张晨1 ，姜茂林2 ，刘荣2
1中国人民解放军联勤保障部队第985医院 山西太原030001
2山西省山地阳光食品有限公司 山西忻州 036300
摘要：研究目的在于观察沙棘籽油番茄红素复合物的毒理学安全性评价。按《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)进行安全性评价试验。结果 沙棘籽油番茄红素复合物对雌雄小鼠急性经口的最大耐受剂量(MTD) 均大于20.0g/kg·bw，属实际无毒级。在2.5～10.0g/kg·BW试验剂量范围内未发现沙棘籽油番茄红素复合物对小鼠骨髓嗜多染红细胞有致突变作用，也未发现对小鼠精子的损伤作用。在剂量1.58、3.17g和6.33g/kg·BW 的30天喂养试验中，各个剂量组大鼠各项指标与对照组比较均无显著性差异。结果沙棘籽油番茄红素复合物属实际无毒级，安全性较高。
关键词：沙棘籽油；番茄红素油树脂；安全；微核；30天喂养
沙棘(Hippophae rhamnoides L.)为胡颓子科酸刺属的灌木或小乔木，在我国主要分布于西北、华北、东北及西南等1O多个省区。沙棘的籽、果皮、果实及果渣中都有一定量的油脂，成熟的沙棘籽中含有8％～20％的油脂，干沙棘果中含有约20％～25％的油脂。研究发现沙棘油中含有人体必需的多种营养活性成分，包括多种不饱和脂肪酸、类胡萝卜素及其衍生物、甾醇以及天然维生素E等［1]，在功效上报道的有抗菌、抗溃疡、抗衰老、增强免疫力等。车锡平等［2]对沙棘籽油的急性和长期毒性作用的研究，以棘籽油2ml/kg、5ml/kg及10ml/kg三个剂量，分组给大白鼠灌胃，连续3个月。皆未发现沙棘耔油明显毒性反应。
番茄红素( lycopene) 是近年来备受关注的一种纯天然食品添加剂，兼具营养和着色功能，因最早发现于番茄而得名。番茄红素分子结构中有多达11个共轭双键和2 个非共轭双键，因此具备很强的抗氧化活性，番茄红素已逐渐被食品、化妆品、保健品、药品等领域专家所关注。彭亮［3]研究番茄红素剂量约为0. 8 mg /kg，连续服用90天，受试者均未见不良反应。
本研究是以沙棘籽油和番茄红素油树脂混合而得符合物为研究对象，对沙棘籽油番茄红素复合物进行安全性试验评价。
1 材料与方法
1.1动物 本试验选用SPF级Wistar大鼠及ICR小鼠，长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供，SCXK(吉)2016-0003；动物室由吉林省疾病预防控制中心提供(清洁级，吉动设字10-1005)。
1.2显微镜、脱水机、全自动血常规分析仪(XT2000i)，日本东芝生化分析仪。
1.3受试物 实验室自制，以6.6份沙棘籽油和1份番茄红素油树脂混合制成沙棘籽油番茄红素复合物。每日推荐成人摄人量为3.8g。
1.4 急性毒性试验采用最大耐受剂量法，摄人量为20g/kg·bw。选用SPF级ICR小鼠20只，体重18～22g，雌雄各半。将小鼠不禁水禁食16h后，称重、染号、灌胃给予受试物，观察14d。
1.5 遗传毒性试验
1.5.1小鼠骨髓细胞微核试验：选用SPF级ICR小鼠50只，体重25～30g，雌、雄各半。随机分为5组，大豆油阴性对照组、40mg/kg·bw环磷酰胺阳性对照、2.5、5.0和10.0g/kg·bw组。灌胃给予受试物，2次灌胃间隔24h，灌胃量为0.2ml/lOg·bw。末次灌胃6h后，取股骨骨髓，以小牛血清稀释后涂片，计数嗜多染红细胞，微核发生率及嗜多染红细胞与成熟红细胞比值。
