张雅楠1 吕皓*
延安市人民医院检验科，陕西 延安，716000
摘要:目的：评价和分析分子生物学技术在病原微生物检测中的应用价值，为今后的临床工作提供有价值的参考资料。方法：收集我院2019年5月至2020年5月常见病原微生物快速检测的临床资料，进行回顾性分析，评价分子生物学技术在病原微生物检测中的应用价值。结果：在分子生物学技术中，生物传感器、基因芯片、聚合酶链反应等新技术的开发和应用，对临床常见病原微生物的检测起到了重要作用，且各有特点。结论：在临床病原微生物检测过程中，应用分子生物学技术可以显著提高检测结果的准确性，对快速检测分析起到重要作用，值得重视和推广。
关键词:分子生物学技术;病原微生物;检验
近年来，随着科学技术的不断进步，人们对微生物与人体健康关系的认识逐渐加深。为了保证食品、医疗用品、化妆品和饮用水的安全，以及在环境监测、疾病诊断和治疗等领域，微生物检测逐渐成为一项关键技术，发挥着非常重要的作用。以往传统的微生物检测方法检测结果相对准确，但其缺点明显，如费时、费工、易耗品等。近年来，随着分子生物学技术的不断发展，它在微生物检测中发挥着非常重要的作用，得到了广泛的应用。为了评价和分析分子生物学技术在病原微生物检测中的价值，为今后的临床工作提供有价值的参考资料，对我院常见病原微生物快速检测的临床资料进行回顾性分析，并对结果进行分析报告如下。1资料与方法
1.1一般资料
本研究数据来源于我院2019年5月至2020年5月常见病原微生物快速检测的临床资料。
1.2方法
回顾性分析2019年5月至2020年5月我院常见病原微生物临床资料，评价分子生物学技术在病原微生物检测中的应用价值。比较分析了实时荧光定量RT-PCR和常规RT-PCR的结果。
1.3数据处理
采取SPSS22.0统计学软件进行数据处理，计量资料经(±s)形式表示，统计分析采取t检验，计数资料统计分析采取X2检验，P<0.05时视为差异存在统计学意义。
2结果
分析发现，随着生物技术的快速发展，生物传感器、基因芯片、聚合酶链反应等三项技术的研发，上述三项新技术各有特点，在快速检测临床常见病原微生物方面，具有自身独特的特点，在很大程度上可以为病原微生物的检测提供方便的条件。
对实时荧光定量RT-PCR和常规RT-PCR结果进行比较分析。发现实时荧光定量tr-pcr的阳性率明显高于常规RT-pcr（P<0.05），见表1。
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3讨论
21世纪是以分子生物学为代表的生命科学时代。近年来的发展表明，分子生物学基因诊断技术已广泛应用于遗传学、医学等领域，促进了现代医学从细胞水平到分子水平和基因水平的发展，最终形成了分子微生物学。随着这一技术的出现，人们对微生物的认识开始从外在结构特征向基因内部结构特征转变，微生物检测也从生化免疫方法发展到基因水平。现阶段，在分子生物学技术中，生物传感器、基因芯片、聚合酶链反应等技术发展迅速，具有自动化程度高、特异性高、灵敏度高、检测速度快、检测准确等显著优势，真正实现了有效、快速的检测，科学准确地检测临床病原微生物，满足临床诊断和治疗的需要。
聚合酶链反应（PCR）是生命科学领域中最常用的分子生物学技术之一。它是一种体外酶法合成DNA片段的方法，它由变性、退火、延伸等步骤组成。它是一个循环，重复，最终达到DNA快速指数放大的效果。结果表明，PCR反应原理与DNA自然复制原理相似。该周期包括：（1）变性：双链DNA在93～95℃下解离形成单链；（2）退火：引物与单链DNA模板在适当温度下的特异区域配对；（3）延伸：72℃时，Taqdnana聚合酶引物3，末端为起始点，dNTP为底物，并根据基互补配对原理合成模板DNA链作为互补的新链。30个周期后，目标基因将扩增超过一百万倍[7]。在PCR检测过程中，引物设计的质量具有重要意义。与传统的微生物检测方法相比，PCR检测具有灵敏度高、病毒检测灵敏度约为3 rfus、细菌检测最小检出率为3个细菌；特异性强、微生物种类不同可准确识别；操作简单，多数情况下，均为检测可在1~2小时内完成。目前常用的PCR类型有逆转录PCR、多重PCR、实时定量PCR等。
生物传感器是将传感技术与分子生物学诊断技术相结合的一种新技术。传感器已广泛应用于工业生产、海洋勘探、航天开发、医疗诊断、环境保护、生物工程等领域。随着科学技术的进步和发展，高精度生物传感器技术开辟了临床病原微生物诊断与检测的新时代。生物传感器是生物活性材料、仿生材料和物理化学传感器相结合的交叉学科，是生物技术发展中不可缺少的检测和监测手段。生物芯片技术是在“人类基因组计划”的基础上发展起来的一项新技术。生物芯片技术是一门跨学科的综合性学科。
生物芯片技术属于高通量检测技术，包括蛋白质芯片、基因芯片、组织芯片、芯片实验室等，其中基因芯片技术应用最为广泛。所谓基因芯片，又称DNA芯片、DNA阵列、寡核苷酸芯片，是指以许多特定寡核苷酸或基因片段为探针，按碱基配对原理定期排列、固定在支架上，然后与标记样本的基因杂交，再激光扫描芯片共聚焦荧光检测系统通过计算机系统对探针上的荧光信号进行比较和检测，以快速获取信息。基因芯片技术具有多样性高、并行性强、小型化、自动化等特点。在病原微生物检测中具有显著优势。它可以实现对一片芯片上各种病原微生物的快速检测。样品消耗小，试剂消耗减少。该方法特异性高，灵敏度高，具有重要的临床应用价值。总之，在分子生物学技术中，生物传感器、基因芯片、聚合酶链反应等新技术的发展和应用在临床常见病原微生物的检测中发挥了重要作用，各有其特点。
在临床病原微生物检测过程中，应用分子生物学技术可以显著提高检测结果的准确性，对快速检测和分析起到重要作用，值得重视和推广。
参考文献：
[1]尹子波，侯玉柱，尹建军，等.ATP生物发光技术在微生物检测中的应用[J].食品研究与开发，2012，33(2)：228-231.
[2]袁红福.分子生物学技术用于病原微生物检验的效果研究[J].名医. 2020,(09)：150-151.
[3]李玲，杨丽.玮病原微生物检验中分子生物学技术的应用效果分析[J].临床检验杂志(电子版). 2019,8(03)：173.