叶彬彬
岳池县人民医院 四川广安 638300
【摘要】目的：观察分析在高危人乳头瘤病毒感染临床检测中采用实时荧光聚合酶链反应检验的诊断价值。方法：将2019年1月至2020年12月我院妇产科接收的128例高危型人乳头瘤病毒感染患者进行研究，对所有患者均实施实时荧光聚合酶链反应法进行检测，并将检测结果列为实验组，然后对所有患者均实施常规的第二代杂交式捕获检测技术检验诊断，将该检验诊断结果列为两组患者均为全部研究对象。观察比较实验组与参照组两种检验方法在高危人乳头瘤病毒感染者中的诊断效能。结果：实验组采取的实施荧光PCR检验的阳性检出率为78.13%（100/128）显著高于参照组第二代杂交捕获法阳性检出率64.84%（83/128），组间比较有较大的差别（P＜0.05）；且实验组的慢性宫颈炎的HPV阳性检出率为64.10%显著高于参照组的法阳性检出率64.84%，且实验组鳞状上皮病变阳性检出率70.27%也显著高于参照组45.95%，组间比较有较大的差别（P＜0.05）；实验组在I-II的宫颈上皮瘤病变类型的HPV阳性检出率也明显高于参照组，但无统计学意义，对于III级CIN两组的检出率则完全一致（P＞0.05）。结论：在高危型人乳头瘤病毒的临床诊断中，采取实时荧光聚合酶链反应法相较于传统的第二代杂交捕获法具备更为理想的诊断效能，能够跟给准确的发现感染者，从而更早的实施治疗，值得临床推广。
【关键词】高危型；人乳头瘤病毒；临床检测；实时荧光聚合酶链反应；第二代杂交捕获检测；诊断效能
Diagnostic value of real-time PCR in clinical detection of high-risk human papillomavirus infection
Objective: To observe and analyze the diagnostic value of real-time fluorescent polymerase chain reaction in clinical detection of high-risk human papillomavirus infection. Methods: 128 patients with high-risk human papillomavirus infection in our hospital from January 2019 to December 2020 were studied. All patients were detected by real-time fluorescent polymerase chain reaction, and the test results were listed as the experimental group. Then all patients were diagnosed by conventional second generation hybrid capture detection technology, and the test results were listed as the experimental group Two groups of patients were all the research objects. Objective To observe and compare the diagnostic efficacy of two test methods in high-risk human papillomavirus infection patients between the experimental group and the reference group. Results: the positive detection rate of fluorescent PCR in the experimental group was 78.13% (100 / 128), which was significantly higher than that in the reference group (64.84%, 83 / 128), and there was a big difference between the two groups (P < 0.05); the positive detection rate of HPV in the experimental group was 64.10%, which was significantly higher than that in the reference group (64.84%), and the positive rate of HPV in the experimental group was higher than that in the control group (P < 0.05) The positive detection rate of skin lesions was 70.27%, which was significantly higher than 45.95% in the reference group (P < 0.05). The positive detection rate of HPV in I-II cervical epithelioma lesions in the experimental group was also significantly higher than that in the reference group, but there was no statistical significance. The detection rate of grade III CIN in the two groups was completely consistent (P > 0.05). Conclusion: in the clinical diagnosis of high-risk human papillomavirus, compared with the traditional second generation hybrid capture method, real-time fluorescent polymerase chain reaction has more ideal diagnostic efficiency, which can accurately find the infected person, so as to implement the treatment earlier, which is worthy of clinical promotion.
