张丽1 白静2 王利新3
1宁夏医科大学研究生院 宁夏中卫750004;
2银川市妇幼保健院 宁夏银川市 750000;
3宁夏医科大学总医院 宁夏银川市 750000
摘要目的：评估MP抗体检测与MP-DNA检测在儿童肺炎支原体感染中的应用价值。方法：将2018年1月至12月在本院进行治疗的100 例MP 感染患儿作为研究对象，同时用被动凝集抗体检测法和实时荧光定量PCR法进行检测，对检测结果进行统计分析。结果：对100 例MP感染的患儿进行检测，其中应用被动凝集抗体检测法检测出94例呈阳性，阳性率为94.00%，应用实时荧光定量PCR法检测出95例呈阳性，阳性率为95.00%，两种检测方法检出的4-6岁组患儿阳性率均最高，均为100%，两种方法检测阳性率在各年龄组均无显著性差异（P<0.05）。结论：被动凝集法以及实时荧光定量PCR法在儿童肺炎支原体感染的检测中特异性强，且两种检测方法无显著性差异（P<0.05），均可以应用于临床检测。
关键词：被动凝集法；实时荧光定量PCR；儿童肺炎支原体
肺炎支原体肺炎是学龄前和学龄期儿童常见的一种肺炎，婴幼儿亦常见，占住院儿童社区获得性肺炎的10%～40%，其病原体为肺炎支原体 [1-2]。临床上感染肺炎支原体的儿童在感染初期没有很明显的临床症状，而且有很多症状不会体现在肺部，而且该类疾病的临床进展期比较长，这就致使肺炎支原体感染在临床上有较高的误诊率[3-4]。虽然有关MP感染而死亡的儿童报道较少，但如果不对这类疾病进行及早的治疗与控制，会给患病儿童带来多种并发症，严重的并发症可能会损伤儿童脆弱的神经，影响儿童的生长发育［5-6］。就目前临床对MP感染的了解来看，仅仅通过临床症状很难将MP于其他的病原体引起的呼吸道感染进行分辨，由于MP感染后的治疗不同于其他病原微生物，对MP进行及早的诊断，是临床减少抗生素滥用的有效手段，发现准确、快速的MP诊断方法意义重大[3-7]。目前，在我国对MP进行临床诊断，一般采用血常规分析结合患儿临床症状以及细菌培养或MP抗体检测。本研究拟对被动凝集法以及实时荧光定量PCR法对MP感染进行检测，确定他们在MP感染中的应用价值，以协助临床做出诊断和治疗。
1、资料与方法
1.1、一般资料 2018年1月-2018年12月，在我院就诊的MP感染患儿100例，年龄为0-9岁，分别采用血清标本与咽拭子标本。
1.2、方法
1.2.1、肺炎支原体抗体检测取3ml静脉血分离出血清，按照SERODIA-MYCOⅡ试剂盒说明书操作，以稀释滴度≥1∶40 判断为阳性。
1.2.2、肺炎支原体DNA检测取咽拭子标本，用荧光定量PCR法检测MP DNA（试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司），以增长曲线呈典型的S曲线且Ct值＜27(荧光定量pcr的ct值代表是指荧光信号到达设定域值时所经历的循环数，所以没有单位。)判为阳性。
1.3、数据统计分析：应用Excel 进行数据分析整理，用SPSS 19.0 软件对所有数据进行统计学分析，以P＜0.05为有显著性差异。
2、结果
2.1、两种检测法阳性检出率比较两种检测方法阳性检出率比较见表1。其中应用被动凝集抗体检测法阳性率为94.00%，应用实时荧光定量PCR法阳性率为95.00%，两组阳性检出率无显著性差异（P>0.05）。
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检测方法检出率
被动凝集法 94.00%（94/100）
实时荧光定量PCR法 95.00%（95/100）
P 2.44
2.2、不同年龄组比较将所有100例患儿分为0-3岁组、4-6岁组、7-9岁组。其中两种方法检测的4-6岁组患儿阳性率均高于其他年龄组。两种方法检测阳性率在各年龄组均无显著性差异（P<0.05）。结果见表2。
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检测方法 0-3岁检出率 4-6岁检出率 7-9岁检出率
被动凝集法 76.19%（16/21） 100%（48/48） 96.77%（30/31）
PCR法 80.95%（17/21） 100%（48/48） 96.77%（30/31）
P 2.98 2.99 1.48
鉴于以上结果，被动凝集法和实时荧光定量PCR法在儿童MP 感染检测中均具有较好效果，两种方法无显著的检测差异性。
3、讨论：
MP广泛的散布于自然界中，它最早在1898年于美国被发现，而且该类微生物可以长久的生存于土壤、污水、人体以及某些动物的体内，是一类威胁人类生命健康的致病菌。MP在人群中主要通过飞沫进行传播，而且病程一般较长，2-3周后才可能出现一些临床症状，该类疾病更易发生在儿童中间，主要临床症状为头痛、咽喉发炎，有时痰中带血，也可有呼吸困难、发热、持续性咳嗽等，多为呼吸道症状，一年四季均可发生，多发为秋冬季节。
本文所用的被动凝集法以特异性免疫凝集反应为基础，以明胶粒子为载体，与MP 抗原结合，在血清中与MP抗体反应，该方法简单、方便、灵敏度高，无需借助其他仪器，为临床早期诊断的常选方法[3]。实时荧光定量PCR反应具有灵敏度高、特异性强等优点，不受患儿免疫功能发育不完善的影响，可早期诊断MP 感染[7]。
在本次研究中，应用被动凝集抗体检测法和荧光定量PCR法检测阳性率分别为94.00%和95.00%，两种方法无显著性差异。4-6岁组患儿阳性率均高于其他年龄组，说明在该年龄段更易被MP感染。经验证，这两种检测方法均可以应用于临床进行儿童肺炎支原体感染的检测。
参考文献：
[1] 田婧. 儿童肺炎支原体肺炎相关实验室检测的研究进展[J]. 包头医学院学报.2019,35(2):131-132
[2] 张玲，冯仕川，魏少军，等. 被动凝集法检测儿童肺炎支原体抗体的临床分析[J]. 中国医院药学杂志.2018:86-94
[3] 宋小芳. 儿童肺炎支原体感染的三种检测方法的临床应用分析[J]. 临床医药实践.2018,27(10):767-770
[4] 杨晓菲，赵翠芬，孔清玉. 实时荧光定量PCR检测儿童肺炎支原体16S rRNA的临床意义[J]. 热带医学杂志.2017,17(8):1067-1070
[5] 冯王富，冯梅华，佘意贵. 肺炎支原体检测中应用胶体金法与被动凝集法的优劣差异[J]. 首都食品与医药.2019:63-64
[6] 谢文俊. 肺炎支原体抗体三种血清学检测方法的对比分析[J]. 中国医药科学.2019,9(11):91-92
[7] 冯星星，鲁文志，陈丽萍，等. 胶体金法与被动凝集法检测肺炎支原体抗体结果比较[J]. 实用医技杂志.2019,26(4):448-450