刘华1 周全华1 王越1 凌华1 赖娟2通讯作者
（1重庆市疾病预防控制中心；2重庆市沙坪坝区疾病预防控制中心；重庆400000）
摘要：目的 通过对仪器自动判读结果的准确性进行评判，为HIV检测提供依据。 方法 筛查试验酶联免疫吸附试验有反应性标本，用免疫印迹试验（WB）确证，人工判读结果全部为阳性，用自动化判读仪器进行结果判定，与人工判读的结果进行一致性比较。结果 148份标本结果中有143份结果为阳性，5份标本结果为HIV-1抗体不确定，阳性率为96.62%，不确定结果占3.38%，出现的WB特异性条带中，p17占90.20%，p24占95.21%，p31占90.91%，p39占0%，gp41占95.86%，p51占68.46%，p55占52.83%，p66占74.13%，gp120占95.27%，gp160占78.38%。采用卡方检验分析，p17和gp41的P值大于0.05，p31的P值等于0.05，其余条带的P值均小于0.05。结论 自动化结果判读仪器与人工判读结果基本一致。
关键词：HIV-1抗体不确定； 免疫印迹试验（WB）； HIV-1抗体阳性；带型
The accuracy of human immunoblot test for HIV antibody was compared with that of automatic instrument interpretation
Liu Hua1, ZHOU Hua1, WANG Yue1, LING Hua1, LAI Juan2
1. Chongqing Center for Disease Control and Prevention
2. Chongqing Shapingba District Center for Disease Control and Prevention
Abstract：Objective To provide evidence for HIV detection by evaluating the accuracy of automatic interpretation results. Methods Screening the reactive specimens of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western Blot test (WB) was used to confirm that the results of manual interpretation were all positive, and automated interpretation instruments were used to determine the results, and the results were compared with the results of manual interpretation. Results Among 148 specimens, 143 were positive and 5 were hiv-1 antibody indeterminate, with a positive rate of 96.62% and an uncertain result of 3.38%. Among the WB specific bands, P17 accounted for 90.20%, P24 for 95.21%, P31 for 90.91%, P39 for 0%, GP41 for 95.86%, P51 for 68.46%, P55 for 52.83%, P66 for 74.13%, GP120 for 95.27%, and GP160 for 78.38%. Chi-square test analysis showed that P values of P17 and GP41 were greater than 0.05, P values of P31 were equal to 0.05, and P values of other bands were all less than 0.05. Conclusion The results of automatic result interpretation are basically consistent with those of manual interpretation.
Key words: HIV-1 antibody is uncertain; Western blotting test (WB); Hiv-1 antibody positive; Belt type
目前，艾滋病疫情依然严峻，世界卫生组织公布的2019年全球10大健康威胁中，艾滋病位列其中 [1] ，足以表明艾滋病的诊治与预防继续受到了国际社会的重视。现如今艾滋病已成为一种可控的慢性病。但仍有相当一部分患者因未及时诊治、病毒耐药或药物的副作用等原因，而死亡或致残。同时由于社会对感染者的歧视，也常常给感染者带来沉重的精神压力。截至2019年年底，我国估计存活艾滋病感染者和患者129万，全人群感染率约为9.3/万，新发感染者为8.0/万[2]。在艾滋病防治工作中，实验室检测都是不可或缺的一部分，HIV-抗体确证试验是HIV感染诊断的金标准[3]，目前常用有免疫印迹试验（WB）、条带/线性免疫试验（RIBA/LIA）。由于HIV检测量不断增加，人工判读的负担越来越重，单纯依靠人工判读的方法就显得费时费力，为提高检测效率，未来将会由人工判读模式转变为仪器自动判读的模式。为此，本次研究将148例样本仪器自动判读结果与人工判读结果进行比较分析，评价仪器进行条带判读的准确性，为减少人为判读带来的误差，仪器客观判断提供依据，现报告如下：
1. 材料与方法
1.1样本来源? 重庆市各区县筛查实验室
1.2方法与试剂 首先经过筛查实验，结果呈有反应性，经过确证实验检测采用人工判读符合 HIV-1 抗体阳性判断标准，报告“HIV-1 抗体阳性”。
HIV抗体筛查实验采用酶联免疫吸附试验（ELISA）,试剂采用BIO-RAD生产的人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒。HIV抗体确证实验：免疫印迹试验（WB）采用安倍生物医学亚太私人有限公司生产的人类免疫缺陷病毒（HIV 1+2型）抗体检测试剂盒（免疫印迹法）。以上试剂均经相关机构注册，在有效期内并按照试剂说明书进行操作。
