HPLC法测定跌打丸中血竭素的含量方法改进

发表时间:2021/4/28   来源:《科学与技术》2021年1月第3期   作者:苗丽娟,王六贵,董媛媛
[导读] 目的通过测定跌打丸中血竭素的含量,
        苗丽娟,王六贵,董媛媛
        山西振东开元制药有限公司 山西长治 046108
        摘要:目的通过测定跌打丸中血竭素的含量,来确定出最佳的加流温度,同时确保产品质量的可靠性和可控性。方法以跌打丸中血竭素的含量为考察对象,采用液相法对跌打丸中的血竭素进行含量测定。结果血竭素在1.53~7.66μg范围内线性关系良好,r=0.9997,平均回收率为98.64%,RSD=1.12%。结论采用改进后的方法测定跌打丸中血竭素的含量可以使含量提取达到最大化,而且改进后的方法科学、合理、重复性好,可以运用到跌打丸的质量控制。
        关键词:跌打丸;血竭素高氯酸盐;Agilent 1260;含量
        
        跌打丸为我公司生产的主打品种,其临床疗效较为突出,得到了人民群众的认可和一致好评。这个品种的主要卖点就是处方中的24味中药材质量优良,尤其是其中的血竭、乳香、没药三味药材,在检验过程中除了严格按照《中国药典》进行全检外,还要严格按国家局下发的《补充检验方法标准》进行全检,所以质量非常可靠。24味药材中选用三七作为君药,更加突出了该品种的疗效,活血散瘀,消肿止痛。臣药选用血竭,血竭为名贵药材,价格高昂,但是我单位选用的血竭货真价实,疗效显著,与三七配合组方,使该品种的止痛作用更加突出。土鳖虫在处方中为佐药,辅助治疗跌打损伤的后续疗养,能够驱散淤血、强筋健骨,更是在此疗效上如虎添翼,组方合理、科学。
        为更好的保证该制剂疗效,有效控制其质量,我们在对跌打丸的血竭素测定过程中发现,样品制备过程中的回流温度控制在70℃度时血竭素的含量明显升高,所以针对供试品制备过程中的回流温度进行了连续4批的考察与确认工作,最后考察结果一致(采作70℃回流,含量是最高的),经过对考察结果的分析与评估,重新改进了制备方法,很好的提高了测定的灵敏度。
1  仪器与试剂
1.1  仪器
        检验仪器:Agilent 1260型液相仪,G1311C四元泵,G1314F紫外检测器
        工作站:Agilent 1260液相仪自带软件。
        天平:万分之一电子天平(FA2004);十万分之一电子天平(CP225D)
        色谱柱:KromasilC18(4.6mm×25mm, 5um)。
        对照品:血竭素高氯酸盐购于中国食品药品检定研究院
1.2  试剂
        所用试剂为色谱纯或分析纯。
2  方法
2.1  色谱条件
        色谱柱采用C18为填料,流动相为乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液,比例采用49:51;紫外检测选用440nm。理论板数按血竭素峰计算应不低于4000。
2.2 对照品溶液的制备
        对照品:血竭素高氯酸盐
        配制溶液:3%磷酸甲醇溶液
        配制浓度:每1ml含血竭素14.52μg的溶液
2.3 供试品溶液的制备
        取跌打丸大蜜丸样品,剪成小块,精密称取第一份供试品2.0015g、第二份供试品0.2005g至150ml磨口瓶中,分别精密加入3%磷酸甲醇溶液25ml,塞上瓶盖,电子天平上称定重量,70℃加热回流30分钟,放冷至室温,再次称定重量,用3%磷酸甲醇溶液补足减失的重量,充分摇匀后,进行离心处理,吸取上清液进行0.45um过滤膜过滤,作为供试品溶液。
2.4  精密度试验
        吸取配制好的对照品溶液20uL,采用全自动进样器连续进样5次,测得峰面积,结果RSD=0.5%,精密度测定符合标准规定。
2.5  线性关系的考察
        将血竭素高氯酸盐对照品放至室温后,精密称取对照品2.46mg,置10mL棕色量瓶中,用吸管吸取3%磷酸甲醇溶液至量瓶中进行溶解,连溶解边振摇,并稀释至刻度。吸取上述对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL,转移至10mL棕色量瓶中,再加3%磷酸甲醇溶液,边加边振摇,加至刻度。分别吸取5个浓度的对照品溶液,注入液相色谱仪,如法测定。以对照品浓度的峰面积进行线性回归,得回归方程:Y=1.2271x+5.1243,r=0.9997。
2.6  重复性试验
        取跌打丸大蜜丸样品适量,按2.3项下供试品处理的方法测定血竭素的含量,以6次的测定结果计算RSD,RSD=1.8%,重复性测定符合标准规定。
2.7  加样回收率试验
        取跌打丸大蜜丸样品适量,精密称取供试品1g,共称取6份,再分别加入24ug/ml对照品溶液3ml、4ml、5ml置150ml磨口瓶中,分别按2.3项下供试品制备方法同法制得6份供试品溶液进行测试,结果见表1,结果显示,本方法有良好的回收率


