古景腾 所跃刚 谢佳勋 古湘瑜 张存荣
云南巨漳生物科技有限公司 650033
摘 要：目的 应用HPLC方法进行大麻中大麻二酚含量分析，并对其中的CBD含量的变化进行检测。方法 工业中大麻的部位不一样，CBD含量亦不一样，并且对于不同的工艺参数，包括烘烤的温度、时间以及环境PH进行预处理，观测CBD含量的变化。结果 HPLC方法测定大麻CBD含量，得出相应的标准曲线，其中标曲的线性关系良好，加样回收率达到100.12%，在PH为11的环境下，静置第一天含量为24.52，静置半个月，含量为0。结论 碱性环境对CBD的影响最大，烘烤温度为120摄氏度、烘烤时间为40分钟的工艺参数工业大麻叶中的含量最高。这个最终得到的工艺参数以及方法可以有效的提高大麻中的CBD含量，可为提取技术提供依据。
关键词：工业大麻；大麻二酚；HPLC；含量变化
1引言
工业大麻中的大麻二酚（简称CBD），是一种无毒无成瘾因素的最为重要的生理活性成分，在临床上可以安全阻碍THC在人类神经系统中的相应不利因素。在当今医学上，可有效的治疗焦虑、失眠、惊厥、阿尔茨海默病并有一定的止疼镇痛作用，大麻二酚的医疗作用使大麻产品已经转变为合法化。通过科学手段对大麻二酚含量进行测定，并研究提取工艺的预处理的过程对于得到最佳的提取参数具有重要的意义[1]。
2材料与方法
2.1实验仪器
整个实验设备主要有，高效液相色谱仪、SPD-M10AVP检测器、LCsolution色谱工作站、色谱柱、高精度电子天平、超声清洗设备、尼龙微孔滤头；一次性无菌5毫升、2.5毫升注射器，高精度移液枪等。
2.2实验样品及试剂
实验样品及试剂主要有，甲醇、纯净水、大麻二酚对比品、工业大麻等。
1.3对比品及供试品溶液的制备
对比品溶液为浓度100μg/ml的甲醇溶液。供试品溶液的配制溶剂为大麻供试品，溶剂为体积比为9：1的正己烷乙酸乙酯溶液，其中取大麻供试品0.4000克，溶剂16毫升，然后超声进行5分钟，静置1.5小时，用每分钟15000转的离心机离心10分钟后，收集溶液上不清澈液体20毫升于容量瓶，定容摇匀以备用。
1.4方法学研究
①色谱环境条件
色谱柱参数：4.6×250mm，5μm；
流速：1.0ml/min；
检测波长：220nm；
进样量：10μ;
柱温度：30℃；
流动相：甲醇-水体积比例为85：15。
②线性关系的检测
按照标准溶液平直方法配置对比品溶液后以1μL、5μL、10μL、20μL、50μL进样，并对静置时间以及峰面积进行记录。
③精密度和重复性试验
对供试样品溶液连续进样6次，每次记录CBD的停留时间以及峰值面积；供试药材工业大麻进行样品制备，然后进行进样，每次记录CBD的停留时间以及峰值面积；最后计算每种物质的停留时间以及峰值面积的RSD%，从而对此次方法的精密度以及重复性进行检查。
④稳定性试验
对供试样品溶液进样10μL测定，并在0、2、4、8、12、24小时分别计算每种物质的停留时间以及峰值面积的RSD%。
⑤加样回收率
通过向大麻供试样品溶液中加入定量的CBD对比品，通过得到实测值与大麻供试样品溶液的含量之差的额出加样回收率。
1.5样品含量测定
将不同的工艺参数包括烘烤温度、烘烤时间以及PH值预处理后的工业大麻样品分别配制供试样品溶液，在取 10 μL 注入液相色谱仪，记录停留时间以及峰值面积，并将记录的结果运用CBD标准曲线最终得到工业大麻样品中的CBD含量。
2 结果
2.1 方法学研究结果
①工业大麻中 CBD色谱图以及样品HP LC色谱图
按照制定的色谱环境条件，得到工业大麻中 CBD色谱图以及样品HP LC色谱图见图1、图2。
图1 CBD对照品色谱图
图2 工业大麻样品色谱图
②线性关系的检测
绘制标准曲线时横坐标为质量，纵坐标为峰值面积最终得出，CBD线性回归方程为[2]：
其中，0.000 1<R2 = 0.9990<0.005 mg相关系数满足在线性关系良好范围内[3]。
③精密度和重复性试验
记录精密度试验以及重复性试验的CBD的停留时间以及峰值面积后得出每种物质的停留时间以及峰值面积的RSD%分别为0.12%与0.38%，从而得出此次试验的精密度以及重复性良好[4]。
④稳定性试验
通过稳定性实验求得工业大麻CBD峰面积RSD，最终得出样品液可以在24小时内的稳定性良好，求得RSD%值为0.85%。
⑤加样回收率
准确记录峰面积，通过计算来求得CBD峰加样回收率，表1为大麻中 CBD 峰加样回收率统计数据，可以看出加样回收率方法准确度是十分可靠的。
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2.2 含量测定结果
表2到表7的数据以及图2可以得出，将不同的工艺参数包括烘烤温度、烘烤时间以及PH值预处理后的工业大麻样品分别记录停留时间以及峰值面积，并将记录的结果运用CBD标准曲线最终得到工业大麻样品中的CBD含量。碱性环境对CBD的影响最大，烘烤温度为120摄氏度、烘烤时间为40分钟的工艺参数工业大麻叶中的含量最高[5]，约为7.485mg/g。两种烘烤方式并没有有对大麻叶CBD含量产生较大的影响，在40分钟时达到最高值。选择质量为1mg质量CBD，采用乙醇进行溶解，分别采用HCl、KOH对PH进行调节为1、7，静置存放0、5及15天来对pH对CBD含量影响进行观察与分析。
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3 讨论
通过实验的目的、方法、过程、结果可以看出，碱性环境对CBD的影响最大，工艺参数为烘烤温度120摄氏度、烘烤时间40分钟时的工业大麻叶中的含量最高。实验结果在实际的大麻二酚提取工业生产中具有很重要的指导意义，但很多因素会对实验室的试验结果产生不同程度的影响，正确运用实验室实验结果作为指导，通过不断改进最终得到工业大麻二酚的最佳提取工艺。
参考文献
[1]高宝昌,孙宇峰,张旭,石雨,田媛,崔宝玉. 工业大麻叶中大麻二酚含量分析研究[J]. 黑龙江科学,2018,9(01):61-63.
[2]王丹,赵明,时志春,李军,刘祥忠,张树军. 不同品种工业大麻中大麻二酚含量分析[J]. 齐齐哈尔大学学报(自然科学版),2019,35(04):49-51+54.
[3]刘胜贵,马海悦,李智高,付彬彬,孔令羽. HPLC法测定工业大麻花叶中的CBD和THC的含量[J]. 云南化工,2020,47(05):62-64.
[4]吴俊锋,杨晓泉. 酶辅助溶剂法提取火麻叶中大麻二酚工艺条件的优化[J]. 中国酿造,2016,35(04):79-82.
[5]高哲,张志军,李晓君,李会珍. 火麻叶中大麻二酚的热回流法提取工艺研究[J]. 中国油脂,2019,44(03):107-111.