[Key words] high risk type; human papillomavirus; clinical detection; real time fluorescent polymerase chain reaction; second generation hybrid capture detection; diagnostic efficacy
人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）一种乳多空病毒科A亚群内的一组DNA病毒，该病毒感染者即HPV患者在临床上较为常见，据相关医学数据统计显示，在我国有超过60%的女性曾感染过HPV。HPV病毒持续感染会对患者的身体健康以及生命安全造成严重影响，据现代临床医学研究显示，HPV感染可诱发宫颈病变、子宫内上皮瘤变、子宫颈癌等多种恶性妇科疾病，有研究数据显示宫颈癌患者的HPV检测阳性率高达99.8%[1]。更多的研究论文显示，在女性宫颈疾病的发展与发病过程中，HPV病毒具备重要推动作用。高危型HPV病毒是HPV中的一项细分，其也是宫颈癌变以及其他恶性宫颈疾病发病的必要条件，故医学界认为高危型HPV感染者的早期诊断对患者的治疗有着重要意义[2]。为应对该类情况，临床医学对第一代杂交捕获实验（hybrid capture-I，HC-I）进行改良，发明了第二代杂交捕获实验（hybrid capture-II，HC-II）用于对HPV的筛查诊断，该诊断方式被广泛应用于临床，向交易HC-I其具备较高的诊断效率，较低的诊断费用等优点，对于高危型HPV的临床筛查诊断起到了关键作用。但是该诊断方式在对高危型HPV的具体情况进行病变鉴别的效果较为一般，故高危型HPV患者在筛查出后往往需要一系列复杂的鉴别诊断，才能够进入临床治疗阶段，这极大的延误了患者的早期治疗，不利于患者的临床康复，故医学界一致认为需要一种更为理想的鉴别诊断措施来完成高危型HPV的病变鉴别诊断[3]。实时荧光聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种新型的分子医学检验方式，其能够对HPV感染患者的核酸进行测定，该方式集成了常规PCR诊断方式的高灵敏性、DNA杂交高特异性、广谱技术高精准性，并且克服的传统PCR不足[4]。本文现将该诊断方式与HC-II进行对比分析，以为临床高危型HPV的诊断提供理论依据，现全文如下。
1.1资料与方法
1.1一般资料
将我院从2019年1月至2020年12月间妇产科收治的高危型人乳头瘤病毒感染患者进行研究，全部患者共计128例。所有患者最小年龄为27周岁，最大年龄为68周岁，年龄均值为（36.55±4.52）岁。体重指数18-25kg·m-2，体重指数均值为（21.95±1.06）kg·m-2。在全体患者中有52例患者存在宫颈病变情况，其中上皮瘤病变（cervical intraepithelial enoplasia，CIN）I级26例，CIN II级19例，CIN III级7例；有37例患者为鳞状上皮病变，有39例为慢性宫颈炎。全部病人自身的一般病例信息比较完全一致（P＞0.05），可进行对比。
纳入规则：①所有患者均已完全了解本次研究的详细内容，其自愿参与本次研究，且经相关审批予以批准；②所有患者均有性生活史；③所有患者均具备实时荧光定量PCR检验、HC-II诊断检测；④所有患者均符合高危型HPV感染者的临床诊断标准，经病理学诊断确诊为高危型HPV感染者。
排除规则：①患者有重要器官严重受损情况或其他影响观察判断的疾病或生理特征；②患者患有精神类疾病，如精神意识障碍，交流不畅；③患者存在其他传染性疾病或者合并其他生殖系统恶性疾病。
1.2方法
1.2.1参照组
参照组检验方式为HC-II检测，具体操作为：使用Digene公司的HPV DNA检测试剂盒，行细胞标本双链解链操作，采用RNA探针行杂交处理，后生成杂交体与特异性抗体结合，结合发光强度、大小定量测定，计算负荷量。HPV负荷量≥1.0μg·L即为阳性，反之为阴性。
1.2.2实验组
