张辉
(南京市中医院检验科；江苏南京210000)
摘要: 目的：研究采用预溶稀释血样本与全血样本检测糖化血红蛋白(HbA1c)结果的差异程度及样本放置不同时间对 HbA1c测定的影响。。方法：采用离子交换层析法检测全血及预溶稀释血 2种样本在即刻、放置 4℃ 24 h及 48 h3个时间段内的 HbA1c含量并进行比较分析。 比较 ?Bio-Rad?VARIANT?II
全自动低压液相 HbA1c检测仪和 Rio-RadD-10全自动高压液相 HbA1c检测仪(简称 HPLC)间的相对偏差。结果：?Bio-Rad?VARIANT?II 与 HPLC 的相对偏差为 3.54%, 全血及预溶稀释血样本精密度均在允许误差范围内, 全血样本精密度稍好于预溶稀释血。全血及预溶稀释血样本保存不同时段的 HbA1c浓度均低于全血即刻浓度(P<0.05)。以全血样本即刻 HbA1c浓度为参比, 预溶稀释血样本即刻测定 HbA1c浓度的相对偏差与其余各时段比较为最小, 48 h内相同时 段全血样本相对偏差较预溶稀释血小, 预溶稀释血及全血样本放置 4 ℃ 24 h起 HbA1c测定值开始下降, 部分样本在放置 48 h后检测结果会有所回升, 但其偏差在实验室允许误差范围内。延长保存时间至72、120 h时, 部分 高浓度样本测定值会急剧下降, 而低浓度样本测定值会明显上升, 且下降与上升均无相关性, 预溶稀释血样本未出现这种情况, 相对较稳定。结论：因此可看出，采用全血样本检测 HbA1c精密度较高, 放置 4 ℃ 48 h内稳定性较好。 若样本保存时间超过 48 h, 采用预溶稀释血更为稳定。预溶稀释血及全血样本 4 ℃保存时间越长其检测结果越低。
关键词：预溶稀释血样本；全血样本；糖化血红蛋白
糖化血红蛋白(HbA1c)是血红蛋白与糖类经 非酶促反应结合而生成的, 其合成缓慢且相对不 可逆, 故可反映机体 2-3个月内的平均血糖水 平 ,因此 HbA1c已成为反映糖尿病患者较长时间 段内血糖控制水平的良好参数。目前 HbA1c 的测定方法主要有色谱法 、电泳法、免疫法和化学 法等多种,各种方法检测结果的差异是临床关注 和探讨的课题。?Bio-Rad?VARIANT?II 全自动低压液相 HbA1c检测仪系采用低压液相离子交换层析原 理 ,检测时可采用抗凝全血或预溶稀释血 2种性状样本 。为了解 2种样本检测所产生的偏差程度 以及样本放置时间对检测结果的影响 ,我们对此作相关检测 ,旨为临床应用提供参考。
1.资料和方法
1.1一般资料
随机选取本院体检中心糖尿病患者30例 ,男20例, 女10例 ,年龄 58-85 岁。选择健康体检者30名 ,男18名, 女12名, 年龄56-86，采集所有对象空腹静脉血 2 mL, EDTA-K2 抗凝。
1.2方法
使用?Bio-Rad?VARIANT?II 测定 。将采集的60例 EDTA-K2抗凝血充分混匀后根据试剂盒使用说明书要求取20 μL全血加入 980 μL溶血剂(1∶50稀释 )中 ,待红细胞完全溶解后 (5 min) 混匀 ,分装成 3份,其中一管与全血一同测试即刻 HbA1c, 另 2管与全血样本一同放入 4 ℃冰箱保 存(所有样本均加盖 ), 于24、48 h再一同取出检 测 HbA1c。再从中随机选取预溶稀释血及全血 样本各 20例延长保存时间至 72、 120 h进行测 定。并选取正常浓度及高浓度 2例样本各连续检测 15次, 计算其全血样本精密度及预溶稀释血精密度。
1.3统计学分析
本文研究采用统计学软件进行数据分析，数据分析使用SPSS 21.0版本，计量资料采用百分率（%）表示，使用t检测；检验使用χ2；数据分析P值如果小于0.05，则说明符合统计学意义。
2.结果
?Bio-Rad?VARIANT?II 与 HPLC 的相对偏差为 3.54%, 全血及预溶稀释血样本精密度均在允许误差范围内, 全血样本精密度稍好于预溶稀释血。全血及预溶稀释血样本保存不同时段的 HbA1c浓度均低于全血即刻浓度(P<0.05)。以全血样本即刻 HbA1c浓度为参比, 预溶稀释血样本即刻测定 HbA1c浓度的相对偏差与其余各时段比较为最小, 48 h内相同时 段全血样本相对偏差较预溶稀释血小, 预溶稀释血及全血样本放置 4 ℃ 24 h起 HbA1c测定值开始下降, 部分样本在放置 48 h后检测结果会有所回升, 但其偏差在实验室允许误差范围内。延长保存时间至72、120 h时, 部分高浓度样本测定值会急剧下降, 而低浓度样本测定值会明显上升, 且下降与上升均无相关性, 预溶稀释血样本未出现这种情况, 相对较稳定。
3.讨论
目前临床实验室常规用于HbA1C检测的方法有两类,第一类基于 GFb和非 GFb电荷的不同,包括阳离子交换色谱法 ,电泳法, 等点聚焦法等;第二 类基于GFb结构特点, 包括亲和色谱法, 免疫方法。?Bio-Rad?VARIANT?II 和 Rio-RadD-10(HPLC)均可遡源到美国国家 HbA1c标准化程序 (NGSP),本研究同 批样本用 DQ-2000 和 Rio-RadD-10同时检测, 以 HPLC测定浓度(X)为参比 , DQ-2000(Y)相对偏差为 3.54%。精密度实验中,正常浓度及高浓度样本全血模 式较预溶稀释血模式精密度高 ,考虑为全血模式测 试中全程自动化检测 ,无人工预溶血稀释可能造成 的人为误差 ,其结果更加稳定。 将全血样本即刻检测的 HbA1c浓度分别与全 血样本 4 ℃保存 24 、48 h以及预溶稀释血即刻、 4℃保存 24、48 h测得的 HbA1c浓度进行比较 ,差 异均有统计学意义。
因此可得出采用全血样本检测 HbA1c精密度较高, 放置 4 ℃ 48 h内稳定性较好。 若样本保存时间超过 48 h, 采用预溶稀释血更为稳定。预溶稀释血及全血样本 4 ℃保存时间越长其检测结果越低。
参考文献
[1] 张蕊. Irisin预处理减轻缺血再灌注急性肾损伤的作用及其机制的研究[D]. 2020.
[2] 勾思思. 血清C肽与糖化血红蛋白检验诊断糖尿病的临床效果及价值评价[J]. 临床检验杂志(电子版), 2020, 009(003):P.249-249.
[3] 张海港. 糖尿病患者糖化血红蛋白与空腹血糖同步检测结果研究[J]. 糖尿病新世界, 2020, v.23(12):51-52+55.
[4] 何丽凤, 李全培, 张海业. 血清C肽与糖化血红蛋白联合检验在糖尿病诊断中的价值[J]. 深圳中西医结合杂志, 2020, v.30;No.258(05):70-71.
[5] 陈雪琳. 糖化血红蛋白与血脂检测在2型糖尿病检测中的临床分析[J]. 糖尿病天地·教育(上旬), 2020, 017(004):146.