范维
上海市闵行中学
摘要：教材未提供可供参考的青霉素浓度，为了便于学生开展实验，本实验探究了6种不同浓度青霉素的抑菌效果，摸索出了适合用于课堂实验的浓度。此外，在本实验的基础上，增加了青霉素对大肠杆菌和酵母菌抑菌作用的比较实验，巩固了教材知识点，丰富了实验内容。
关键词：抑菌现象，青霉素浓度，抗生素
1材料与方法
1.1菌种
大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、藤黄八叠球菌、酵母菌
1.2主要实验试剂和仪器
无菌玻璃刮铲、镊子、酒精灯、LB培养基、YPD培养基、氨苄青霉素、分别浸过不同浓度氨苄青霉素和无菌水的圆纸片、移液枪
1.3 操作环境
教材要求在超净工作台完成操作，我们经过实验发现，用酒精棉球擦净桌面，然后在酒精灯火焰附近操作，培养1天，结果明显且不会污染杂菌，这样更方便每个学生动手操作。
1.4 接种
斜面菌种用无菌水洗脱成菌悬液，将菌悬液于LB液体培养基中，培养1天，用涂布法接种于固体培养基。
1.5 青霉素浓度的确定
氨苄青霉素用无菌水稀释，配置0.5μg/mL、5μg/mL、50μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL、5000μg/mL的青霉素溶液，将无菌圆纸片浸泡在溶液中。用无菌水浸泡无菌圆纸片作为对照。取出圆纸片时沥干过多的溶液，再置于涂布过细菌的平板上，在37℃恒温箱中倒置培养1天，每组实验重复三次，记录实验结果。
1.6 青霉素对大肠杆菌和酵母菌抑菌作用的比较实验
取浸泡过5000μg/mL的青霉素溶液的无菌圆纸片，置于涂布过大肠杆菌和酵母菌的平板上，分别在37℃恒温箱和30℃的恒温培养箱中倒置培养1天，每组实验重复三次，记录实验结果。
2结果与分析
2.1适宜青霉素浓度的确定
由图1可以看出，0.5μg/mL、5μg/mL、50μg/mL三种浓度下，对大肠杆菌无抑制效果；500μg/mL、1000μg/mL、5000μg/mL三种浓度有抑制效果，且抑菌圈大小适中。因此确定500μg/mL、1000μg/mL、5000μg/mL三种浓度为适宜的实验浓度。比较这三种浓度对大肠杆菌抑制效果，由表1可以看出，青霉素浓度越高，抑菌圈直径越大。此外，可以发现同一浓度青霉素对大肠杆菌的抑制作用大于藤黄八叠球菌和枯草杆菌，而同一浓度青霉素对藤黄八叠球菌和枯草杆菌的抑制作用没有明显差异。
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图1.不同浓度青霉素对大肠杆菌的抑制作用
a~f依次为0.5μg/mL、5μg/mL、50μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL、5000μg/mL的青霉素对大肠杆菌的抑制效果。
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表1.同一浓度抗生素对不同细菌生长的抑制作用
表中为不同实验条件下，抑菌圈直径的大小。
2.2 青霉素对大肠杆菌和酵母菌抑菌作用的比较实验
由图2可以看出，与无菌水对照组相比，5000ug/mL青霉素对大肠杆菌有抑制作用，在圆纸片周围形成无菌的透明清晰区。而对酵母菌没有抑制作用，酵母菌在整个培养基上均正常生长。
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图2.大肠杆菌和酵母菌抑菌实验
a图为5000ug/mL青霉素溶液处理后的大肠杆菌抑菌实验结果，b图为5000ug/mL青霉素溶液处理后的酵母菌抑菌实验结果。
3小结
上海科学技术出版社《生命科学》（拓展型课程）中的实验1.3“菌落和抗生素抑菌现象的观察”未提供可供参考的青霉素浓度，为实验的实施带来了挑战，本实验摸索出了合适的青霉素浓度，为开展学生实验提供了参考。同时考虑到学生人数较多，学校超净工作台数量有限，我们对实验环境进行了改进，通过酒精棉球擦拭桌面和双手，利用酒精灯火焰创设小范围的无菌环境，减少培养天数至1天，来降低杂菌污染的概率，从实验结果看较理想，可以方便课堂实验的开展。此外，为了使学生更直观的体会抗生素的作用，我们增加了青霉素对大肠杆菌和酵母菌抑制作用的比较实验，引导学生讨论抗生素滥用、耐药现象。巩固了教材知识点，也丰富了实验教学内容。
4参考文献
［1］黎满香, 刘红旗. 试管法和纸片法抑菌试验的比较[J]. 中国兽医科技, 1997, 027(002):31-32.
［2］孟海英. 关于"菌落和抗生素抑菌现象的观察"实验的一点探究[J]. 生物学教学, 2009, 34(12):40-41.
［3］李敏. 浅谈抗生素滥用的现象与预防对策[J]. 中外健康文摘, 2012, 09(27):274-274.
作者简介：范维，1990.11，女，硕士研究生，上海市闵行中学，上海市闵行区江川东路950号，联系电话:15902181872