2.8  样品的测定
        取4批样品,分别按2.3项下供试品制备方法制得供试品溶液,同时再按2020版药典方法制得供试品溶液,依法测定,两者的对比结果见表2:


3  效果评价
通过药典方法与改进后的方法测得的数据进行比较,可以看出将供试品制备温度制定在70℃回流,更能有效的将血竭素的含量提取完全,故改进后的标准更科学、合理,适用于跌打丸中血竭素的含量测定。
4  讨论
        改进后的方法与《中国药典》2020年版一部跌打丸【含量测定】项下规定的方法基本相同,只是在原来的基础上规定了温度控制,在不违背药典的原则下,对回流温度做了要求,通过连续几批的考察比对,发现结果含量测定相差30%左右,数据比较见表2
        通过改进前后的数据对比可以看出,试验温度不同,含量相差很大,结合表中的数据,可以看出该方法对跌打丸中血竭素含量的提取可以达到最大化,而且重现性较好,适用于跌打丸的含量测定。
        血竭为棕榈科植物麒麟竭的果实及树干中渗出的树脂,性质极不稳定,遇热会发生变化,所以不同的温度对其稳定性影响程度不同,通过考察发现,温度在70℃以下时对血竭素含量影响不大,稳定性较好;而在70℃以上时则随温度升高血竭素含量下降明显加快。故采用温度控制在70℃进行回流考察其含量,结果70℃血竭素含量最高,为最佳的提取温度。
        结合以上表格进行对比,改进后的检测方法更具有实际指导意义,可作为控制该制剂质量的检测方法。
致谢
在我完成论文的各个阶段,王六贵老师给我提出了很多宝贵的建议和思路,我也从老师身上也学到了很多,不仅是知识的学习,还有做人、做事的学习,再次感谢老师对我的关心和鼓励。
其次,本论文能够顺利完成离不开实验室姐妹们的全力配合,更离不开董媛媛老师的大力支持和指导,感谢你们给我提出的一些重要论据、资料和信息,才使我圆满的完成了本次论文,衷心的说一声:“谢谢各位,你们辛苦了!”



参考文献
[1] 徐淑卿,郝颖,赵清中.药血竭的稳定性研究[J].中成药,2006,28(4):586-587.
[2] 李忠琼,向东.HPLC测定龙血竭中龙血素A和龙血素B的含量[J].华西药学杂志,2005,20(4):348-349.
[3] 俞红,吴成立,陶玉峰.高效液相色谱法测定八厘散中血竭素的含量[J].中国现代应用药学杂志,2007,24(5):410-411.
[4] 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究[M].北京:中国医药科技出版社,1994.514.
[5] 徐淑卿,沙明,孟宪生.血竭的稳定性研究[J].中成药,2005,27(5):598-599.
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