李蒙 高漫（通讯作者）
陕西省结核病防治院 陕西省 西安市 710100
【摘要】目的：分析特异性T细胞在抗结核治疗中免疫反应动态变化及意义。方法：于2020年1月-6月内，对象为接受抗结核治疗患者10例，回顾性分析其全部的临床资料，所有患者于治疗前后采集外周血样，用于测定CFP-10和ESAT-6等结核特异性抗原刺激下IFN-γ在PBMC中分泌细胞量，并对多功能T细胞动态改变及Th1型抗原特异性细胞因子分泌水平。结果：本组10例患者治疗6个月后PBMC经CFP-10和ESAT-6等刺激，IFN-γ的细胞释放量较治疗前明显降低（P<0.05）。治疗前后对比淋巴细胞CD4+IFN-γ+的比例呈降低趋势，结果呈归一性；而治疗期间多功能T细胞变化不显著。结论：患者外周淋巴细胞在治疗期间抗原特异性淋巴细胞CD4+IFN-γ+的比例以及IFN-γ的细胞释放量等因病情好转而不断降低，说明病原菌负荷降低与抗原特异性细胞免疫应答动态改变关系密切，可能作为免疫学标志物用于评定抗结核治疗效果。
【关键词】特异性T细胞；抗结核治疗；免疫反应动态；临床意义
Dynamic analysis of specific T cell immune response in antituberculosis therapy and its clinical significance
Objective: to analyze the dynamic changes and significance of specific T cells in anti tuberculosis therapy. Methods: from January to June 2020, 10 patients with antituberculosis were enrolled in this study. The clinical data were retrospectively analyzed. Peripheral blood samples were collected from all patients before and after treatment to determine the amount of IFN - γ secreted in PBMC stimulated by tuberculosis specific antigens such as CFP-10 and ESAT-6, and the dynamic changes of multi-functional T cells and the secretion level of Th1 antigen-specific cytokines. Results: after 6 months of treatment, the release of IFN - γ in PBMC was significantly lower than that before treatment (P < 0.05). Before and after treatment, the proportion of CD4 + IFN - γ + of lymphocytes decreased, and the results showed normalization, while the changes of multifunctional T cells were not significant during the treatment. Conclusion: the proportion of antigen-specific lymphocyte CD4 + IFN - γ + and the release of IFN - γ in peripheral lymphocytes of patients during the treatment period were continuously decreased due to the improvement of the condition, which indicated that the decrease of pathogen load was closely related to the dynamic changes of antigen-specific cellular immune response, and could be used as an immunological marker to evaluate the effect of anti tuberculosis treatment.
[Key words] specific T cells; anti tuberculosis therapy; immune response dynamics; clinical significance
