董启民
内蒙古赤峰市林西县疾病预防控制中心 内蒙古赤峰市 025250
【摘要】现阶段新型冠状病毒（SARS- CoV- 2）还在世界范围中流行爆发，该病具有很高的致死率，全球都在时刻关注。该病毒导致的肺炎（COVID-19）有效治疗的药物缺乏，早诊断是有效的防控措施。根据相关标准，核酸检测呈现阳性、可确定是该病毒感染。本文针对现阶段报道新型冠状病毒核酸检验进行综述，为该病毒的诊断方法优化提供依据。
【关键词】新型冠状病毒；核酸检测；抗体检测
新型冠状病毒引发呼吸道疾病，该病毒具有很强的感染性、同时潜伏期长，引发该疾病的机制尚未明确，现阶段治疗有效的措施缺乏。因此，及早发现携带该病毒及感染者立即进行隔离与治疗。本文针对新型冠状病毒核酸检验研究展开综述。
1.基因测序
暴发新冠肺炎疫情的初期，主要采用二代测序技术对病毒进行基因测序，证实病毒为β属冠状病毒，能实现早期诊断病毒感染。有研究显示，研发出的纳米孔靶向测序，能对覆盖病毒基因的区域进行检测，同时检测包括新冠病毒在内的4呼吸道病毒，灵敏度和特异度较高[1]。尤其针对于疑似新冠肺炎病例中的病毒基因测序，明确的新冠病毒同源就可以确诊为感染SARS-CoV-2，但这种方法用时长，设备高要求，对于临床大量病例诊断不适用。
2.荧光定量RT-PCR
荧光定量RT- PCR也是针对新冠病毒核酸检测的主要方法。新冠病毒属于RNA病毒，要进行转录形成cDNA，再通过PCR扩增的病毒核酸，应用Taqman探针分析，通常在4-6小时就能得到检测结果。新型冠状病毒核酸检测主要是对位点其主要的基因组进行基因序列，即 RdRp、N、 E等基因，应用ORF1ab、N基因的引物及探针。不同试剂的检测灵敏度有差异。采用荧光定量RT-PCR可对病毒的RNA进行分析，这种方法检测用时短、高效率。Taqman 探针可使得非特异扩增降低，但也可能出现假阴性的结果。此外，SARS-CoV- 2检测靶标由于疾病同源，结果可能出现假阳性，因此，应用同步检测以此确保核酸检验的准确性，现阶段新冠病毒进行核酸检测的试剂联合探针测序法，两者联用能对新冠病毒在内的冠状病毒及病原体进行检测，快速进行病毒检测。
3.恒温核酸扩增
3.1LAMP技术
这项技术主要依据链置换活性的聚合酶使得合成DNA形成循环，有研究显示，建立恒温扩增与RT-LAMP-VF的核酸技术对MERS- CoV中的N基因进行检测，检测结果及时，还和不同的冠状病毒不会发生反应[2]。这种技术应用优点较为突出，但对设计的特异性引物要求高，现阶段对LAMP技术对新冠病毒核算检测试剂还在研究中。
3.2 RCA 技术
这项技术是对环 DNA 分子建立的一项技术，有研究显示，应用RCA技术能对固液中的新冠病毒的RNA进行灵敏检测。主要用于环状病毒中的核酸、染色体质粒等，但现阶段这项技术尚未有应用新冠病毒核酸检测中的研究。
3.3NASBA技术
NASBA技术主要是介导2个引物持续对RNA进行扩增，这项技术证实了对于RNA检测相比于RT- PCR结果更准确。有研究显示，建立病毒的聚合酶和核衣壳蛋白等基因为主的实时NASBA 检测，灵敏度相当高[3]。这项技术不会受到肝素、DNA、血红蛋白、脂质等的影响，对标本如鼻咽、血液及粪便检测更加适用，优点突出，在快速诊断新冠病毒有优势。
3.4 基因芯片
这种检测技术属于高通量，针对于已知病毒及现有的病毒种类核酸检测。研究显示，基因芯片中主要有GenBank中病毒基因组中的核苷酸序列，经过验证SARS病例中分离的病毒是冠状病毒中的一种，这种技术能快速判断出现的新病毒。有公司研发出多种病毒进行核酸检测恒温扩增芯片法，在临床已投入使用，该芯片主要对病例分泌物采集标本，在90分钟内就能检测冠状病毒在内至少6 种常见的病毒，早期冠状病毒感染进行高效、准确及快速的诊断。深入研究冠状病毒的基因序列，能研发出冠状病毒及多个病毒基因序及多种SNP，序列基因芯片的应用，使得诊断冠状病毒的准确率大大提升，但由于一系列的因素影响，临床应用被限制。
4.总结
新型冠状病毒确诊主要的方法是核酸检测，该方法具有用时短、检测快、高灵敏度等特点，早期病毒诊断及临床抗病毒优势突出，是防止疾病病毒蔓延直接有效方法。基于现阶段采用针对冠状病毒感染的核酸检验技术研究，对相关的方法进行分析总结以期对该病毒早期诊断及防控有一定的价值。
【参考文献】
[1]张喆傲,高钟镐,黄伟.新型冠状病毒SARS-CoV-2检测分析技术研究进展[J].药物分析杂志,2020,40(10):1715-1726.
[2]陈新鹏,董昌金,李文静,涂俊铭,夏险.新型冠状病毒SARS-CoV-2的病原学特征及检测技术研究进展[J].湖北师范大学学报(自然科学版),2020,40(04):37-43.
[3]安娜,俸家富.医学检验技术在新型冠状病毒肺炎诊疗中的应用[J].检验医学与临床,2020,17(07):865-868.