王洁1 杨明2
山东第一医科大学第二附属医院 山东泰安 271000 山东省泰安荣军医院 山东泰安 271000
【摘要】目的：探讨白血病患者的NPMI（核仁磷酸蛋白）和FLT3（FMS样的酪氨酸激酶3）基因突变的临床特征。方法：选取2014年6月~2020年6月本院血液科收治的80例成人白血病（AML）患者为本次研究对象，初次治疗时收集骨髓单个核细胞并采用DNA-聚合酶链反应方法将其各自扩增为FLT3和NPMI基因，并用毛细管电池方法扩增NPM1基因第12外显子，FLT3基因突变：在5 ul 聚合酶链反应产物于20 g/L琼脂糖凝胶上进行电泳，观察患者基因突变特征。结果：80例患者中，其中初诊白血病患者中FLT3+共检测出56例（70.0%），中正常核型白血病患者有41例（82.0%）高于异常核型白血病患者15例（P<0.05），而NPM1+共检测出52例（65.0%），其中正常核型白血病患者占39例高于异常核型13例，（P<0.05）。FLT3+白血病患者中的总生存率占80.4%，FLT3-白血病患者的总生存率45.8%，差异显著（P<0.05）；NPM1+白血病患者的总生存率占78.8%显著较高于NPM1-总生存率48.2%（P<0.05）。结论：临床造成髓系白血病中的NPMI和FLT3属于最常见的基因突变类型，并且与患者的临床特征和预后均存在一定的相关性。
【关键词】AML;FLT3基因;NPMI;基因突变
1资料与方法
1.1临床资料
选取2014年6月~2020年6月本院血液科收治的80例成人白血病（AML）患者为本次研究对象，并依据白血病（FAB）等血细胞形态学分型诊断标准，将其分成M1、M2、M3、M4、M5、M6，分别占17例、17例、11例、9例、4例、4例，其中正常核型白血病患者占50例、异常核型白血病患者占30例，男性患者占35例、女性患者占45例，年龄为19~54岁，平均年龄为（32.52±10.68）岁，所有白血病患者及家属均自愿参与该项研究，并签署知情同意书，试验前，经本院伦理委员会批准。
1.2 研究方法
1.2.1 治疗方法
所有患者均在入院后开始治疗，根据患者自身检查情况和临床病症可采取维A酸和亚砷酸，可单独治疗，也可联合治疗；可采用DA方案治疗，其它专门针对急性粒细胞白血病的化疗方案，根据患者情况采取个体化治疗；CAG和减量DA方案化疗。
1.2.2 基因突变检测方法
FLT3基因突变：聚合酶链反应扩增FLT3基因，涵盖基因外显子14和15，引物定义链编码为：5，-GCAATTTAGGT ATGAAAGCCAGC-3'；反义链编码为：5，-CTTTCAGCATTTTGA CGGCAACC-3，；在5 ul 聚合酶链反应产物于20 g/L琼脂糖凝胶上进行电泳，若DNA电池条带>329 bp则为FLT3+标本。②NPM1基因突变：扩增NPM1基因第12外显子，扩增产物长度329 bp：3物EX：5，T YAACTCTCTGCTGGTA-CAATGAA-3，：反义链：5，TCITACAGAAATGAAATA-AGACGG-3，；在5，端标记FAM基羧基荧光素；聚合酶链反应总体系25 ul，反应条件：95 ℃预变性min，35个循环，72 ℃延伸6 min 1 ul 聚合酶链反应产物进行毛细管电泳，在215bp峰之后出现额外峰为NPM1+标本。
1.3 观察指标
观察所有患者基因突变情况及预后情况。
1.4 统计学方法
本文结合患者的基本资料及数据利用SPSS22．0统计学软件进行比较和分析，计量资料使用均数±标准差（）来表示，并进行x2检验，当数据显示P<0．05时，表示为差异具有统计学意义。
2结果
2.1 基因突变发生情况
80例患者中，其初诊白血病患者中其FLT3+共检测出56例（70.0%），而正常核型白血病患者有41例（82.0%），而异常核型白血病患者有15例（50.0%），两者对比，其正常核型高于异常核型（P<0.05），而NPM1+共检测出52例（65.0%），其中正常核型白血病患者占39例，异常核型占13例，其正常核型显著高于异常核型（P<0.05）。如表1所示。
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3讨论
白血病（AML）是一组发病机制和临床行为之间存在较大差异的一种疾病，起源于造血干细胞的一种恶性疾病，其发生改变的因素可能跟遗传学有关，同时具备一定的高度异质性，当基因发生突变、分化、凋亡等情况时也是发病的基础。白血病具有较高的凝血功能障碍，严重者会造成患者出血较多死亡，尤其发生在早期。经相关研究发现，对当前白血病患者中找出了多项基因突变因素，主要包括NPM1、FLT3，而此因素发生突变还能作为治疗白血病疾病的主要方案，对预后评估具有较高作用。因此，对白血病患者检测FLT3基因、NPM1基因对预后治疗具有重要帮助意义[1]。
FLT3属于Ⅰ型受体酪氨酸激酶，当配体和FLT3细胞外结构域相结合时可将其FLT3中的二聚化体诱发出来，进而可作为传导细胞的信号，同时还能造成细胞增殖和活化；若FLT3发生基因突变后，其引发FLT3出现磷酸化，进而严重破坏正常血细胞的增殖和分化，最终形成白血病。而NPMI主要位于核仁颗粒区，是所有核仁间质蛋白分子中的一部分，可任意穿梭于核仁、核质和胞质之间，还可参与核糖体前体运输和合成，最终可调控细胞的增殖发育和周期进程，同时也是引发白血病的初始因素。
综上所述，临床造成髓系白血病中的NPMI和FLT3属于最常见的基因突变类型，并且与患者的临床特征和预后均存在一定的相关性。
参考文献：
[1]阮敏，张丽，韩聪等.儿童正常核型急性髓系白血病核仁磷酸蛋白和髓系转录因子CCAT增强子结合蛋白A基因突变的临床研究[J].中华儿科杂志，2014，52（4）：303-307.