1.5.2小鼠精子畸形试验：选用SPF级1CR雄性小鼠25只，体重25～30g。随机分为5组，大豆油阴性对照组、40mg/kg·bw环磷酰胺阳性对照、2.5、5.0和10.0g/kg·bw组。灌胃给予受试物，连续5d，灌胃量为0.2ml/lOg·bw，观察30d后脱臼处死小鼠，取附睾，计算精子畸变发生率。
1.5.3 30d喂养试验：选用SPF级Wistar大鼠80只，体重65～85g，雌、雄各半。动物购入后饲养5d，随机分为对照组及6.33、3.17和1.58g/kg·bw 3个剂量组，相当于成人(60kg体重)日摄人量的100、50和25倍。称取63.3g、31.7g、15.8g复合物分别以大豆油定容至100ml，按照1ml/100g体重分别灌胃高、中、低剂量组，对照组给予等体积的大豆油，连续30d。观察大鼠饲料摄入量、食物利用率、体重变化、血液学指标、血液生化指标及主要脏器的病理组织学检查情况。
1.6 统计学方法 数据的统计处理采用SPSS 11.5统计软件中单因素方差分析进行均值比较，方差齐时，各组间两两比较用LSD法；方差不齐时，各组间两两比较采用Tamhane’S法。检验水准=0.05。
2 试验结果
2.1 急性毒性试验结果
在试验期间各组动物活动正常，毛色光泽度好，未见任何中毒症状和死亡，到期处死动物，大体解剖肉眼观察各脏器情况，未见异常。雄性小鼠：MTD＞20.0g/kg·BW，雌性小鼠：MTD＞20.0g/kg·BW。见表1。
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注：*与阴性对照组比较，P＜0.01
2.3 30天喂养试验结果
在整个试验期间，动物毛色正常，未见行为异常，无死亡发生。低、中、高各剂量组大鼠的发育状况良好，其体量增重、进食量及食物利用率等与对照组相比差别均无统计学意义(P＞0.05)。低、中、高各剂量组的血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及分类和谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白、白/球比等血液生化指标均在正常范围。大鼠脏体比低、中、高各剂量组的肝质量/体质量、脾质量/体质量、肾质量/体质量、睾丸质量/体质量比与对照组相比差别无统计学意义(P＞0.05)。各组动物大体解剖检查均无异常，肝、肾、脾、性器官等脏器组织学检查结果未发现与实验有关的病变。
3讨论
本实验结果表明急性毒性实验小鼠雌、雄两性MTD均＞20g/kg，属无毒级。在2.5～10.0g/kg·BW试验剂量范围内未发现沙棘籽油番茄红素复合物对小鼠骨髓嗜多染红细胞有致突变作用，也未发现对小鼠精子的损伤作用。在剂量1.58、3.17g和6.33g/kg·BW 的30天喂养试验中，大鼠的一般情况正常；体重、进食量、食物利用率、血常规、生化指标各剂量组与对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；对大鼠进行大体解剖后观察大鼠的脏/体比值、并对大鼠的肾、肝、胃、脾、睾丸、十二指肠和卵巢进行病理学检查，均未观察到有意义的病理改变。因此，从毒理学角度出发，沙棘籽油番茄红素复合物是安全的，可以用于保健食品。要充分开发其药用价值，笔者认为还应对其化学成分及其药理活性等做近一步试验研究。
引用文献
1.谢佳琦，李贺．沙棘种子油中脂肪酸组成的微量分析．湖北农业科学，20 12，51(15)：3319-322
2.车锡平，关晓红,郭峰,等.沙棘籽油的毒性实验研究.沙棘.1996年3月，第9卷，第1期：38-39
3.彭亮，赵鹏，李彬，等.番茄红素对人体安全性及抗氧化作用. 中国公共卫生. 2012 年 11 月第 28 卷第 11 期 :1475-1476