云珍贝
海南新绿神热带生物工程有限责任公司，海南 海口 570203
摘要：文心兰的许多器官、组织都可作为外植体，本文通过选择最常用的腋芽、花芽、球茎为外植体，观察初代培养阶段，用相同的消毒方法及培养基配方下三种外植体的细菌感染的概率，得出在初代培养阶段成活率最高的外植体，以此提高组织培养的成苗率和繁殖率。
关键词：组织培养；初代培养阶段；细菌感染
文心兰（拉丁学名：Oncidium hybridum），又名吉祥兰，是兰科文心兰属植物。文心兰原产于美国、墨西哥、圭亚那和秘鲁，花型独特，形似舞女，具有较高的观赏价值，是世界重要的盆花和切花种类之一。我国文心兰的引种和栽培历史不长，生产面积尚小，远未成产业规模，远不能满足国内消费需求，更无法满足出口需求。我国地域辽阔，沿海一带的福建、广东、海南等自然条件优越，十分适宜文心兰的生长。本文试验材料来自于博鳌热带花城文心兰种植基地大棚，就地取材，为文心兰组织培养研究奠定基础，有利于文心兰基地的发展。
文心兰传统的繁殖方法主要以分株繁殖为主，但分株繁殖系数低、繁殖速度慢、周期长，长期分株繁殖会导致带有病毒的植株逐年增多，品质退化。［1］利用组织培养方法，进行大规模工厂化育苗的系统研究，开辟了一条既能大量生产文心兰种苗、又能保持该种苗性状稳定的途径。
文心兰的组织培养是一个经历许多步骤或阶段的复杂过程，大致有三个阶段：初代培养阶段：选择和栽培管理母株，启动和建立无菌培养（主要步骤：分离外植体、表面杀菌、清洗和接种到适当的培养基上）；继代培养阶段：包括原球茎的诱导及原球茎的继代培养；生根与炼苗阶段：移栽生根苗到无菌土壤中，在温室条件下炼苗。划分这些阶段，可以按指定的生产阶段供应一定的植物产品，建立一个良好的繁殖体系，各生产阶段分工明确，是促进植物大规模繁殖生产指标和计划完成的先决条件。［2］提高文心兰组织培养繁殖效率的主要措施有：提高初代培养成活率，提高继代增殖率，提高移栽成活率。对文心兰来讲，影响外植体的初代培养成活率最重要的一个问题是细菌感染。［3］文心兰的许多器官、组织都可作为外植体，本文通过选择最常用的腋芽、花芽、球茎为外植体，观察初代培养阶段，用相同的消毒方法及培养基配方下三种外植体的细菌感染的概率，得出在初代培养阶段成活率最高的外植体，以此提高组织培养的成苗率和繁殖率。
1 材料与方法
1.1材料
试验地点位于博鳌热带花城，占地面积150亩，主要包括文心兰种植大棚以及智能温室，以及种苗组培中心等配套设施。试验材料来自于博鳌热带花城文心兰种植基地大棚中优良植株。
1.2方法
1.2.1外植体的采取
在晴朗天气的上午，采取腋芽时用解剖刀从母株上切取叶片尚未展开的幼芽，选择颜色嫩绿、健壮、不带病虫害的腋芽最佳；采取花芽时用手术剪刀剪下还未开花的花梗节段，保留最底下一两节花梗；采取球茎时用手拨开球茎配合解剖刀将球茎切下，采取外植体时要注意避开阴雨天，用刀片切取芽体时避免伤及生长点及破坏文心兰母株。
1.2.2消毒及接种
将采取的腋芽、花芽及球茎分为三组，对外植体进行消毒前的预处理，腋芽将外苞片剥去，剩余5片左右，将剥好的芽去头去尾，头尾余1cm左右，尾部余2cm左右，将头部用刀片刨光滑；花芽的花梗剪成1芽1段，球茎先切去头部展开的叶片，接着用相同的方法灭菌：用75%的酒精浸泡10s后转入0.1%升汞溶液中浸泡20min,用无菌水冲洗3次，放置在无菌接种盘中，用摄子将外植体接种在相同配方的培养基中［4］。每种外植体处理30瓶，试验重复2次。
1.2.3培养条件
培养基的培养温度、湿度、pH、光照条件、光质等环境条件对外植体的生长和分化都有一定程度的影响。培养温度以（25±3)℃为最好，温度过高杂菌容易发生，培养物生长受阻。培养室的相对湿度一般保持在70%~75%。文心兰对pH比较敏感，以5.6~5.8为宜。黑暗静止培养20d，然后置于光下培养10d，此间每天光照10~12h，光照强度1600~2000 lx。从接种开始观察大约30d左右，外植体开始膨大并形成原球茎。
1.2.4培养基
外植体接种在附加一定激素配比的培养基上，20d左右外植体周围出现很多白色颗粒状愈伤组织，继续培养逐渐转为绿色，25d后可形成大量原球茎，利于原球茎增殖的培养基为MS+6-BA（1.5-4.5）mg/L+NAA(0.15-0.35)mg/L，本试验选用的培养基配方由MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L、蔗糖30g/L、琼脂粉4.5~5.0g/L组成。选用肚大口小的密闭性较好的玻璃瓶和塑料瓶作为培养容器，有利于减少文心兰瓶苗的污染。
2 试验结果与分析
从表1、表2可以看出，在相同的消毒方法和培养基配方下，腋芽污染率最低，分别为50%和60%，而花芽、球茎的污染率较高，均在80%以上，以细菌污染为主，表明一般的消毒方法还不足以消灭花芽、球茎的细菌，对消毒方法的要求更为严格，对接种人员的操作水平要求也更高。
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3 小结与讨论
文心兰的各个器官及组织均可用于组织培养，本文试验选取最常用的腋芽、花芽及球茎为外植体，从组织培养的初代培养阶段入手，通过观察博鳌热带花城文心兰的腋芽、花芽、球茎三种外植体接种成活率，得出腋芽的成活率最高。因此要想在文心兰的组织培养开辟更为广阔的道路，提高组织培养的成苗率和繁殖率，腋芽才是主要的研究方向。探究文心兰组织培养技术，针对组织培养各阶段的特点，采用适当的技术方案，对加快优良品种的培育起到十分重要的作用，为文心兰大规模生产化育苗系统研究提供了可靠的技术支持。
参考文献：
[1]王清连.植物组织培养[M].北京：中国农业出版社，2010:133?135.
[2]M.K.拉兹丹.植物组织培养导论[M].北京.化学工业出版社，2006：198?200.
[3]刘庆昌、吴国良.植物细胞组织培养[M].北京.中国农业大学出版社，2010：230?233.
[4]陈劲枫.植物组织培养与生物技术[M].北京：科学出版社，2018：280?283.
作者简介：云珍贝，1992年生，女，汉族，海南文昌人，助理工程师，本科，主要从事林业规划工作。