华菲
张家港市检验检测中心
摘 要
目的:是为了评定食品中菌落总数测定的不确定度,确定细菌菌落数置信区间。方法根据GB4789.2-2016对待检食品样品中菌落总数进行计算,计算检验结果的不确定度与样品菌落总数置信空间。结果测定:结果显示1号样品菌落置信区间为4500～6900CFU/g,2号为3300～5100CFU/g,3号为3700～5700CFU/g,4号为4000～6100CFU/g,5号为3200～4900CFU/g。所取样品各种不确定度为1.1547 、0.0049、0.0046、0.0089。结论:检验样本中菌落总数测定的不确定度的评定是一种比较科学的方法,在同类样品菌落总数的检验中进行不确定度评定尤为适合。
关健词:菌落总数;不确定度;评定
前 言
菌落总数即菌落形成单位数。其检测结果通常以单位重量的菌落数(CFU/g)表示。测量不确定度是评定测量水平的指标,是判定测量结果的依据,因此,正确评定测量不确定度对客观分析测量结果具有重要意义。食品中菌落总数含量是衡量食品质量好坏的重要指标之一,因此对其进行测量不确定度的评定也是很重要的。本文依据GB4789.2-2016《食品微生物学检验菌落总数测定》和JJF1059-1999《测定不确定度评定与表示》[1]来建立该不确定度评定方法,还探讨了其各种不确定度的分量来源。
1 材料与方法
1.1材料
取5份样品，在实验室条件下制备食品样品的均匀液样,采用平板计数琼脂进行培养。
1.2检测方法
每份样品分别25g+225mL高温灭菌过的生理盐水中，制成0.1稀释液，吸取1mL该稀释液,然后加入9mL高温灭菌过的生理盐水中,混匀制成0.01的稀释样,以此类推进行10倍递增的稀释。分别吸取1mL上述制备好的稀释液于无菌培养皿中,倾入15mL降温至46℃的平板计数（PCA）琼脂,混匀，同时制备空白对照样。待培养基凝固后将培养皿翻转放入36℃的恒温培养箱中培养48小时。
1.3菌落计算与不确定度评定
选择稀释度为?30～300的平皿菌落，按照GB4789.2-2016操作要求记录下每个平皿的菌落数[2]。同时计算出总不确定度。
2结 果
2.1样品菌落总数测定结果
测定结果显示1号样品菌落置信区间为4500～6900CFU/g,2号为3300～5100CFU/g,3号为3700～5700CFU/g,4号为4000～6100CFU/g,5号为3200～4900CFU/g。见表1。
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2.2取样引入不确定度
在制备液体样本溶液时,首次取样制备10mL溶液根据JJG196-006常用玻璃量器规定,其允许误差为±0.10mL,标准不确定度为0.089,本次试验中使用10mL移液管取样3次,因此引入标准不确定度为0.0501,相对不确定度为0.0020。250mL量出式量筒允许误差为±2.0mL,标准不确定度为1.1547,相对不确定度为0.0046;以上两个不确定度合成后的相对标准不确定度为0.0045。
2.3样品稀释中的不确定度
样品采用10倍系列稀释梯度,标准不确定度为0.0046,相对不确定度为0.0046,10mL吹出式刻度吸管容量允许误差为±0.10mL,标准不确定度为0.089,相对不确定度为0.009。计算获得本次试验样品稀释中引入的不确定度为0.0049。
2.4加样不确定度
每个培养皿的加样体积都相同,为1mL，所以不确定度一致,均为0.0046。
2.5重复性检验不确定度
不确定度产生的原因主要在于检验过程中菌落计数不同所导致，直接利用公式计算时数据的发散性较大，因此标准差也比较大，这造成了样本均值比较小时其不确定度比较大，所以在计算时可先计算检测数据对数值，然后换算为相应的数值，并计算出残差。结果显示,样品菌落总数测定的标准不确定度为0.035,样品相对标准不确定度为0.0089。
2.6菌落数置信区间
计算获得菌落总数为0.0917,如1号样品,样品测试结果为5200CFU/g、6000CFU/g,称取1g分别为3.7160与3.778,均值(3.7471±0.0440),区间为3.7911～3.7037,取反对数,获得置信区间估算值4500～6900CFU/g。
3 讨 论
菌落形成的单位为菌落数，简称为CFU，在一般情况下，菌落数的检测均以单位重量菌落数计量，这在某些产品检验与环境微生物检验中是一个重要的评价指标。为了提高菌落总数的计数准确度，为食品检验提供更为准确的依据，提高不确定度评定的有效性非常重要?。
食品检验中，菌落计数的步骤涉及到样品溶液的制备、样品溶液稀释?、细菌培养、菌落计数等多个环节，所以其检测结果的发散性较大，为此，提高数据的准确性和可靠性可为日后检测带来方便，需要对整个实验环节引入不确定度进行量化和分析[3]。本次试验中对5份食品样品稀释液菌落数不确定度进行了评定，实验工作中，还要对实验的重复性进行评定，然后将测试结果按照本次试验方法计算菌落的不确定度评定。
实验室要尽量识别出食品微生物菌落计数不确定度的各个分量,然后根据分量进行控制,判断其是否对检测结果产生影响。称重、吸液、稀释因素是不确定度评定的常见且比较容易识别的,而样品稳定性这类分量则无法直接测量和进行统计学评价,此时实验室需要考虑到其可能造成的偏差,采用可靠的方法对其影响进行评定。
本次试验测定结果显示1号样品菌落置信区间为4500～6900CFU/g,2号为3300～5100CFU/g,3号为3700～5700CFU/g,4号为4000～6100CFU/g,5号为3200～4900CFU/g。不确定度引入取样、样品稀释、加样重复性检验分量，各种不确定度为1.1547、0.0049、0.0046、0.0089。
4总 结
本文分析了食品中菌落总数测定的不确定度评定方法与结果。菌落总数测定的不确定度的评定是一种比较科学的方法，但此方法还有很多不足的地方,需要我们更深入研究与分析,找出有效的解决方法,提高食品中菌落总数测定的不确定度评定的准确性。
参考文献
[1]吴青,马芳.食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项[J].食品安全导刊,2019(15).
[2]王海华,兰茜.能力验证菌落总数测定结果不确定度的评定[J].食品安全质量检测学报,2015(6):2352-2355.
[3]袁平,吴春敏,林仲,et al.食品中菌落总数测定不确定度评定数学模型的建立[J].预防医学论坛,2016,22(7):540-542.