李莉 1刘延东1张晓星 1王萌嘉 1王丽哲1 丰键宇1
那超1 王鹏1刘平1张春男1尤玉红2王岩3任冲4
1.黑龙江省医院中西医结合科 黑龙江哈尔滨 150036
2.黑龙江省医院检验科 黑龙江哈尔滨 150036
3.黑龙江省医院病理科 黑龙江哈尔滨 150036
4.武警黑龙江总队医院 黑龙江哈尔滨 150036
摘要：目的：探究保肝II号对刀豆蛋白A(ConA)所致肝损伤的保护作用。方法：建立实验性自身免疫性肝炎小鼠模型，分为五组:空白组、模型组、保肝号II对照组、保肝号II保护组、泼尼松对照组。观察保肝II号对自身免疫性肝炎的作用。检测小鼠血清肝功[丙氨酸氨基转移酶（ALT），和门冬氨酸氨基转移酶（AST）]水平，肝内细胞因子{肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactor，TNF-a）、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6）}水平，及CD4+T和CD8+T 情况，从而了解肝损伤程度以及保肝号II对自身免疫性肝炎的治疗作用。结果：保肝II号保护组小鼠血清肝功（丙氨酸氨基转移酶（ALT））为（31.51±3.28）u/L，和门冬氨酸氨基转移酶为（AST）为（33.85±3.22）u/L，明显优于其他组。结论：“保肝II号”能有效防治AIH肝细胞损伤，适合作为临床防治AIH的药物。
关键词：保肝II号；自身免疫性肝炎；肝损伤
自身免疫性肝炎（AIH）是一种由针对肝细胞的自身免疫反应所介导的肝脏实质炎症。尽管无明确病因，但以往研究表明，AIH主要是因T细胞的活化和炎症因子的介导。自身免疫对机体的损伤是通过多种不同的途径造成的。因此，找到一种能够减少自身免疫性肝炎对于自身机体损伤的药物尤为关键。保肝II号是我科的经验方，本着“临床经验，理论研究，再指导临床”的理念，本文对保肝号II能否有效防治AIH肝细胞损伤进行了相关研究。
1资料和方法
1.1一般资料
选取SPFBalb/c小鼠60只，均为雄性，年龄为6周，体重均在20~23克，实验前常规供给清洁饲料。
1.2实验方法
将60只小鼠平均分为五组，每组十二只，分别为空白组、模型组、保肝II对照组、保肝II号保护组，泼尼松对照组。其中空白组为正常对照，尾静脉注射磷酸缓冲液(PBS)，生理盐水灌胃；模型组鼠尾静脉注射20mg/kg ConA（刀豆素蛋白A），建立AIH模型，生理盐水灌胃；保肝II号对照组，尾静脉注射磷酸缓冲液(PBS)，保肝ll号200mg/kg灌胃；保肝ll号保护组，鼠尾静脉注射20mg/kgConA，保肝II号200mg/kg灌胃；泼尼松对照组鼠尾静脉注射20mg/ConA，泼尼忪200mg/kg灌胃。给药后观察小鼠死亡率，并分别于2h，8h，24h后分批处死小鼠，进行检测。
1.3观察指标
检测五组小鼠血清肝功龍（丙氨酸氨基转移酶（ALT），和门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平，用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肝内细胞因子{肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactor，TNF-a）、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6）}水平，用流式细胞技术检测CD4+T和CD8+T 水平，从而了解肝损伤情况。
1.4统计学处理
本研究数据均经过SPSS20.0版进行处理，5组小鼠的观察指标为计量资料（x±s表示，t检验）。当P＜0.05时，表示5组小鼠在用不同药物后各项指标差异明显，统计学具有意义。
2结果
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3讨论
ConA是从植物刀豆中提取出的植物凝集素，ConA诱导的AIH为T细胞介导，伴有炎症介质升高、肝细胞凋亡，与人类AIH非常接近，故选用ConA诱导的AIH作为实验模型[1]
自身免疫肝炎患者血清内TNF-α明显高于正常人[2]，TNF-α是通过活化机体内T细胞参与肝脏功能免疫损[3]。巨噬细胞、中性粒细胞等免疫细胞侵袭肝脏炎症IL-6是免疫细胞分泌的效应分子，对肝损伤的进展有着重要作用[1] [4] [5] [6]。
在中医学经典著作中，没有AIH的相关病名，因疾病发生的不同阶段，可有多种临床表现，大致属于‘黄疸’，‘协通’，‘积聚’，‘肝着’，‘鼓胀’等范畴。
多数医家归纳为肝气郁结、肝肾阴虚、血瘀、湿热蕴结、气阴两虚、脾肾阴虚[7] [8]其中，肝肾阴虚、血瘀、湿热蕴结在AIH的过程中，占有主导地位，保肝II号是我科多年总结的协定处方[9]对于湿,毒,虚,瘀所致的肝肾阴虚,血瘀,湿热蕴结型的AIH有一定的疗效[10] [11] [12] [13],
本实验中，保肝II号保护组小鼠血清肝功龍（丙氨酸氨基转移酶（ALT））为（31.51±3.28）u/L，和门冬氨酸氨基转移酶为（AST）为（33.85±3.22）u/L，肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactoru，TNF-a）为（881±2.97pg/mL），白细胞介素-6(interlcukin-6,IL-6）为（28.85±1.32）u/L，CD4+T为（0.7738±0.0327），CD8+T为（0.4224±0.293）明显优于其他组，与先前实验[14 ],[15 ][16 ][17 ][18 ][19没有矛盾。因此，“保肝II号”能有效防治AIH肝细胞损伤，适合作为临床防治AIH的有效药物。通过上述实验研究，利用多种检测手段与方法，多项实验指标的检测，为“保肝II号”能有效防治AIH肝细胞损伤提供了一定的理论与实验依据，为AIH发病机制及改善肝细胞更加广泛应用于临床提供了一定的实验依据。 由于实验的例数和实验的内容有限，还需继续做深入的研究探讨。[20 ][21 ][22 ][23 ]
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