HPLC 法测定碳酸饮料中的维生素 C

发表时间:2020/12/31   来源:《科学与技术》2020年第26期   作者:李伟 杨会娟
[导读] 采用反相高效液相色谱法(HPLC),测定碳酸饮料中的维生素C食品添加剂
        李 伟  杨会娟
        青海省地质矿产测试应用中心  青海  西宁  810008
        摘要  采用反相高效液相色谱法(HPLC),测定碳酸饮料中的维生素C食品添加剂。实验采用C18柱化学键合固定相,以体积比为6:94的甲醇和0.02mol/L乙酸铵(PH值为5.4)混合液为流动相,在紫外检测波长230nm,流速0.8ml/min,常温下进行检测。相关系数:维生素C为0.9987。变异系数(RSD%)小于1.16 (n=6),回收率范围为98.0%—102%。此方法具有灵敏度高,样品处理简单,工作效率高的优点,其结果令人满意。
        关键词   HPLC   维生素C    饮料
Determination of vitamin C in carbonated beverages by HPLC
                                         li Wei, Yang Huijuan
(Qinghai geological and mineral resources test application center, Xining  Qinghai  810008)
        Abstract: Using reverse phase high performance liquid chromatography (HPLC), the determination of vitamin C food additives in carbonated drinks. Experiments using C18 column chemical bond synthetic stationary phase volume than 6:94 methanol and 0.02 mol / L ammonium acetate (pH 5.4) mixture as mobile phase, in the UV detection wavelength was 230nm, flow rate 0.8ml/min, at room temperature were detected. The correlation coefficient: vitamin C was 0.9987. Coefficient of variation (RSD%) is less than 1.16 (n=6), the recovery range is 98% - 102%. The method has the advantages of high sensitivity, simple process and high work efficiency, and the result is satisfactory.
Key Words: Reversed-phase HPLC, vitamin C, Drinks
        食品是维持人类生存的基本物质,随着生产水平和人民生活水平的提高,人们对食品的要求也不断提高,各种添加维生素C的饮料、果汁不断涌入市场。食品添加剂有维生素、氨基酸与矿物质等种类。维生素是调节人体各种新陈代谢过程比不可少的营养素,它几乎不能在人体内产生,必须从体外不断摄取,当膳食中长期缺乏某种维生素时,就会引起代谢失调、生长停滞,以致进入病理状态。因此维生素在人体营养上有重大的功用,维生素强化剂在强化食品中亦占有重要的地位。人工加入的食品添加剂分析是在食品分析中的主要应用之一[1-2]。
        本文采用单一波长,等度淋洗的方法,用0.05%EDTA-0.2%HAC混合溶液进行样品处理后,经0.45mm滤膜过滤后直接进样,并就反相高效液相色谱法测定食品中常见的三种食品添加剂的波长、回收率、精密度、线形范围等进行了研究,选择了最合适的分离色谱条件。样品实验表明,此法灵敏、准确快速、简单、实用,得到了令人满意的结果。
1   实验部分
1.1  试剂   
        (1) 甲醇(AR):经0.45μm滤膜过滤
        (2)  0.02mol/L乙酸铵溶液:称取1.54g乙酸铵(AR)加水溶解,于1000ml容量瓶中定容,溶解后经滤膜过滤,PH值为5.4
        (3) 0.05%EDTA-0.2%HAC混合溶液:称取0.5gEDTA(AR)于1000ml水中加入2ml冰乙酸摇匀即可
        (4)维生素C标准储备液(1.0g/ml):称取维生素C(AR)0.1000g加水、0.4%醋酸溶液定容至100ml,临用时配
        (5)维生素C标准使用液(不同浓度):吸取上述储备液适量,定容至大小不同的容量瓶中,此标准使用液每毫升含维生素C的量?(mg)均为0.008,0.01, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1,0.12, 0.14,  0.16, 0.18。
1.2  仪器
      Waters 高效液相色谱系统进样器;Waters 600E泵;Waters 2487紫外检测器 ;超越2000色谱工作站(浙江省科学器材进出口有限责任公司);微量进样器;超声波清洗器(天津奥特恩斯仪器有限公司);分析天平;抽滤装置;水系针头滤器(先德(天津)科技仪器有限公司) 规格φ13,0.45。
1.3  色谱条件
色谱柱: Nova-PakC18(3.9×150mm);流动相:甲醇:0.02mol/L乙酸铵=6:94(V/V);检测器:紫外检测器;波长: 230nm;流速: 0.8ml/min;柱温:室温
进样体积:10μL;检测灵敏度: 1.000AUFS。
1.4  样品预处理
1.4.1  碳酸饮料
        取样30ml于小烧杯中,超声波震荡10min除去CO2。准确吸取上述溶液0.1ml和10ml加0.05%EDTA-0.2%HAC混合溶液分别定容到250ml和50.0ml经针头滤器过滤滤液注入样品瓶直接进样分析。
2 结果与讨论
2.1  流动相选择
        液相色谱中流动相的选择是非常重要的。在给定固定相的情况下,溶质的保留和溶质对的分离主要由流动相的性质决定。一理想的流动相应具备如下性质:具有稳定的化学性质;溶剂的选择要与使用的检测器有相溶性;溶剂粘度小,易于纯化,沸点不应太低;溶剂的毒性应尽可能小,并不易起火;成本低[3-4]。
        色谱分离中流动相的选择直接影响组分的分离度。本实验表明,流动相中甲醇与0.02mol/L乙酸铵(PH值为5.4)的比例为6:94时各组分分离较好(见图一)。
2.2  流速的选择
        流速的大小直接影响着柱及系统的压力、组分分离度、洗脱时间。在流动相固定后,选择最佳分离度和最短分析时间的流速。流速太小,分析时间过长;流速太大,系统压力过高,容易冲塌柱子,分离度减小。通过实验选择在0.8ml/min和1.0ml/min流速下测定。在流速为0.8ml/min时,结果发现峰形好,干扰峰少,分离度好,基线较稳(如图1)。再将流速改为1.0ml/min时,发现保留时间没有什么变化(如图2)。
                                      