1.3设备 TECAN 免疫蛋白印迹仪、AUTO CAM48条带判读仪。
1.4 WB 结果判定 抗体确证试验结果符合 HIV-1 抗体阳性判断标准，报告“HIV-1 抗体阳性”，HIV抗体不确定结果的判定标准是出现HIV-1抗体特异带（env 带：gp160/gp120、gp41； gag 带：p55、p24、p17； pol带：p66、p51、p31），但不足以判定阳性，随访期间如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如出现阳性反应，则报告阳性；可视情况决定是否继续随访。无 HIV 抗体特异带出现，判定为 HIV 抗体阴性，则报告阴性。检测结果参照《全国艾滋病检测技术规范》（2020年修订版）[4]和试剂说明书判定。在中国，绝大多数的感染是HIV1型的感染，因此本次研究以1型为主。
1.5 统计学分析 使用SPSS19.0统计软件进行数据分析，采用X2检验，检验水准以P＜0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1确证结果 2020年3月至2020年6月确证阳性的148例样本，其中阳性143例，占96.62%，5份样本结果为不确定，占3.38%。详见表1。
.png)
2.2 HIV-1抗体阳性和HIV-1抗体不确定样本WB反应带型 14例样本经过人工判读和仪器自动判读后分别出现的WB特异性条带出现率中p17占90.20%，p24占95.21%，p31占90.91%，p39占0%，gp41占95.86%，p51占68.46%，p55占52.83%，p66占74.13%，gp120占95.27%，gp160占78.38%。结果见表2。
2.3 WB反应带型出现个数分析 148例样本反应带型出现个数采用卡方检验分析，以检验水准以P＜0.05为差异有统计学意义。结果见表3
.png)
3、讨论
《全国艾滋病检测技术规范 》(2020年修订版)中，对抗体确证试验的结果要求按照试剂盒说明书进行判断。W B试验判定阳性标准至少需要三条带，并且必须要包含2个ENV带，本次研究结果显示，仪器自动判读不会将感染样本误判为阴性，但在本研究中有5例人工判读为阳性的标本，采用仪器自动判读结果为不确定。引起判读结果出现不一致的因素主要有：（1）机器对条带的识别度较低，使得最终结果和人工判读结果又一定差异；（2）外界因素干扰，W B试剂使用的抗原为全病毒抗原裂解液[5]，通过电泳分离后转移到硝酸纤维膜上，具有分片段抗原多且齐全和抗原具有天然表位的特点。但其由于重要抗原的印迹量不利于控制，当待检血清或者血浆中有H IV抗体时就会与膜上抗原特异性结合，通过显色技术呈现阳性条带，但如果商品膜在制备过程中转膜失败，纤维膜上无H IV特异性抗原，或因为贮存条件不当引起膜上抗原失去稳定性不能与抗体紧密结合，在样本检测时可能会出现一些非特异性反应，造成结果的判定不一致。
根据数据统计分析，WB反应带型中gp160、gp120、P66、P51、P24、P55、P39的P值均小于0.05，表明差异有统计学意义，并且这些条带出现与否也会影响最终的结果的判定。
综上所述，仪器自动判读结果与人工判读结果基本一致。针对结果为不确定的病例，应警惕干扰因素，结合患者临床资料、流行病学史，加做HIV核酸检测，综合判断[6-9]，尽早明确诊断，为HIV感染者及艾滋病病人提供咨询、治疗。尤其是检测样本处于H IV感染的“窗口期”，机体急性感染H IV之后首先出现高病毒血症及高抗原血症，此时抗体尚未产生，主要通过检测血清(浆)中的p24抗原或H IV RNA进行早期感染诊断[10-11]]。
参考文献：
[1] WHO.Ten threats to global health in 2019[EB/OL].https://
www.who.int/zh/emergencies/ten-threats-to-global-health-in-2019.
[2] 中国疾病预防控制中心 UNAIDS和WHO技术支持下开展调查 （2019年）
[3] Liu M Q, Zhu Z R, Kong W H, et al. High rate of missed HIV infections in individuals with indeterminate or negative HIV western blots based on current HIV testing algorithm in China[J]. J Med Virol. 2016, 88(8): 1462-1466.
[4] 中国疾病预防控制中心．全国艾滋病检测技术规范［Z］．2020．
[5] 刘全忠，蒋岩. 人类免疫缺陷病毒确认试验假阳性问题及其对策[J]. 中华皮肤科杂志，200437（4）:245-246
[6] 钭慧芬，虞成超，孙宝昌，等. 3类特殊HIV抗体WB带型病例转归情况研究[J]. 中国卫生检验杂志. 2018，28(11): 1314-1317.
[7] 余明,许文平,孔丹, 等. HIV抗体检测策略的临床验证结果分析[J].中国艾滋病性病, 2019, 25(08):783-786.
[8] 曾德军, 张利沙, 马建英, 等. 2009-2017年德阳市艾滋病网络实验室能力建设分析[J]. 预防医学情报杂志, 2018, 34(12):28-32.
[9] 于玲,于莉. HIV抗原抗体筛查结合核酸定量补充检测的应用[J].中国卫生标准管理, 2019, 10(16):111-113.
[10] Dos Ramos Farias MS，Garcia MN，Dilernia D，eta1．C entrifuga-tion improves the detec tion of HIV -1 P24 antigen inplasma from children born to m others infection with HIV -1[J]．J V irol Meth-ods，2009，158 (1-2)：6—10．
[11] 黑发欣，王璐．病毒载量检测在HIV/AIDS抗体疑难样本诊断中的应用[J]．中国艾滋病性病，2010，16(3)：323—326．
第一作者：刘华，本科，技师，主要从事艾滋病检测工作
通讯作者：赖娟，E-mail:1772026470@qq.com