黄国雁 王金銮 黄泽玛 陈珊珊 罗三
乐信乐美（海南）生物科技有限公司，海南海口 570311
摘 要 目的：建立高效液相色谱法测定葡萄糖酸钙锌口服溶液中盐酸赖氨酸的含量。方法：磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钾2.28g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至4.6后，加1.08g辛烷磺酸钠）-乙腈（895:105）为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃，流速每分钟0.8ml。色谱柱C18柱。结果：盐酸赖氨酸浓度在0.0010mg/ml-1.3993mg/ml的范围内，线性关系良好。平均回收率为101.19%，RSD为0.96%。结论:本方法灵敏、准确、简便。可用于测定葡萄糖酸钙锌口服溶液中盐酸赖氨酸的含量。
关键词：盐酸赖氨酸；高效液相色谱法；含量测定
Determination of Lysine Hydrochloride in Cacium and Zinc Gluconates Oral Solution by HPLC
Huang Guoyan，Wang Jinluan，HuangZema，Chen ShanShan，Luo San
LUCKTIN(HAINAN) BIOTECH Co., Ltd HaiKou，570311China
Abstract Objective: To develop a method for determination of lysine hydrochloride in Calcium and Gluconates Oral Solution by HPLC. Methods: Phosphate Buffer Solution (2.28g, dissolved in water and diluted to 1000ml, adjusted to pH 4.6 with phosphoric acid, add Sodium 1-octane sulfonate 1.08g）-acetonitrile (895:105) was used as mobile phase, detection wavelength was 203 nm, column temperature 30℃, flow rate 0.8 ml/min. Column C18. Results: The concentration of lysine hydrochloride was in the range of 0.0010 mg/ml-1.3993 mg/ml, and the linear relationship was good. The average recovery was 101.19% , RSD was 0.96% . Conclusion: The method is sensitive, accurate and simple. It can be used to determine the content of lysine hydrochloride in Calcium and Gluconates Oral Solution.
葡萄糖酸钙锌口服溶液是由葡萄糖酸钙、葡萄糖酸锌和盐酸赖氨酸组成的复方制剂。葡萄糖酸钙锌口服溶液所含钙参与骨骼的形成与骨折后骨组织的再建；所含锌具有促进生长发育、改善味觉等作用，盐酸赖氨酸具有促进人体生长发育的作用。本实验建立了盐酸赖氨酸含量的HPLC测定的分析方法，并进行了相关的方法学开发，并建立了相关的方法学考察。本方法简便、灵敏、准确。
1材料
岛津LC-2030高效液相色谱仪；十万分之一电子天平；pH计。
葡萄糖酸钙锌口服溶液 （批号：190101、190102、190103），盐酸赖氨酸（批号：180602，蚌埠丰原涂山制药有限公司），盐酸赖氨酸对照品（批号：140673-201509，中国食品药品检定研究院）磷酸氢二钾、辛烷磺酸钠为分析纯、乙腈色谱纯，纯化水。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：Kromasil-100-5-C18（ 4.6×250mm, 5μm）；以磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钾2.28g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至4.6后，加1.08g辛烷磺酸钠）-乙腈（895:105），检测波长为203nm，柱温30℃，流速每分钟0.8ml。
2.2溶液的制备
①阴性空白溶液：精密量取阴性空白溶液5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
②供试品溶液：精密量取供试品5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
③对照品溶液：取对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
④API溶液：取盐酸赖氨酸API约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3专属性试验
2.3.1未破坏试验：分别取“2.2”项下三种溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.3.2酸、碱、氧化、光、高温破坏试验：在选定的色谱条件下，分别对本品经酸、碱、氧化、光、高温的样品和辅料进行分析，结果显示主峰与相邻杂质峰的分离度均能有效分离，主峰峰纯度指数均符合要求，未检测到不纯物，且空白溶剂在主峰保留时间处无特征吸收峰出现，即空白溶剂对盐酸赖氨酸含量测定无干扰。
2.4定量限与检测限
取浓度为每1ml中约含1mg的对照品母液。逐级稀释母液至测定结果信噪比约为10，为定量限；稀释至测定结果信噪比约为3，为检测限。经计算，盐酸赖氨酸定量限浓度为1.03μg/ml，定量限为20.0ng，检测限浓度为0.31μg/ml。
2.5线性试验
取盐酸赖氨酸对照品约100mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，得贮备液（2mg/ml）。分别移取3ml、4ml、5nl、6ml、7ml置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取上述线性溶液分别注入液相色谱仪，线性方程为y = 912,936.6365 x + 1,794.4793；相关系数r为1.0000。结果表明，盐酸赖氨酸浓度在0.0010mg/ml-1.3993mg/ml的范围内，线性关系良好。
2.6仪器精密度
取线性关系项下100%浓度对照品溶液，连续进样6次。所测得盐酸赖氨酸峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.06%＜2.0%，保留时间的相对标准偏差（RSD）为0.01%＜1.0%。说明仪器进样精密度良好。
2.7 重复性试验
取“2.2”项下的供试品6份，对照品溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，结果表明：6份供试品溶液的含量RSD为0.23%，小于2.0%。说明该方法的测定重复性良好。
2.8溶液稳定性试验
取“2.2”项下的对照品溶液、供试品溶液在适当的环境条件下放置，分别于0h、2h、4h、6h、8h、12h、18h、24h、36h取样检测。结果表明：取对照品溶液和供试品溶液，在适当的条件下放置36小时，对照品溶液36h内较稳定，供试品溶液24h内较稳定，超过24小时需重新配制。
2.9耐用性试验
通过改变色谱条件中流动相比例变化、柱温变化±5℃，试验结果表明，该方法可靠性高、耐用性良好。
2.10准确度试验
取盐酸赖氨酸对照品适量，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解，精密量取阴性空白5ml，制成80%、100%、120%浓度的溶液；见表1。
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试验结果表明：每个浓度平均回收率应在98%～102%之间，平均回收率为101.23%，RSD为0.56%，结果表明本品回收率良好。
3结论
本方法采用高效液相色谱法，所建立的盐酸赖氨酸含量测定方法稳定性好，操作简便、快速，为葡萄糖酸钙锌口服溶液盐酸赖氨酸质量控制提供了一种可靠的方法。
4 参考文献
[1]王文清，沈新伦，熊苗苗等.离子对高效液相色谱法测定葡萄糖酸钙锌口服溶液中盐酸赖氨酸的含量.[J]中国医院药学杂志，2010，30（23）：1993～1995.
[2]杨杨，刘永成，刘利群等.HPLC法测定葡萄糖酸钙锌口服溶液中盐酸赖氨酸含量.[J]黑龙江医药，2014，27（3）：489～491.
[3]中国药典[S].2020 年版.二部.2020:1789.