陈秋军
中粮艾地盟粮油工业(菏泽)有限公司
摘要：黄曲霉毒素是粮油谷物食品中重点关注的食品安全指标，通过高效液相色谱仪检测10种不同黄曲霉毒素B1含量的花生油，同时用荧光免疫层析快速定量法检测黄曲霉毒素B1含量，进行结果对比。目的:实现黄曲霉毒素B1含量快速检测，提高检验效率。
关键词：黄曲霉毒素 快速 定量检测
随着国家、消费者对食品安全指标的关注程度越来越高，粮油谷物食品中黄曲霉毒素含量是否超标也受到越来越多的重视。黄曲霉毒素主要是由黄曲霉 和寄生曲霉产生的次生代谢产物，在粮油谷物食品中出现黄曲霉毒素的机率较高。它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品，是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。因黄曲霉毒素的危害性较大，在粮油谷物食品质量控制中属于重点控制的食品安全指标。
目前黄曲霉毒素检测方法有：薄膜层析法(TLC)、液相色谱法（HPLC）、免疫化学分析方法、酶联免疫吸附法（ELISA）是目前国内绝大多数检测机构都在使用的方法。由于其检测周期长，程序复杂所需试剂繁多、消耗免疫亲和柱费用较高等缺点已远远不能满足现代检测要求。
随着现代科学技术的不断发展，特别是免疫学生物化学，分子生物学的不断发展人们已创建了不少快速，简便特异，敏感低耗且适用的黄曲霉毒素检测方法。本文的荧光快速检测法，所涉及的仪器和试剂少，步骤简单，是一种先进、快捷、灵敏、准确、高效的方法。
1 材料和试剂
1.1主要仪器和试剂
分析天平、荧光快速测定仪、孵化器、移液枪、检测卡、离心管、振荡器、甲醇
2 检测原理与方法
2.1 检测原理
利用荧光免疫层析快速检测技术，当将待测样品滴加在检测卡加样区时，样品中的黄曲霉毒素B1 与结合垫中荧光微球标记的黄曲霉毒素B1 抗体结合并通过毛细作用向前层析，到达检测区后，检测线T1 和T2 上固定的黄曲霉毒素B1 抗原与剩余未结合的荧光微球标记黄曲霉毒素B1 抗体结合。反应结束后，使用荧光定量快速检测仪读取T1、T2 和C 线的荧光强度并计算(T1+T2)/C 值，通过仪器内置的标准曲线即可计算出样品中黄曲霉毒素B1 的含量并根据参考值判断阴阳性。
2.2 样品提取
准确称取5.0±0.05g 混合均匀的样品（或离心后的上层液体）于50mL 离心管中，加入25mL 8:2甲醇水提取，振荡提取5min。提取结束后，4000rpm 离心2min（如未配置离心机，可静置3-5min 待分层明显），取100μL 上清液，加入到600μL 样品稀释液中，混匀备用。
2.3 样品检测
从包装袋中取出黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡，水平置于检测卡恒温孵育器上，打开包装后请立即使用；用移液枪吸取稀释后的待测液100μL 加到检测卡上的加样孔中，开始计时孵育8 min（盖上孵育器盖）；孵育结束后，点击荧光定量快速检测仪屏幕上“标准曲线”，选择样品类型所对应的标准曲线后，将检测卡插入荧光定量快速检测仪中，按读数键或者触摸屏幕读数即可。
2.4 结果对比
为验证其检验结果的准确性，艾地盟将同一样品进行两种方法检测结果进行了对比分析，具体如下表所示：
.png)
2.5 结论
通过以上结果比对分析，荧光免疫层析快速定量法结果与液相定量结果基本一致，可用于粮油食品中黄曲霉毒素B1检测的控制。此法通过实际应用，快速定量检测可在15min内完成，与HPLC法相比可节约成本80%。可以通过快速定量检测、HPLC法定期验证相结合，有效解决了植物油黄曲霉毒素B1检测工作耗时长、成本高的问题，有助于提高日常检测效率。
参考文献
[1]江涛，李凤琴，王环宇，等.赭曲霉毒素A免疫学检测方法的探究［J］.中国公共卫生，2004
[2]王晶，等.免疫亲和层析净化高效液相色谱法测定酱油醋中黄曲霉毒素B1仪器与运用，2003，96-100.
[3]潘崴,庞广昌,张昀.黄曲霉毒素与食品安全[J].食品研究与开发,2004,(6).