高效液相色谱法测定水产品中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素方法验证--中国期刊网

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高效液相色谱法测定水产品中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素方法验证

发表时间：2020/12/23 来源：《基层建设》2020年第24期作者：李秋鹏

[导读] 摘要：随着水产养殖业的发展，四环素族往往被加入水产养殖行业中去[1]，同时过度滥用抗生素不仅造成水体环境的污染[2]，更会给人们身体健康带来了危害，所以水产品中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素检测方法至关重要[3]。

        广东省珠海市质量计量监督检测所广东珠海 519000
        摘要：随着水产养殖业的发展，四环素族往往被加入水产养殖行业中去[1]，同时过度滥用抗生素不仅造成水体环境的污染[2]，更会给人们身体健康带来了危害，所以水产品中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素检测方法至关重要[3]。参考GB/T 20764-2006 《可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-紫外检测法》[4]，利用高效液相色谱法对水产品中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素进行测定，通过对其检测方法进行验证，测定其重复性、检出限、回收率等结果显示，4 种组分能够完全分离，呈现良好的线性关系。加标回收率83.4% ～ 108.0%，相对标准偏差为1.07% ～ 4.02%。
        1 实验材料
        1.1试剂与仪器设备
        土霉素标准物质、四环素标准物质、金霉素标准物质、强力霉素标准物质，均购于上海安谱实验科技股份有限公司；电子分析天平；3K15 sigma冷冻高速离心机；高效液相色谱仪（配有紫外检测器）；全自动固相萃取仪
        1.2 液相色谱条件
        色谱柱：Symmetry C18 5µm，4.6mm*250mm
        流动相：乙腈+甲醇：0.01mol/L 草酸溶液（20+10+70）
        流速：1mL/min
        进样体积：20µL
        二极管整列检测器波长：350nm
        2 实验方法
        2.1标准溶液的配制
        标准储备液：准确称取适量的土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质，分别用甲醇配成0.1 mg/mL混合标准储备液。
        标准工作溶液：用上述流动相将土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的0.1 mg/mL混合标准储备液稀释成5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200ng/mL的混合标准工作溶液。
        2.2 样品处理与测定
        称取6g左右试样，加入30mL 0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液振荡10min，10000r/min离心10min，取上清，在加入20mL缓冲溶液，重复提取一次，合并上清液。上清液通过HLB固相萃取柱净化，定容至4mL。
        取相同体积液的土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
        3 结果与讨论
        3.1 标准曲线
        测定土霉素、四环素、金霉素、强力霉素在5~200 ng/mL范围内呈良好线性关系。土霉素回归方程Y=0.55X-0.22，相关系数R2为0.998；四环素回归方程Y=0.40-0.23，相关系数R2为0.999；金霉素回归方程Y=0.08X+0.13，相关系数R2为0.998；强力霉素回归方程Y=0.10X-0.03，相关系数R2为0.997。
        3.2检出限
        土霉素在5.28 ng/mL时，信噪比大于3：1，检出限为0.005mg/kg；四环素在5.22 ng/mL时，信噪比大于3：1，检出限为0.005mg/kg；、金霉素在5.13 ng/mL时，信噪比大于3：1，检出限为0.005mg/kg；、强力霉素在5.17 ng/mL时，信噪比大于3：1，检出限为0.005mg/kg。
        3.3 精密度
        将溶度为100μg/L的混合标准工作溶液连续进样6 次，其结果见表1，RSD 在1.07% ～ 4.02%，精密度有些欠缺。
        表1 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的重复性测试表

        3.4 回收率
        准确称取3 个约2 g 鱼肉阴性样品，样1 加入土霉素（0.1 mg/mL）、四环素（0.1 mg/mL）、金霉素（0.1 mg/mL）、强力霉素（0.1 mg/mL）0.10mL；样2 加入土霉素土霉素（0.1 mg/mL）、四环素（0.1 mg/mL）、金霉素（0.1 mg/mL）、强力霉素（0.1 mg/mL）0.2 mL，样3加入土霉素土霉素（0.1 mg/mL）、四环素（0.1 mg/mL）、金霉素（0.1 mg/mL）、强力霉素（0.1 mg/mL）0.3 mL，实验结果见表2。土霉素加标回收率在104%~118%之间，四环素加标回收率在97%~112%之间，金霉素加标回收率在83%~97%之间，强力霉素加标回收率在94%~112%之间。回收率符合，能满足要求。
        表2 回收率实验结果表

        4 结论
        按照GB/T 20764-2006 《可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-紫外检测法》[4]土霉素、四环素、金霉素、强力霉素在5~200 ng/mL范围内呈良好线性关系，相关系数R2均≥0.997。土霉素、四环素、金霉素、强力霉素检出限均为0.005mg/kg。土霉素、四环素、金霉素、强力霉素重复性试验相对标准偏差为1.07% ～ 4.02%，精密度有些欠缺。可能问题出现在仪器使用年限较长，性能状态不是很好，有待下一步继续确认。加标回收率均在83.4% ～ 108.0%，回收率良好。
        参考文献：
        [1]余丽，熊丽娜，石磊，叶蕾.广州市售鱼、虾、蛤蚌中四环素耐药菌及四环素耐药基因的研究[J].现代食品科技，2016，32（10）：239-245.
        [2]章强. 四环素和铜对小型鱼类的生态毒性研究[D].华东师范大学，2015.
        [3]吴开年，王利，李晨阳.鱼源温和气单胞菌对氨基糖苷类和四环素类抗生素的耐药性分析[J].中国畜牧兽医，2018，45（04）：1059-1066.
        [4]国家质量监督检验检疫总局，国家标准化管理委员会.GB/T 20764-2006 可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-紫外检测法[s].北京：中国标准出版社，2007.
        作者简介：
        李秋鹏，男，工程师。