        [1]维生素C    
 
2.3 标准曲线的绘制
        准确量取维生素C的标准储备液,配制一系列不同浓度的标准溶液,用微量进样器分别移取10μL进行反相高效液相色谱法(HPLC)分析。实验表明,维生素C的浓度与色谱峰面积呈良好的线形关系。(结果见表1)
                            
性良好。标准曲线(见图3)。在此线性范围内计算回归方程和相关系数 (见表2) 。
2.4 精密度实验
        用浓度为0.08mg/ml的标准使用液做同一水平六次测定,其结果(见表3)

3 结论
        经实验认为,采用0.05%EDTA-0.2%HAC混合溶液做提取液,不但对维生素C的测定没有影响,尤其是既不干扰维生素C的测定,又能抑制Cu2+或Fe3+的氧化作用。实验结果表明此处理方法对提高维生素C的稳定性较为有效,加标回收率在98%以上。
由实验可知:本方法的灵敏度高、基质干扰小,且回收率高、精密度好。具有灵敏、准确、高效、实用、操作简单等诸多优点。特别适合于日常食品样品的快速测定。
参考文献
[1]  王天竹.食品卫生检疫方法(理化部分)注解(下)[M] .北京:中国标准出版社,2008.386-392
[2]  蒋燕霞,肖礼娥,林榜建.HPLC法分析油菜花粉中维生素C含量[J].海峡药学,2013.25(3);53-54
[3]  胡晓艳. HPLC法测定力度申泡腾片中维生素C含量[J].广东药学,2005.15(1);8-10
[4]  刘平,李强,金庆中等.保健食品及营养素补充剂中维生素C稳定性研究[J].中国食品卫生杂志,2011.23(2);137-141


李伟(1983-),男,青海省地质矿产测试应用中心,高级工程师,研究方向:长期从事化学分析工作。
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