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月季组培快繁存在的问题与改进措施

发表时间：2020/12/31 来源：《基层建设》2020年第24期作者：何素芬杨静张怡李海燕

[导读] 摘要：月季在组培快繁过程中，常出现一些影响无菌系建立和组培苗生长的问题，制约着月季组培的成功与否，根据笔者的研究试验的实践，本文针对培养过程中最易出现的一些现象问题进行分析探讨，并提出一些预防措施，仅供同行们参考。

        四川云辰园林科技有限责任公司四川宜宾 644000
        摘要：月季在组培快繁过程中，常出现一些影响无菌系建立和组培苗生长的问题，制约着月季组培的成功与否，根据笔者的研究试验的实践，本文针对培养过程中最易出现的一些现象问题进行分析探讨，并提出一些预防措施，仅供同行们参考。
        关键词：月季；快繁；组培；问题；改进措施
        月季（学名：Rosa chinensis Jacq.），蔷薇科蔷薇属的木本花卉植物，是常绿、半常绿低矮灌木，原产中国的月季，花荣秀美，姿色多样，有红色、粉色、白色和黄色，四季开花﹐又称为“月月红”，深受人们的喜爱。月季在1985年5月被评为中国十大名花第五名，有花中皇后的美誉，中国的52个城市都将它选为市花。月季不仅种类繁多，而且用途也很广，月季花是春季的主要观赏花卉，花期长，能用于布置花坛、花境、庭院花材，还能美化环境，制作月季盆景、作切花、花篮、花束等等，且观赏价值高。月季花有药用价值，也是提取香料香精的重要原材料。
        月季的传统繁育方式有压条、嫁接、分株、扦插，一繁殖数量少，二是扦插生根难，尤其是一些名贵品种，扦插极难生根同，应用组培快繁技术繁育月季苗木，可缩短繁育周期，培育大量苗木，笔者根据在月季组培实践过程中容易遇到的技术问题进行分析讨论。
        1试验材料与步骤
        1.1试验材料
        当年生月季半木质化枝条，植物生长调节剂6-BA、KT、NAA、琼脂、蔗糖，75%酒精、消毒剂、杀菌剂、培养瓶、枪状镊子、尖头剪刀等。
        1.2培养基配方设计
        初代培养基：MS+6-BA1.0㎎/L+KT0.2㎎/L+NAA0.1㎎/L+琼脂5g/L+糖26g/L
        继代培养基：MS+琼脂5g/L+糖26g/L
        生根培养基：1/2MS++NAA0.1㎎/L+琼脂5g/L+糖26g/L
        PH值5.8-6.0。
        1.3月季组培快繁流程
        培养基配制——高压灭菌——采集枝条（生理年龄小、生长健壮、无病虫害）——粗洗（软毛刷醮洗衣粉或洗洁精轻轻刷洗）——分剪外植体（中部半木质化茎段，去掉枝刺，剪成单芽茎段、叶柄上部0.5公分、下部1公分）——表面精洗（放入三角瓶、加洗衣粉和水，振荡洗涤3-5分钟，流水冲洗30分钟）——表面灭菌（75%酒精8-10秒——无菌水洗一次——10%次氢酸钠浸泡10-15分钟）——无菌水摇动洗涤5次，每次5分钟）——接种——培养观察——初代培养——继代培养——生根培养。
        2初代培养阶段出现的问题与改进措施
        将灭菌后的外植体，按一瓶一个外植体接种到初代培养基上，放进培养室，调控好培养室温度、光照等条件，进行培养观察。
        2.1培养基污染、外植体变褐色、茎断面干枯
        2.1.1表现症状与可能原因
        接种后3-5天，培养基表面出现呈黏液状菌斑污染物，污染面随时间而扩展，并伴有酸臭味，这种现象属细菌污染。可能原因：主要是接种工具、用具用品消毒不干净，接种人员操作不规范，不熟练、操作时接种工具或材料接触台面、瓶外，不慎带入菌源所致。
        真菌污染在接种2-7天后，接触外植体周围的培养基上长出白色云雾状霉菌，继而转变为黑色，另一种现象是在培养基面上出现黑色的霉菌斑点和斑块。可能原因：是接种房间或小环境消毒不干净，空气和环境带菌，接种时，操作不熟练，敝开瓶口和材料暴露时间过久，被空气中杂菌感染所致。
        接种5天以后，插入培养基的外植体茎段变褐色，并逐渐坏死，上部茎段变褐色并逐渐干枯。主要原因：一是外植体内含酚类化合物（如单宁），随材料切割溢出，被多酚氧化酶氧化成醌类物质和水后，导致材料变成褐色而死亡。二是外植体在消毒液中浸泡时间过长，消毒液浸入材料内部造成细胞组织中毒害导致坏死变褐色。
        2.1.2改进措施
        严格接种工具、工作台、房间消毒；对取材植株进行预处理，遮阳，喷杀菌剂；尽量在植物生长初期取材，减少体内单宁等物质含量；调换其他杀菌剂或调整浓度，缩短消毒时间，消毒后多用无菌水振荡冲洗；规范操作，提高操作熟练度，杜绝人为操作带菌。
        2.2培养物长期培养的过程中无反应
        2.2.1表现症状与原因
        长时间培养，培养基既没出现污染，外植体也没有褐变，坏死，外植体几乎无任何反应。原因可能会有：培养基不适宜，生长素的种类选用不适或用量不当，培养基PH和培养条件，如：温度不适宜。
        2.2.2改进措施改进措施
        更换培养基或调整培养基的成分，试用两种不同的细胞分裂素（6-BA、KT），增加生长素的用量，调整培养基PH与培养温度。

