湛江市粤海自来水有限公司 广东湛江
摘要：目的 对比分析水内大肠菌群的检测方法，给现实的检测工作中带来更优异地选取检测方法提供借鉴。方法 选择五十一孔定量纸片法、九十七孔定量纸片法、乳糖蛋白胨发酵法、乳糖胆盐发酵法检测水中里面的大肠菌群。结果131份水样，酶底物法阳性率为73.3%。乳糖蛋白胨发酵阳性率为61.8%。乳糖胆盐发酵阳性率为58.8%。结论 五十一孔定量圆盘法的敏捷度优于多管发酵法，但是它的定量面积较窄，九十七孔定量圆盘法的敏捷度和定量面积要优于多管发酵法。
关键词：酶底物法；多管发酵法；检测水中总大肠菌群；分析讨论
大肠菌群是一类革兰氏阴性杆菌，能在37℃下发酵乳糖、出酸出气、需氧兼性厌氧菌24小时，可在自然条件下的粪便污染水和营养水中检查出来。评价水质是非常重要的。该指标具有宽广的卫生学含义。检查水中大肠菌群的办法有酶底物法、多管发酵法以及滤膜法，当中酶底物法分成五十一孔定量圆盘法以及九十七孔定量圆盘法，多管发酵法可以分成乳糖蛋白胨发酵法方法以及乳糖胆盐发酵法。酶底物法操作容易，不需要确认证明，可在24小时内得出水样阳性结轮，但本金相比较要高。多管发酵法的普及率高，但是本金低，但水样的阳性结论应在72小时内上报。尤其是乳糖蛋白胨的发酵方法，不仅要验证实验，还要转种伊蓝平板以及染色镜检。
一、物料及方法
1.1样本源头
鉴于检测结果更有代表性，本次取样样品均无消毒剂，水样为湛江市南三镇自制井水式供水，包含工厂用、居民用水和末端用水。根据无菌条例，在灭菌玻璃瓶中采集样品，在4摄氏度-8摄氏度培养箱中培养4h后固化。送入实验室进行检测。
1.2仪器、设备及试剂
BG-270隔水式恒温培养箱、程控定量封口机PQ封口机；科立得酶底物培养基础、100毫升硫代硫酸钠无菌瓶、五十一孔定量盘，九十七孔定量盘，阳性标准比色板；乳糖蛋白胨培养基单份，双浓缩乳糖蛋白胨培养基、伊红美蓝琼脂平板；单乳糖胆盐培养基、双浓缩乳糖胆盐培养基、亮绿色乳糖胆盐培养基[1]。
1.3检测办法
1.3.1采用15管乳糖-蛋白胨发酵法
将10mL水样提取到10mL双浓缩乳糖-蛋白胨发酵管内，在10mL单乳糖-蛋白胨发酵管中提1mL水样，在10mL单乳糖-蛋白胨发酵管中接种0.1mL水样，接种各稀释液，将产酸产气的发酵管置于36.5℃的伊红美蓝平板上培育24小时，用革兰氏染色显微镜检查疑似菌落，用乳糖蛋白胨溶液确认满足特点的菌落，按照阳性管数计算MPN值，以MPN/100ml上报结论。
1.3.2 15试管乳糖胆盐发酵法
将10毫升水样放在10毫升双浓乳糖胆盐发酵管中，1ml样品放入10ml单乳糖胆盐发酵管内，0.1ml样品放入10ml单乳糖胆盐发酵管内，每一个稀释接种5管，36.5摄氏度下养育24小时。将一环培养基接种于鲜绿色乳糖胆盐培养基中48h，若产气量测定为阳性，则按阳性管数表计算MPN值，以MPN/100mL上报结论。
1.3.3 五十一孔或九十七孔定量盘法
无菌瓶内提取100ml水样，与1份酶底物培养基充分混合，直至溶解，全部倒进51孔或97孔无菌定量盘中，除泡后用程控定量封口机将口密封，在36.5摄氏度的条件下培养24小时[2]。在可见光下数出51孔或97孔的黄色孔的数目，颜色与阳性对照品相同，或颜色比阳性平板深，大肠菌群是+性。按照+孔数，查询MPN表值，并以MPN/100ml上报结论。
1.4结果显示
51孔定量板和97孔定量盘酶底物法的所有气孔都没有出现黄色，大肠菌群没有检测出来；乳糖蛋白胨发酵和乳糖胆盐发酵都是阴性时，大肠菌群检测报告为不合格。
1.5计算分析
采用excel2007和SPSS17.0对数据开展计算分析，经
