徐杰 潘小慧 汪斌 种法政 许华宏
（江苏苏中药业集团股份有限公司；江苏泰州225300）
摘 要 目的：建立同时测定蒲参胶囊中大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、2 ，3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷这五个指标性成分含量。方法：采用高效液相色谱法，分别测定这五种成分的含量，并进行方法学研究。结果：该方法线性、精密度、耐用性、加样回收等均符合要求。结论：该方法准确可靠、操作简便快捷，可同时用于测定蒲参胶囊中五种指标性成分的含量测定。
关键词：蒲参胶囊 大黄素 大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷 大黄素甲醚 大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷 2 ,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷
蒲参胶囊是我司重要品种，功能主治：活血化瘀，滋阴化浊。用于高血脂症的血瘀证。其主要成分为何首乌、蒲黄、丹参、川芎、赤芍、山楂、泽泻。何首乌作为君药，对其质量有一定的要求。自古以来，何首乌被认为具有延年益寿、延缓衰老之功效，是著名的滋补中药。现代研究表明，何首乌主要活性成分有蒽醌类、二苯乙烯类、磷酯类、黄酮类和酚类，可用于降血脂、抗衰老、提高免疫力、益智等。近年来，何首乌致肝损伤的报道快速增长，国内外药监部门相继发布何首乌及其制剂肝损伤风险的警示或监管措施，引起国内外高度关注。通过对何首乌的药理毒理研究，我们选定了其中大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、2 ,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷这五个指标性成分进行含量测定方法开发，通过这五个指标成分的含量结果来选择品系良好的何首乌药材。
一、分析方法的确定
1.1 色谱条件
色谱柱：以赛默飞十八烷基键合烷基为填充剂 流速：1.0ml/min 柱温：25℃ 波长：273nm，流速为1.0ml/min,进样量为10μL。流动相A:0.1%的磷酸水溶液，流动相B：甲醇，以下表梯度进行洗脱：
1.2 对照品溶液的配制
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大黄素对照品：中检院， 大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品：成都普思 大黄素甲醚对照品：中检院 ，大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品：成都普思 ，2,3,5,4’-四羟基二苯 乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品：成都普思 精密称取大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷12.5mg、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷5.8mg于25ml容量瓶，用甲醇定容，作为贮备液1；精密称取大黄素7.2mg于10ml容量瓶，用甲醇定容，做溶液2；精密称取大黄素甲醚15.2mg于25ml容量瓶，用甲醇定容，做溶液3。贮备液：移液管取1ml溶液1,5ml的溶液2,3ml溶液3，用甲醇定容。对照品溶液1：用移液管取10ml贮备液于25ml容量瓶，用甲醇定容即得。对照品溶液2：用移液管取15ml贮备液于25ml容量瓶，用甲醇定容即得。
二、前处理方法
精密称取蒲参胶囊内容物1g于25ml容量瓶，按含量1:1加入对照品溶液，加入15ml的70%乙醇，浸泡30min，超声30min，取出放冷至室温定容，即得.
三、方法学验证
3.1精密度
按1.2配置混合对照品溶液，连续进样6针，记录色谱图，计算RSD%值，分别为0.04%，0.61%，0.98%，0.09%，0.21%，0.04%，本品的精密度良好，符合要求。
3.2稳定性
按1.2配置混合对照品溶液，连续进样24h，记录色谱图，计算RSD%值，分别为0.12%，0.55%，0.92%，0.11%,015%，本品稳定性良好，符合测定规定。
3.3线性关系考察
精密称取2,3,5,4’-四羟基二苯 乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品，大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品，大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品，大黄素对照品，大黄素甲醚对照品，加甲醇溶解制成每1ml分别含有为0.364mg、0.01mg、0.00464mg、0.073mg、0.03648mg的混合对照品溶液，进行稀释，
以进样量浓度（X：mg/ml）为横坐标X，以峰面积为纵坐标Y，进行线性回归，得2,3,5,4’-四羟基二苯 乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷回归方程：y = 121.8x - 0.004（R2 = 1），大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷回归方程：y = 372.8x + 0.033（R2 = 1），大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷回归方程：y = 397.1x - 0.009（R2 = 0.999），大黄素回归方程：y = 436.4x - 0.014（R2 = 1），大黄素甲醚回归方程：y = 354.3x - 0.155（R2 = 0.999）。
3.4重复性
精密称取6份蒲参胶囊内容物，每份1g分别置于25ml容量瓶，加入15ml的70%乙醇，浸泡30min，超声30min，取出放冷至室温，定容，过滤即得。分别注入液相色谱仪，记录图谱，计算RSD%值，分别为3.47%，3.54%，3.21%，3.42%，3.31%，本品重复性试验良好，符合测定规定。
3.5加样回收
精密称取蒲参胶囊内容物1g于25ml容量瓶，按含量1:1加入对照品溶液，加入15ml的70%乙醇，浸泡30min，超声30min，取出放冷至室温定容，即得，计算RSD%值，分别为大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷1.34%，大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷1.51%，大黄素1.53%，大黄素甲醚4.19%，2,3,5,4’-四羟基二苯 乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷3.62%，本品回收率在90%-110%之间，符合测定规定。
四 结论
综上所述，本方法准确可靠、操作简便快捷，可用于同时测定蒲参胶囊中5种成分的含量。