实验组检验方式为实时荧光PCR检测，具体操作为实时荧光定量PCR检验使用扩阴器充分暴露宫颈口，使用棉拭子擦拭干净分泌物，将宫颈刷缓慢送至宫颈口，逆时针转动4-5圈，后将宫颈刷置入含有保存液的洗脱管中，做好标记，管盖旋紧，折断宫颈刷，使刷头留置在管中。将收集的宫颈脱落细胞标本置入微量离心管(1.5mL)，离心(13000r·min-110min)处理，弃上清液，加入50ug裂解液悬浮沉淀，100℃环境下加热10min，离心(13000r·min -110min)处理，保留上清液，待用。PCR扩张，50℃15min,90℃10min,40个55-95℃循环，使模板DNA加热到95℃，双链DNA解离为单链。将PCR产物加入杂交缓冲液，沸水浴变性10min，51℃环境下，杂交1h，洗脱15min。POD孵育洗涤，显色。循环阈值(cycle threshold,Ct值）＜37为阳性，反之为阴性。
1.3观察指标
观察比较实时荧光PCR检测方式与HC-II检测方式在高危型HPV患者中的慢性宫颈炎、鳞状上皮病变、宫颈上皮瘤病变I-III级的检测阳性率。
观察比较PCR检测方式与HC-II检测方式的高危型HPV的诊断效能。
1.4统计学方法
将数据纳入SPSS21.0系统软件中进行计算，以（±s）进行计量统计，以（%）进行计数统计，t检验与x2检验，P＜0.05则表示有统计学意义。
2.结果
2.1比较实验组和参照组两种检测方式的高危型HPV病毒感染的阳性检出率
由表1数据可知，实验组采取的实施荧光PCR检验的阳性检出率为78.13%（100/128）显著高于参照组第二代杂交捕获法阳性检出率64.84%（83/128），组间比较有较大的差别（P＜0.05）。
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2.2比较实验组和参照组两种检测方式的高危型HPV病毒感染者不同病种类型的阳性检出率
由表2数据可知，实验组的慢性宫颈炎的HPV阳性检出率为64.10%显著高于参照组的法阳性检出率64.84%，且实验组鳞状上皮病变阳性检出率70.27%也显著高于参照组45.95%，组间比较有较大的差别（P＜0.05）；实验组在I-II的宫颈上皮瘤病变类型的HPV阳性检出率也明显高于参照组，但无统计学意义，对于III级CIN两组的检出率则完全一致（P＞0.05）。
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3.讨论
高危型HPV是引发宫颈病变的主要致病因素，故临床上对HPV筛查诊断有着重要意义。在早些年临床医学专家对病毒进行深入的研究，据相关文献阐述，HPV的基因型在100种左右，其中有20%的类型可诱发肿瘤，40%的类型可诱发生殖系统的相关疾病，且为感染性疾病。临床医学专家将HPV的类型分为高危与低危两种，两者的差异主要为致病性以及致病方式，高危型的HPV具备极强的致病能力，较为容易造成感染这出现肿瘤疾病[5-6]。
而HPV其自身具备感染性，故在HPV感染（携带）者分布范围极广，患者基数极大，为应对该疾病，尤其是对该病的诊断，临床医学界进行深入研究。美国Digene公司对第一代杂交捕获法进行深度改良，形成了基于HPV-DNA技术，该检验方式依托利用化学发光信号的原理，将从患者体内抗体捕获到的信号进行放大，完成对HPV的诊断[7]。虽然该方式向相较于上一代有巨大的提升，但是其整体复杂程度较高，在基层医院的应用存在一定的障碍。因为HPV无法在人体外存活培养，也不适合动物，故HC-II虽然能够监测HPV感染，但是因为采样的准确性、病毒浓度的水平较低问题，较为容易出现假阴性。最为重要的是HC-II监测方式在鉴别HPV具体类型时的诊断效能极差[8-9]。
实时荧光PCR检验方式是集成了常规PCR优势的一种诊断方式，该方式能够以基因扩增为检测基础，故其的整体检测结果不会因为HPV病毒浓度过低而出现假阴性的问题，故其对于低浓度感染者，具备较为优秀的诊断效能。在本次研究中能够发现在CIN I级患者的检验中，实时荧光PCR的阳性率就是高于HC-II，虽然没有显著的优势，但是也足以证明在更低浓度的HPV感染者中，实时荧光PCR的诊断优势。而且实时荧光PCR检验是给予全自动荧光定量扩增分析仪，相较于HC-II具备更理想的诊断效率[10]。
综上所述，在高危型人乳头瘤病毒的临床诊断中，采取实时荧光聚合酶链反应法相较于传统的第二代杂交捕获法具备更为理想的诊断效能，能够跟给准确的发现感染者，从而更早的实施治疗，值得临床推广。
参考文献：
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