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检验，差异有统计学含义。
二、结论
（1）采取51孔定量圆盘法、乳糖蛋白胨发酵法和乳糖胆盐发酵法检查73个水样，当中出厂水48个，末梢水25个。51孔定量圆盘法的效率要比乳糖蛋白胨发酵法和乳糖胆盐发酵法的效率高，但定量范围比较窄。
（2）采用酶底物法、乳糖蛋白胨发酵法和乳糖胆盐发酵法对131份水样进行检测，并对结果开展分析。酶底物法的检出率为73.3%。乳糖蛋白胨发酵的检出率为61.8%。乳糖胆盐发酵检出率为58.5%。
（3）51孔定量圆盘法随机检查水样73个，检出率为74.0%。结果比最大检出限度超出了200.5MPN/100ml共检测36个样品；用97孔定量盘法检查剩余58个水样，检出率为72.4%，仅有10个样品超出最大检出2419.6MPN/100ml。
三、探讨
经过对水中大肠菌群检查结论的对比，酶底物法最为敏感，第二种就是乳糖蛋白胨发酵法，最后就是乳糖胆盐发酵法，和某些报道的内容讲述一致。对酶底物法和乳糖胆盐发酵法检查的131份水样的检出效率开展讨论。结果有一些区别，乳糖胆盐培养皿内胆盐对大肠杆菌生长的抑制可能是出现检出效率低的影响因素。酶底物法和多管发酵法都使用MPN法。MPN法是利用概率论估计细菌浓度的一种间接计数办法[3]。计算出的细菌数目不是真实的菌落数目。真实的菌落数目在95%置信区间内任何一点的实际菌落数越大，估计结果就越正确。简单的来说，管孔数量越多，它的正确率就越高。从外观上辨别采集的水样污染程度并不容易。所以，在检查作业中一般很难把控样品的稀释程度，一旦检查的办法的定量范围较为宽广，就可以杜绝样品稀释的影响[4]。
多管发酵样品的接种量是55.5ml，15根检测管里面一共有3个稀释浓度。MPN值表有216种结论，最大的检出限是1600mPN/100mL；51孔定量纸片法样品的接受量是100mL，有51个检测孔，MPN值表里有52种结论，最大的检出限度是200.5mPN/100mL；97孔定量盘法的接受量是100mL，一共有97个检测孔，MPN值表有2352种结论，最大的检测值将到2419.6MPN/100mL，国标方法中所列出来的51孔定量盘法的敏捷度和正确率都很高，但是它的定量区域要比较多管发酵法窄一些，97孔定量圆盘法把这一种缺点补足了，因此，它的定量区域、敏捷度和正确均优于多管发酵法。
结语：综上所述，饮用水和饮用天然矿物质水中大肠菌群检测的国家准则办法有酶底物法、乳糖胆盐发酵法、乳糖蛋白胨发酵法以及膜过滤法。以上的方法检测水中大肠菌群，但饮用水、饮用天然矿泉水等国家标准方法不一样，肯定导致相同的试验室储存的介质种类过多，第一个问题是增加了采购成本，第二个问题是容易失效，带来资源浪费。是否可以改变水质检测方法的可用性，使实验室中大肠菌群的检验办法更具一致性和比较性。考虑到大肠菌群检验伴法的资本、简便性、敏捷度、正确率以及定量区域，推荐采用乳糖蛋白胨发酵法和97孔定量圆盘法当成水中大肠菌群检验的国家标准。
参考文献：
[1]楼小平，林增飞.多管发酵法和酶底物法检测总大肠菌群的结果差异性[J].净水技术，2020，39（06）：14-17+37.
[2]李娜.酶底物法与多管发酵法在水中总大肠菌群测定中的应用价值比较[J].河南医学研究，2019，28（09）：1622-1623.
[3]邓永宏，毛伟.酶底物法和多管发酵法检测水中大肠菌群的比较[J].预防医学情报杂志，2016，32（03）：254-257.
[4]陈艳宏，马健，权玉玲.2种试剂的酶底物法和多管发酵法检测水中总大肠菌群的比较研究[J].中国卫生检验杂志，2014，24（22）：3257-3258+3261.