张用芬
海南回元堂药业有限公司 海南省海口市 570216
【摘要】目的测定益气复脉口服液中主要成分红参的含量，旨在为药品质量控制工作提供依据。方法采用高效液相色谱法（HPLC）对益气复脉口服液中主要成分红参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量进行测定。结果人参皂苷Rg1在0.1878~2.6697μg范围中呈线性关系；人参皂苷Re在0.1071~1.5315μg范围呈线性关系；人参皂苷Rb1在0.2432~3.251μg范围呈线性关系，加样回收率均值＞99％。结论 HPLC测定红参含量准确，重复性较好，操作简便，可用于益气复脉口服液中红参含量的控制。
【关键词】益气复脉口服液；红参；人参皂苷；高效液相色谱
本研究采用高效液相色谱法对益气复脉口服液中主要成分红参含量进行测定，收效较为理想，报道如下。
1 仪器与试剂
1.1 试验仪器
研究选用岛津LC2030液相色谱仪。
1.2 药品及试剂
乙腈、高纯水、人参皂苷Rg1对照样品（批号110703-201529）、Re对照样品（批号110754-201626）、Rb1对照样品（批号110704 200921）、益气复脉口服液（安康正大制药有限公司）
2 色谱条件
色谱柱SUPELCOSIL LC18（4.6mm×25cm，5μm）；流动相为：乙腈-水（17:83）；检测波长为201nm，流速为1.0ml/min，色谱柱温40摄氏度，分离度＞1.5；采用梯度洗涤进行洗脱，根据人参皂苷Rg1峰值计算理论踏板数，应当≥3000[1]。
2.1 对照样品溶液制备
取皂苷Rg1对照样品，精确至9.86mg，人参皂苷Re对照样品精确至10.22mg、Rb1对照样品精确至12.62mg，三个对照品分别置于10ml量瓶，并以甲醇进行溶解，稀释至刻度，充分摇匀药品，取人参皂苷Rg11ml，Re1ml、Rb12ml，取得样品混装入10ml量瓶，继续加入甲醇进行稀释，稀释至刻度后充分摇匀，制备完毕。
2.2 线性关系
吸取上述混合对照样品的溶液，分别为1μL、2μL、5μL、10μL、15μL，将其注入液相色谱仪，对峰值面面积分值进行测定，绘制曲线。研究结果表明，人参皂苷Rg1在0.1878~2.6697μg范围中呈线性关系，回归方程Y=183.12X+2.1751，r=0.9998，人参皂苷Re在0.1071~1.5315μg范围呈线性关系，回归方程Y=257.25X+6.1544，r=0.9997；人参皂苷Rb1在0.2432~3.251μg范围呈线性关系，回归方程Y=251.51X+4.2514，r=0.9996。
2.3 稳定性试验
吸取同一供试品溶液10μL，在相同色谱条件下，于配置后即刻、1h、2h、4h、6h、12h、24h分别进行测定，计算峰值面积，其峰值面积RSD值分别为：人参皂苷Rg11.98％，人参皂苷Re2.05％，、人参皂苷Rb12.23％，溶液在24h内稳定性良好。
2.4精密度试验
分别吸取同一供试品溶液10μL，连续重复6次进样品，计算峰值面积，所测结果为：人参皂苷Rg13.98％，人参皂苷Re2.25％，、人参皂苷Rb11.23％，精密度良好。
2.5 重现性试验
分别取5份同一批号样品，按照操作规程进行测定，所测结果：人参皂苷Rg1含量平均值0.1084mg/ml，人参皂苷Re含量平均值0.1354mg/ml，、人参皂苷Rb1含量平均值0.2831mg/ml，三者峰值面积RSD分别为1.4％、0.70％、1.2％，提示重现性良好。
2.6回收率试验
以加样回收法进行试验，取已知含量的同一批号样品2.5ml，再将人参皂苷Rg1、Re、Rb1混合对照样品水溶液2.5ml，（人参皂苷Rg17.25mg-5ml，人参皂苷Re9.25mg-5ml，人参皂苷Rb113.55mg-10ml，在分别取人参皂苷Rg12ml、Re2ml、Rb15ml，混合放置进入25ml量瓶）按照该方法与上述色谱条件测定，对回收率进行计算，结果如表1~3所示，结果提示回收率良好。
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2.7 样品测定
精密取装量项下5ml本品，准备预先处理的高12cm，内径1.5cm的大孔树脂柱，以50ml乙醇（30％）进行洗脱，并将洗脱液收集好后进行蒸干，加入甲醇溶解残渣，所取得样品转移进入5ml量瓶，并加入甲醇稀释至5ml，充分摇晃均匀，经0.45μg微孔滤膜滤过后，可获得样品，分别吸取对照溶液10μl、供试品溶液10μl注入液相色谱仪进行测定，结果见表4。
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3 讨论
益气复脉口服液主要由红参、麦冬及北五味子等重要组成，具有养阴生津的功效[2]。既往多采用紫外线分光光度法对本品红参中的总皂苷进行测量，操作相对繁琐，加之误差值较大，不利于质控[3]。本次研究以高效液相色谱法对该制剂中人参皂苷苷Rg1、Re 、Rb1含量进行测定，研究结果显示其稳定性、重现性、精密度及加样回收率均高，且测试成本不高，有利于提升益气复脉口服液质控水平，值得一提的是，人参皂苷为末端吸收，影响因素较多，为确保其分离度、理论板数达到要求，供试品应当采用预先准备的大孔树脂柱将干扰杂质去除。
【参考文献】
[1]李德坤,苏小琴,李智, 等.注射用益气复脉(冻干)的质量标志物研究[J].中草药,2019,50(2):290-298.
[2]王莹,刘芫汐,岳洪水, 等.电喷雾式检测器与蒸发光散射检测器用于注射用益气复脉中糖成分测定比较及方法准确性探讨[J].中国中药杂志,2020,45(22):5511-5517.
[3]李莉,周垚垚,李红艳, 等.HPLC法测定注射用益气复脉(冻干)中的4种低含量人参皂苷[J].药物评价研究,2020,43(8):1581-1586.