李竹睿
（镇江市第一人民医院；江苏镇江212000）
【摘要】目的：利用高效液相色谱法测定连花清瘟胶囊中绿原酸的含量。方法：以Kromasil C18柱为色谱柱；柱温设置在40°C。以乙腈-0.4%磷酸溶液为流动相，流速调整至1.0mL/min-1；将检测波长设置在327nm。进样量设置在10μL，充分分离样品。分别制备对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液,应用于高效液相色谱仪对绿原酸含量测定。结果：表明绿原酸在6.40-76.70μg·mL-1之间，线性关系良好，回收率为99.70%。结论：连花清瘟胶囊中绿原酸的含量采用高效液相色谱法进行测定，具较好的重现性，且操作简便，效果可靠。
【关键词】连花清瘟胶囊；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定
连花清温胶囊以连翘、金银花、炙麻黄、炒苦杏仁、石膏、鱼腥草、板蓝根等多味药材为主要成分，对阻止流感病毒入侵伤害人体有一定作用，具有清瘟解毒，宣肺泄热的功效[1-2]。连花清瘟胶囊中金银花是主要组成成分之一，而绿原酸是金银花的主要有效成分。应用高效液相色谱法（HPLC）对绿原酸进行含量测定，可为药品质量管控提供参考依据。
1 仪器与试剂
仪器选用高效液相色谱仪（日本岛津）。试剂选用：绿原酸对照品，连花清瘟胶囊，乙腈、甲醇均为色谱纯，水为注射用水。
2 方法与结果
2.1 设置色谱
以Kromasil C18柱为色谱柱，柱温设置在40°C；以乙腈-0.4%磷酸溶液为流动相；流速调整至1.0mL/min-1；将检测波长设置在327nm；同时进样量设置在10μL。
2.2.1 制备对照品和供试品溶液
对照品制备：对21.64mg的绿原酸对照品称取，在200ml棕色量瓶中放置，取50%甲醇加入作稀释处理，完成浓度为44.27μg·mL-1溶液的制备。供试品制备：对连花清瘟胶囊内容物称取，作研细处理，取1g左右，在50%甲醇25mL中精密加入，对重量称定，应用超声作30min处理，冷却，再对重量称定，应用50%的甲醇对减失部分的重量补充，作充分摇匀动作，再进行滤过操作，获取溶液。
2.2.2 阴性样品试验
阴性样品制备:制备不含金银花的连花清瘟胶囊研细后的甲醇溶液。分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性溶液各10μl,按上述色谱条件进行测定，对照品和阴性溶液相应时间无色谱峰。经测定可知HPLC测定绿原酸含量不受其他成分影响。
2.3 考察线性关系
将绿原酸对照品对照下列不同浓度配制出系列标准溶液，即6.40μg·mL-1、12.80μg·mL-1、25.60μg·mL-1、38.40μg·mL-1、64.00μg·mL-1、76.80μg·mL-1，分别取10μl进样，在上述所设定的色谱条件下展开分析，对峰面积进行测定，将绿原酸含量C设为横坐标，峰面积A高为纵坐标，对标准曲线进行绘制。r =0.9996，表明在6.40-76.70μg·mL-1之间，线性关系良好。
2.4 精密度实验
对绿原酸对照品溶液10μL精密吸取，依据上述色谱条件，展开6次平行测定，对峰面积进行记录，RSD％经观测为1.20%，表明具有良好的精密度。
2.5重现性实验
取连花清瘟胶囊内容物做研细处理，对约1g选取，分为6份，制备并测定，对峰面积记录，得出此物质平均含量经检测为0.8449mg·g-1，同时检测RSD=1.05%，具有良好重现性。
2.6 稳定性试验
对同一供试品溶液选取，在0h、1h、5h、8h、12h分别取10μL进样，依据上述色谱条件进行测定操作，对峰面积进行记录，RSD％值经观测为1.22%。提示在12h内，供试品溶液保持在稳定的范围内。
2.7回收率试验
取含量已明确的连花清瘟胶囊内容物，作研细处理，按每份0.5g划分，共6份。取对照品21.64mg(质量浓度为43.10ug?ml-1对照品溶液)加入，按供试品制备的方法操作，进行色谱测定，回收率为99.70%。
2.8测定样品含量
将连花清瘟胶囊糖衣去除，研为粉末处理，取约1g，按6份划分，依据供试品溶液制作方法，完成制备环节。分别对供试品和对照品溶液各精密抽取10μL，于液相色谱仪中注入，依据上述条件进行测定，并对峰面积记录，通过外标法对绿原酸含量计算。见表1。
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3 讨论
连花清瘟胶囊以金银花为君药，在服用后可有效改善体内寒热状况，化解体内毒素，发挥清瘟散热作用[3]。金银花中绿原酸为含量最高的有效成分，具抗病毒、抑菌等生物活性。通过对金银花中含有的绿原酸进行测定，同时将其设为测定的标准，可对制剂内在质量的控制发挥有力参考作用[4]。
多次试验均显示，将绿原酸对照品在自然光中暴露，其所具有的稳定性也会发生消失样改变，分解能力呈增加显示，故在操作阶段，需对闭光引起重视，可应用棕色量瓶进行存储。就绿原酸在化学结构方面的特征而言，含有羧基，色谱峰在经乙腈-水和甲醇-水流动相时，有拖尾的情况，通过在流动相体系，取较少的冰醋酸或磷酸置入，即可改善峰型[5]。 在实验过程中，对提取溶液时间、种类展开了单因素考察，效果无明显差别。
综上，应用高效液相色谱法，样品处理过程较为简单，回收率较为理想，且具较高的重现性，精密度也居理想水平，开展价值十分突出。
参考文献：
[1]徐丽,叶英剑.RP-HPLC测莲花清瘟胶囊中绿原酸含量[J].海峡药学,2017,29(1):64-65.
[2]马英,马桂云,周沙, 等.高效液相色谱法测定连花清瘟胶囊中绿原酸的含量[J].医学信息,2013,(9):334-334,335.
[3]林慧彬,彭延弟,管仁伟,路俊仙,王萌,刘桂霞,林建强. 不同种质金银花绿原酸含量比较研究[J]. 时珍国医国药,2015,26(07):1755-1756.
[4]石奇. 金银花绿原酸的酶解工艺及抗氧化活性研究[J]. 应用化工,2015,44(09):1643-1646.
[5]李翔,刘皈阳,马建丽, 等.HPLC法测定连花清瘟颗粒和连花清瘟胶囊中绿原酸的含量[J].解放军药学学报,2014,30(3):231-233.