因耐药性结核菌株于近几年逐渐出现，在一定程度上增加了结核病发生率，且原因主要为传统BCG疫苗效果不完全、AIDS伴肺结核高发性感染等【1】。对于肺结核患者而言，其主要因感染结核分枝杆菌所致，而患者治疗效果及疾病发生发展均于自身免疫应答水平关系密切【2】。而通过在抗结核治疗期间对患者免疫反应下特异性T细胞的动态变化进行分析，则可由于评估患者的病情发展和预后【3】。本文即分析了特异性T细胞在抗结核治疗中免疫反应动态变化及意义，现阐述如下内容报告：
1.资料与方法
1.1资料
于2020年1月-6月内，对象为接受抗结核治疗患者10例，回顾性分析其全部的临床资料，其中8例男性、2例女性；年龄最大75岁、最小26岁，均值（45.6±4.7）岁。所有对象均知情同意，且签订同意书，本试验满足伦理委员会标准和要求。
1.2方法
所有患者于治疗前后采集外周血样，用于测定CFP-10和ESAT-6等结核特异性抗原刺激下IFN-γ在PBMC中分泌细胞量，测定方法①采用海口维瑅瑷生物研究院的结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒（酶联免疫吸附法），并对多功能T细胞动态改变及Th1型抗原特异性细胞因子分泌水平。首先进行人PBMC分离，采用密度梯度离心法经淋巴细胞分离液进行分离；采用人IFN-γLISPOT试剂盒对IFN-γ的细胞释放量进行测定；检测胞内细胞因子，仪器为②贝克曼FC500流式细胞仪，分析软件为Flow Jo。
1.3数据处理[]
由统计人员处理所得文中数据，工具为SPSS22.0统计软件，计量资料表示形式为“”，计数资料表示形式为（%），分别用、t检验数据差异，当P<0.05时，满足统计处理要求。
2.结果
本组10例患者治疗6个月后PBMC经CFP-10和ESAT-6等刺激，IFN-γ的细胞释放量（213.2±40.5）/2.5×105个PBMC较治疗前（113.4±23.7）/2.5×105个PBMC明显降低（P=0.014）（P<0.05）。治疗前后对比淋巴细胞CD4+IFN-γ+的比例呈降低趋势，结果呈归一性（见图1中A、B、C）；而治疗期间多功能T细胞变化不显著（见图2中A、B）。
图1结核特异性Th1型细胞因子的变化趋势
图2治疗期间多功能T细胞变化
3.讨论
结核杆菌在全球范围内感染覆盖率约为1/3，其中活动性肺结核占比约为5%-10%，而患者发病与自身免疫状态、结核杆菌的毒力和数量等存在一定相关性。机体感染结核分枝杆菌后，活动性肺结核则属于急性期，此时对其特异性细胞进行监测发现处于较高的免疫应答水平。在进行抗结核治疗后，患者的抗原特异性细胞可因结核菌清除势而导致免疫应答水平改变，所以对其变化特征做出分析，有利于评估患者的疗效【4】。机体感染结核菌后，可对T细胞形成刺激，使之释放多种细胞因子，其中作为一种结核应答细胞因子，IFN-γ可将单核巨噬细胞进一步激活，且可促进其致敏，并生成NOS而将结核分枝杆菌杀灭【5】。本文的结果显示，本组10例患者治疗6个月后PBMC经CFP-10和ESAT-6等刺激，IFN-γ的细胞释放量较治疗前明显降低（P<0.05）。该结果表明，随着治疗的逐渐深入，IFN-γ的细胞释放量呈下降趋势。而治疗前后对比淋巴细胞CD4+IFN-γ+的比例呈降低趋势，结果呈归一性；而治疗期间多功能T细胞变化不显著。可见，特异性T细胞在抗结核治疗中免疫反应动态变化具有十分重要的临床研究意义。但本研究因样本量较少，所以还需对患者数量进一步激烈，并对胸腔积液进行采集，以用于检测多功能T细胞，以探讨更有效的免疫学标志物，用于判断患者疗效和疾病诊断。
综上，患者外周淋巴细胞在治疗期间抗原特异性淋巴细胞CD4+IFN-γ+的比例以及IFN-γ的细胞释放量等因病情好转而不断降低，说明病原菌负荷降低与抗原特异性细胞免疫应答动态改变关系密切，可能作为免疫学标志物用于评定抗结核治疗效果。
【参考文献】
[1]吴家宝,陈颖盈,季萍,等.抗结核治疗中特异性T细胞免疫反应动态分析及其临床意义[J].现代免疫学,2017,37（03）:198-205.
[2]张梅.肺结核患者治疗前后外周血γδT细胞及其记忆表型变化[J].广东医科大学学报,2017,35（04）:360-361+366.
[3]李晓红,佟冬冬.肺结核患者外周血辅助性T细胞亚群相关细胞因子临床意义初探[J].中国实验诊断学,2016,20（06）:1011-1012.
[4]梁宇硕,陈颖盈,蔡潭溪,等.抗结核治疗中患者外周结核分枝杆菌抗原水平与特异性免疫应答相关性分析[J].中国免疫学杂志,2020,36（02）:203-209.
[5]李维芳.40例无变应性结核病抗结核治疗前后细胞免疫功能状态分析[J].中国当代医药,2019,16（08）:42-43.