李圣明 陈莎莎 刘玲
长春中医药大学 吉林长春 130117
【摘要】探讨葛根复合粉对胃粘膜的保护作用，为开发胃粘膜保护功能食品提供理论依据。建立无水乙醇致大鼠胃粘膜损伤实验模型，观察胃粘膜出血情况，测定胃粘膜损伤指数，采用H&E染色方法观察胃粘膜组织的病理组织变化及各项指标进行试验分析。结果显示，葛根复合粉能够抑制胃部的肿胀及出血，可使大鼠胃粘膜损伤指数明显降低，并改善大鼠胃粘膜水肿、炎性浸润程度。表明葛根复合粉对乙醇造成的胃粘膜损伤具有保护作用。
【关键词】葛根复合粉；胃粘膜损伤；乙醇；保护作用
1 材料与仪器
1.1 试剂
葛根复合粉（实验室自制，人体每日推荐量为葛根粉2g、党参粉2g、枳椇子粉2g） ；无水乙醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、甲醛、二甲苯（北京化工厂）；苏木素溶液、伊红溶液（Sigma-Aldrich 公司）；石蜡（徕卡仪器有限公司）；中性树胶（上海华灵康复器械厂） 。
1.2 实验动物
清洁级SD健康雄性大鼠48只，体重为160g～180g，购于辽宁长生生物技术股份有限公司，生产许可证SCXK（辽）2015-0001，合格编号211002300023526。实验动物在温度20℃～25℃、相对湿度为 40%～70%的环境中饲养，自由进食、饮水。
1.3 仪器
光学显微镜、酶标仪、冷动机、电子数显卡尺、高速冷冻离心机、电子分析天平、DHG-9123A电热恒温鼓风干燥箱、电热恒温水浴锅、微量分析型超纯水机
2 实验方法
2.1 急性胃黏膜损伤模型
参照《保健食品检验与评价技术规范》[[[] 《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）]]中对胃粘膜损伤有辅助保护功能的检验方法。将清洁级 SD 健康雄性大鼠随机分为正常组、模型组、葛根复合粉300mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg 3 个组（分别相当于受试样品人体推荐量的3倍、5倍、10倍），每组8只。每天按10mL/（kg·bw）灌胃1次，连续30d，正常组和模型组每天给予等量的生理盐水。末次灌胃后，严格禁食不禁水24h，除正常组外，所有大鼠给予无水乙醇1.0mL/只，1h后处死大鼠。
2.2 检测指标的测定
暴露大鼠完整胃， 结扎幽门， 灌注10%中性福尔马林溶液10mL， 固定20min，沿胃大弯剪开，用生理盐水冲去内容物，展开胃粘膜，记录出血点，用游标卡尺测量出血带的长度和宽度。因宽度代表损伤的程度较长度大，故双倍积分，并计算实验组胃粘膜损伤积分指数和损伤抑制率。损伤积分指数=组损伤评分总和/组动物数量；损伤抑制率=（模型组损伤积分-给药组损伤积分）/模型组损伤积分×100%
2.3 病理组织学观察
选取胃粘膜损伤最严重的部位，经10%中性福尔马林固定、脱水、透明，常规石蜡包埋，5μm厚度连续切片，经H&E染色后，镜下观察大鼠胃组织病理学变化。
2.4 统计学处理
实验结果用方差分析，按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用装换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。
3 实验结果
3.1 葛根复合粉对大鼠体重的影响
在急性胃粘膜损伤模型中，给予不同浓度的葛根复合粉30d 后，各剂量组大鼠的体重增长良好，呈持续增长状态，但各时期的体重与正常组相比无显著性差异（P＞0.05）。结果见表 1。
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3.2 葛根复合粉对急性胃粘膜损伤的保护作用
大鼠胃粘膜损伤大体观察评分中，模型组胃粘膜损伤指数明显高于空白组，有统计学意义（P＜0.01）。低、中、高剂量组损伤指数明显低于模型组，有统计学意义（P＜0.01）。结果见表2。
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注：与空白对照组比较，##P＜0.01；与模型对照组比较，**P＜0.01
大鼠胃粘膜损伤病理组织学检查评分中，各剂量组病变积分与模型组比较均降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。结果见表3。
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注：与模型对照组比较，**P＜0.01；-为未检出。
4 讨论
胃粘膜损伤可能由多种原因引起，如药物、酗酒、细菌感染、情绪变化等。近年来，随着人们生活水平的提高，嗜酒人群日益增多，诱发的组织器官损害引起了广泛关注。选用急性胃粘膜损伤模型研究药物对胃粘膜的保护作用是评价胃粘膜自身防御机制对外来刺激的应激能力和对抗强度的主要内容。乙醇对胃粘膜具有很强的腐蚀性，能使表面粘膜层和粘液细胞受损，导致胃粘膜正常代谢的生理环境遭受破坏。乙醇进入胃后，经过代谢转化为乙醛，其与胃蛋白结合破坏胃粘膜结构，使中性粒细胞浸润于胃粘膜，并释放髓过氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）、氧自由基、活性氧化代谢产物、蛋白酶，并粘附于血管内皮导致粘膜损伤[[[] 张雅博，阮研硕等.乙醇性胃粘膜损伤及其保护作用的研究进展.食品安全质量检测学报，2013,4（4）]]。高浓度的乙醇可以破坏胃黏膜屏障的结构，导致粘膜充血、糜烂、上皮细胞坏死、脱落。由于乙醇具有脂溶性，过量饮用易造成不良后果，如胃炎、胃出血、胃溃疡等胃粘膜损伤类疾病[[[] Senol A，Sler M，Karahan AG，et al.Preventive effect of probiotics and -tocopherol on ethanol-induced gastric mucosal injury in rats[J].Journal of Medicinal Food，2011,14(1/2)]-[[] Zhao W，Zhu F，Shen W，et al.Protective effects of DIDS against ethanol-induced gastric mucosal injury in rats [J]. Atca Biochim Biophys Sin(Shanghai)，2009，41(4)]-[[] 任建林，潘金水，董菁.酒精性胃病 [J]. 世界华人消化杂志.2005，13(17)：]]。因此开发一种对胃粘膜损伤有辅助保护功能的产品具有广阔的市场前景。本实验通过建立大鼠急性酒精性胃粘膜损伤模型，灌服相应受试物，在本实验条件下，葛根复合粉对胃黏膜损伤有辅助保护功能。
引用文献
[1] 《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）
[2] 张雅博，阮研硕等.乙醇性胃粘膜损伤及其保护作用的研究进展.食品安全质量检测学报，2013,4（4）
[3] Senol A，Sler M，Karahan AG，et al.Preventive effect of probiotics and -tocopherol on ethanol-induced gastric mucosal injury in rats[J].Journal of Medicinal Food，2011,14(1/2)
[4] Zhao W，Zhu F，Shen W，et al.Protective effects of DIDS against ethanol-induced gastric mucosal injury in rats [J]. Atca Biochim Biophys Sin(Shanghai)，2009，41(4)
[5] 任建林，潘金水，董菁.酒精性胃病 [J]. 世界华人消化杂志.2005，13(17)：