林春坚，何玉环
海南诺峰医药科技有限公司 海南 海口 570311
摘要：目的：建立地氯雷他定口服溶液中依地酸二钠含量的HPLC法。方法：采用C18（4.6×250mm，5um）色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为0.5%磷酸二氢铵缓冲液（磷酸调节pH值至3.0），梯度洗脱，检测波长254nm，柱温30℃，流速1.0mL/min，进样量20μl。结果：依地酸二钠浓度在范围内0.0211~0.0633mg/ ml范围内线性关系良好（r=1.0000）；回收率为99.17%，RSD为1.42%；测定6份样品，RSD为0.24%。结论：方法简便快捷、准确、专属性高、重复性好，适用于依地酸二钠的含量测定。
关键词: 依地酸二钠；HPLC；含量测定
依地酸二钠又称为乙二胺四乙酸二钠，是一种常用的金属离子络合剂。在药品、食品和化妆品中被用作螯合剂。被列为GRAS安全物质，收载于FDA《非活性组分指南》（吸入剂、注射剂、眼用制剂、胶囊剂和片剂、溶液剂、混悬剂、糖浆、直肠的、局部制剂和阴道制剂）及英国许可用于非注射和注射给药制剂[1]。依地酸二钠能有效增强药物的稳定性，其与金属离子形成稳定的水溶性螯合物，能够防止药物自身的氧化，有利于提高药物在制备、存储与临床配制过程中的稳定性。在药物制剂中依地酸二钠的一般浓度为0.005%~0.1%[1]。
2015年版《中国药典》收载了依地酸二钠的含量测定方法，采用滴定法进行测定[2]，考虑到该口服溶液中内在成分较为复杂，用滴定法进行测定时会产生其他成分的干扰，不适用于本品中依地酸二钠的测定。参考文献[3]，本文建立了地氯雷他定口服溶液中依地酸二钠的含量测定方法。
1 仪器与试药
Ultimate 3000高效液相色谱仪（美国Thermo公司）；PWN224ZH电子天平（奥豪斯仪器常州有限公司）；pH-30酸度计（赛多利斯科学仪器北京有限公司）。
磷酸二氢铵（分析纯，上海麦克林生化科技有限公司）；磷酸（分析纯，广州化学试剂厂）；乙腈（色谱纯，美国TEIDA公司）；超纯水。
2 实验方法
2.1 色谱条件
色谱柱：INERTSIL ODS-3 C18（4.6×250mm，5μm）；流动相A为乙腈，流动相B为0.5%磷酸二氢铵缓冲液（磷酸调节pH值至3.0），按表1进行梯度洗脱；检测波长：254nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样量：20μl。
表1 梯度洗脱程序
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2.2溶液的配制
2.2.1空白溶液
精密量取空白辅料溶液（制剂中的其他组分，不含依地酸二钠）5ml和0.04mol/L硫酸铜溶液5ml，置同一25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.2对照品溶液
取依地酸二钠对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；精密量取对照品储备液5ml和0.04mol/L硫酸铜溶液5ml，置同一25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.3供试品溶液
精密量取本品5ml和0.04mol/L硫酸铜溶液5ml，置同一25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
3方法学研究
3.1 系统适用性试验
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，见下图1。
图1 高效液相色谱图
3.2 线性与范围
取依地酸二钠对照品约25mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；分别精密量取对照品储备液2、3、4、5、6ml置25ml量瓶中，加0.04mol/L硫酸铜溶液5ml，加水稀释至刻度，摇匀。分别精密量取溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归。线性方程为Y=166.58x+0.0556，r=1.0000。结果表明，依地酸二钠在0.0211~0.0633mg/ ml范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。
3.3溶液稳定性试验
在室温条件下放置，分别于0、2、4、6、8、12、24h时，精密量取对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品峰面积RSD为0.20%，对照品峰面积RSD为0.41%。结果表明，供试品溶液与对照品溶液在室温条件下放置24h内稳定性良好。
3.4回收率试验
分别按处方比例配制含依地酸二钠80%、100%、120%的制剂溶液，各3份，按2.2.3配制供试品溶液。精密量取对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测得的平均回收率为99.17%，RSD为1.42%。结果表明方法回收率良好。
3.5重复性试验
取同一批次样品，按2.2.3配制供试品溶液，共6份。精密量取对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测得依地酸二钠的平均回含量为0.2458mg/ml，RSD为0.24%。结果表明方法重复性良好。
3.6 样品测定
取同一厂家不同批次的市售品，共3批。精密量取对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，3批S013822、S030589、T009631样品中依地酸二钠的含量分别为0.2428、0.2420、0.2414mg/ml。
4 结论
经过对依地酸二钠含量方法进行详细的研究，方法的准确度良好、专属性高、精密度良好，且简便快捷，适用于地氯雷他定口服溶液中依地酸二钠的含量测定。
参考文献
[1]Raymond C Rowe， Paul J Sheskey and Sian C Owen. Handbook of Pharmaceutical Excipients. Fourth Edition. [M]London, Chicago: Pharmaceutical Press，2003.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版（四部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015:523.
[3]广州菲罗门科学仪器有限公司.依地酸二钠（EDTA-2Na）的检测[EB/OL]. http://www.gzflm.com/index.aspx?lanmuid=88&sublanmuid=801&id=795，2017-12-26.