金成
尚志市人民医院 150600
摘要：目的：探索手工微柱凝胶免疫检验法在ABO、RhD血型抗原鉴定中的价值。方法：收集本院2018年3月～2020年3月不同科室、病种、性别的患者的血液样本700例，均一分为二，成为1400例血液样本，分别用手工微柱凝胶法和试管法进行ABO、RhD血型抗原鉴定，比较反应结果及反应强度。结果：手工微柱凝胶法和试管法相比，检测结果准确性上无统计学差异（P>0.05），反应强度上手工微柱凝胶法明显优于试管法。结论：手工微柱凝胶法用于检测ABO、RhD血型抗原鉴定，较传统的试管法有一定优势，值得临床推广。
关键词：微柱凝胶法；试管法；血型鉴定
Objective: To explore the value of manual microcolumn gel immunoassay in the identification of ABO and RhD blood group antigens. Methods: one divides into two. Blood samples from 700 patients in different departments, diseases and gender were collected from March 2018 to March 2020. They were divided into 1400 blood samples. The ABO and RhD blood group antigens were identified by manual microcolumn gel method and tube test method respectively, and the results and reaction intensity were compared. Results: there was no statistical difference in accuracy between manual microcolumn gel test and test tube method (P>0.05). Manual microcolumn gel method was superior to test tube method. Conclusion: manual microcolumn gel method has a certain advantage over the traditional test tube method for the detection of ABO and RhD blood group antigens, and is worthy of clinical promotion.
Key words: microcolumn gel method; test tube method; blood group identification
为保证临床输血的安全性，需要进行ABO和RhD血型鉴定试验。检测结果准确与否，直接关系到受血者的生命安全。目前临床上较传统的检测方法是试管法，此法结果准确，但也存在操作难以规范、结果不易长期保存等缺点[1]。1994年，美国食药监局（FDA）批准微柱凝胶试验（MGT）作为红细胞抗体检测及ABO和RhD血型鉴定的选用方法[2]，目前已在国外大量应用。而在国内，微柱凝胶法也逐渐被各大医院和血站使用，其优点是易于自动化、标准化，反应结果保存时间长。现将我院收集到的血液样本分别进行微柱凝胶法和试管法检测，比较其优劣。
1 资料和方法
1.1 样本
收集2018年3月～2020年3月间各临床科室送到检验科的血液样本700例，均一分为二，成为1400例血液样本，分为A、B两组，做好标记，样本间无病种、性别差异。
1.2 试剂和仪器
A、B单克隆标准血清：购于南京华欣药业生物工程有限公司；抗D单克隆抗血清：来源于加拿大进口分包装；微柱凝胶免疫检测卡：购于长春博讯生物技术有限责任公司；BYL03—Ⅰ型血型血清多用离心机：购于长春博彦科学仪器有限责任公司。检测试剂均在有效期内并严格按照试剂及仪器说明书操作。
1.3 方法
A组：首先观察微柱凝胶卡外观，若有干胶、杂质、气泡则不可使用，检查无误后，将卡平衡至室温（18-25℃），再用卡式离心机1000r/min离心3min；然后制备红细胞悬液，取样本血液2ml，用EDTA抗凝，在室温下2000rpm离心2min，分离血浆，取10μl红细胞，用生理盐水配成0.8%的红细胞悬液；接着斯开微柱凝胶卡上端的锡箔纸，在A、B、RhD孔中分别加入红细胞悬液50μl，卡放到卡式离心机中离心5min，之后观察记录结果。
B组：按照《全国临床检验操作规程》[3]操作。
1.4 结果判定
A组：阳性结果：红细胞抗原与相应抗体发生凝集，产生的复合物浮在凝胶表面或胶中；阴性结果：红细胞没有与相应抗体发生反应，沉在微柱凝胶的尖底部；反应强度：红细胞与相应抗体产生的复合物位于凝胶表面为强阳性，位于胶中为弱阳性。
B组：阳性结果：红细胞抗原与抗体凝集；阴性结果：红细胞抗原与抗体未发生反应。反应强度：红细胞抗原与抗体凝集出一个大块或多个较大块复合物为强阳性，出现无数小块或细小颗粒凝集为弱阳性，不出现凝集为阴性。
强阳率=强阳性数/（强阳性数+弱阳性数）×100%?
