiniKit(74104)、国内自行生产试剂和成分包括0.001%SDS(w/v)、0.1%B-疏基乙醇(v/v)以及0.9%NaCl(w/v)的试剂。
1.2方法
在进行病原微生物中DNA/RNA提取时，必须要保证每种方法操作流程的科学性与规范性。在采用柱式提取法和煮沸法进行操作的过程中必须要根据相关试剂的使用说明来进行操作，保证试剂应用的合理性。在采用快速提取法进行操作的过程中首先将标本进行悬液1ml，并将放置在115ml的eppendorf管中，对溶液进行离心处理并放置一定量的提取剂进行混合，在沸水中进行离心处理3分钟，离心转速为15000rpm。获得上清液为DNA溶液。
1.3统计学分析
研究中所得到的相关数据采用SPSS19.0统计学数据处理软件进行处理分析，连续性变量以（x±s）表示，组aa间对比应用两独立样本计量资料采用t值检验，计数资料采用X2值检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。
2.结果
采用柱式提取法、煮沸法和快速法对白斑综合症病毒的DNA/RNA进行提取，对比三种方法的提取效果，三者无明显差异，详见表1。
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采用柱式提取法、煮沸法和快速法对副溶血性弧菌 的DNA/RNA进行提取，对比三种方法的提取效果，三者无明显差异，详见表2。
表 3 三种方法的提取时间对比
3.讨论
目前，许多专家学者采用聚合酶链式反应检测形式进行临床标本中病原微生物的检测，通过紫外灯的光线亮度可以判断不同提取技术的提取效果。但是通过研究可以论证可以发现，普通的聚合酶链式反应技术的检测效果达不到理想标准，而荧光定量聚合酶链式反应能够对各种提取技术的应用效果进分析，主要的应用优点为重复性比较高，能够对变异系数进行有效控制，而且整体的灵敏度比较高，可以保证检测结果的准确性，将模板DNA/RNA数量的差异性明确的体现出来。另外，荧光定量聚合酶链式反应扩增产物实是最开始的浓度，所以检测结果的准确性比较高。
本研究中主要采用柱式提取法、煮沸法和快速提取法进行微生物病原体DNA/RNA的提取，每种方法都提取3管，并进行采用实时荧光聚合酶链式反应进行检测，确定ct值将其作为提取指标。三种提取方法的提取效果没有明显差异，但是提取时间的差异性比较大，其中快速提取方法的提取速率比较快。
在发生大面积的传染性疾病疫情或者出现集体食物中毒等突发性公共卫生事件，事件发生的原因与预后是各个部门重点关注的内容，因此，在较短的时间内确定事件发生的原因有助于后续工作的顺利开展，维护社会的和谐稳定运行。将快速提取技术应用到病原微生物DNA/RNA的提取中能够快速获得提取结果，为病原类型诊断提供了有效依据，荧光定量聚合酶链式反应检测技术的应用能够进行快速诊断，因此，加强对快速提取技术和检测技术的推广与应用具有一定的必要性。能够改善传统提取技术应用中存在的不足，在提高提取速率的同时保证应用效果。
参考文献：
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