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        2.3愈伤组织过于旺盛，疏松、后期水渍状
        2.3.1可能原因
        激素用量过高、温度太高、无机盐含量的过高或过低。
        2.3.2改进措施
        减少激素的用量程度、培养温度调整适宜、调整无机盐（尤其是铵盐）的含量，
        2.4愈伤组织太紧、粗厚、无芽分化，生长缓慢
        2.4.1可能原因
        细胞分裂素的用量超标、糖的浓度高，生长素用量超标。
        2.4.2改进措施
        调整细胞分裂素和生长素多的比例，且降低糖的浓度。
        3继代培养阶段
        把无菌培养获得的无菌苗，分割成单芽转接到继代培养基上，每瓶3-5个芽，均匀分布成三角形，调控好培养室温度、光照等条件，培养观察。
        3.1苗分化数量少、分枝少、生长速度慢、个别苗高而细长
        3.1.1可能原因
        细胞分裂素的用量太少，温度过高，光照不足，密度大且透气性差。
        3.1.2改进措施
        提高细胞分裂用量，降低温度，改善光照，降低密度，单芽继代改为丛生芽继代。
        3.2苗分化过多，有畸形，苗丛密集，苗节间过短，生长速度迟缓、微型化
        3.2.1可能原因
        细胞分裂素的用量过多，转苗的时间过长，温度、光照不适宜等。
        3.2.2改进措施
        停用或减少细胞分裂素一段时间，用不加激素的空白的培养基培养，调整温度和光照。
        3.2.3幼苗生长弱小，叶子黄并脱落，死苗在丛生苗中。
        3.2.4可能原因
        PH值变化差异过大，瓶内气体的状态差，转接不及时而导致糖己消耗尽，，温度不适宜，营养元素缺失，激素配比不适宜。
        3.25 改进措施：
        降低接种时幼苗密度并及时转接，瓶内的气体状况好，调整激素和营养元素的浓度及配比，并控制适宜温度。
        4生根阶段
        继代培养苗繁殖到一定数量后，当80%芽体长度达到1.5公分，将＞1.5公分的苗转接到生根培养基上，＜1.5公分的苗接通种在继代培养基上，继续继代培养，扩大数量。管理好培养室温度、光照、湿度、培养室房间消毒。
        5.1组培苗久不生根发，基部切口无生根愈伤组织
        5.1.1可能原因
        生长素种类用量及PH值不适宜，无机盐浓度及配比不适宜。
        5.1.2改进措施
        适当降低无机盐的浓度，选用合适的生长素种类，增加生长素的用量。
        5.2愈伤组织生长过快过大、根茎部肿胀或畸形，过渡苗死亡率高
        5.2.1可能原因
        生根诱导的培养程序出错，生长素种类不匹配且浓度过高。
        5.2.2改进措施
        调整生根培养程序，几种生长素配合使用并降低浓度。
        6.讨论
        影响月季组培快繁的因素很多，到目前为止，月季组培快繁中无菌系的建立，无论是培养基配方、激素种类、用量、外植体选择用时间、部位等，还没完全形成稳定成熟的快繁技术，有待进一步实践试验探索。
        参考文献：
        陈世昌植物组织培养重庆大学出版社出版 2006.8
        作者简介
        何素芬（1956-）女大学本科   副教授研究方向植物组织培技术与作物遗传
        杨静（1981-）女   硕士研究生园林工程师研究方向园林工程与植物组织培养技术