1.5 统计学处理
采用SPSS17.0软件处理实验数据，计量资料使用x±s表示，采用t检验；计数资料使用χ2检验。P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 两组血液样本ABO血型鉴定结果比较
1400例血液样本中，共有5例出现误判，其中微柱凝胶法组出现1例，原因是样本红细胞破碎，出现假阳性，将B型错误鉴定为AB型，之后经过重新采血鉴定结果和试管法相符合；试管法组出现4例错误，原因是患者A抗原低，出现假阴性，其中2例将A型误判为O型，另外2例将AB型误判为B型。两组间鉴定结果的符合率为100%，无显著性差异（P>0.05）。
2.2 两组血液样本ABO血型鉴定反应强度结果比较
试验结果显示，微柱凝胶组700例血液样本中出现1例假阳性，其余699例中强阳性430例，阴性269例，强阳率为100%；试管法组700例血液样本中，除去假阴性4例，则出现强阳性335例，弱阳性90例，阴性271例，强阳率为78.8%。两组相比，微柱凝胶法的反应强度明显优于试管法，组间有显著性差异（P<0.05）。
2.3 两组血液样本抗D结果比较
试验结果显示，微柱凝胶法组检测出抗D强阳性699例，阴性1例，强阳率100%，而试管法组强阳性612例，弱阳性87例，阴性1例，强阳率87.5%，两者相比符合率没有显著差异，但微柱凝胶法的反应强度较试管法组有显著优势（P>0.05）。
3 讨论
血型在临床上有重要意义，输血前，必须对血型进行检验，并要进行交叉配血试验。Rh血型是仅次于ABO血型的重要血型系统，受到广大医务工作者重视，是现在血型检测的必检项目，据相关研究显示，Rh系统中最重要的是D抗原，其抗原性最强，是导致新生儿溶血的常见因素。
传统的测定ABO及RhD血型的方法是试管法，该法测定的准确性高，是血型测定的金标准，但是操作难以规范化、自动化，敏感性差，结果不易保存。
随着医学检验技术的发展，微柱凝胶技术被广泛用于输血领域，主要有血型鉴定、抗体筛查、交叉配血、IgG抗A、IgG抗B滴度检测等，其核心为凝胶分子筛，即板卡微柱中充满特制的凝胶介质，当红细胞与相应抗体发生凝集后，被凝胶上层阻隔，不能通过凝胶筛孔，而未发生凝集现象的红细胞，可顺利到达凝胶底部聚集，从而通过肉眼观察即可判断检验结果。微柱凝胶卡从左往右第一至三孔依次含有抗A、抗B、抗D抗体，用来正定型鉴定血型，第四孔用来空白对照，第五、六孔用于反定型鉴定血型。微柱凝胶法易于操作，所需样本量少于试管法五倍，尤其适用于新生儿、大面积烧伤等不易抽血的患者；反应强度高，结果易于观察，并可以拍照长期保存图谱[4]，但是若血液样本中的红细胞破碎或被污染，则会引起假阳性；若红细胞浓度过高或离心不彻底，则可能引起假阴性或假阳性[5]。
本文分别用手工微柱凝胶法和传统试管法进行ABO和RhD血型的鉴定，结果显示，两种方法在测定的准确性上没有差异，均准确可信，而反应强度上，手工微柱凝胶法明显优于试管法，尤其在进行RhD血型时，手工微柱凝胶法比试管法更适合。但是手工微柱凝胶法对血液样本要求更高，需要检验人员严格执行操作规程，同时保证微柱凝胶卡的质量[6]。随着检验医学的不断发展，相信手工微柱凝胶法测定ABO血型和RhD血型一定会被广泛应用。
参考文献
[1] 李勇，杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术[M].北京：中国科学技术出版社，1999：276～278.
[2] Lapieer Y，Rigal D，Adam J，et al.The gel rest：A new way to detect red cell antigen-antibod reaction[J].Transfusion，1990，30（2）：109～113.
[3] 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程[M].第2版.南京：东南大学出版社，1997：89-91.
[4] Langston MM，Procter JL，Cipolone KM，et al.Evaluation of the gel system for ABO grouping and D typing[J].Transfusion，1999，39（3）：300～305.
[5] 王小平.微柱凝胶法应用于血型鉴定[J].广州医药，2007，19（2）：60-61.
[6] 杨惠元，邬静雯，宋娟.微柱凝胶法血型鉴定的临床价值[J].国际检验医学杂志，2013，34：96～97.