杨力 李妹燕 蒋柳艳
右江民族医学院附属医院 533000
摘要：目的：探究血清AFP（甲胎蛋白）及外体（exosome）RNA浓度对胎盘植入的诊断意义，明确其临床诊断价值。方法：收集2018年1月至2019年12月于我院行剖宫产分娩的凶险性前置胎盘孕妇100例（其中按有无胎盘植入分为胎盘植入组39例及非胎盘植入组61例）以及同期行剖宫产的既往有剖宫产史、此次妊娠胎盘位置正常的孕妇（对照组）60例的血液标本，比较3组产妇血清exosomal RNA和AFP水平。结果：非植入组与对照组孕妇血清exosomal RNA和AFP水平无明显差异（P＞0.05）；植入组孕妇血清exosomal RNA和AFP水平则显著高于非植入组和对照组（P＜0.05），差异有统计学意义。结论：血清exosomal RNA和AFP水平在产前单胎孕妇产前胎盘植入诊断中意义显著，具有较高的临床应用价值。
关键词：甲胎蛋白；外体RNA；孕妇；前置胎盘
剖宫产史、前置胎盘等诸多因素引发的异常胎盘种植即胎盘植入，胎盘位置异常、高龄产妇、辅助生殖技术受孕以及有剖宫产史的孕妇均为胎盘植入的高危人群。胎盘植入导致在终止妊娠过程中，胎盘只能部分剥离或不能自行剥离，进而造成邻近组织器官如肠道、泌尿系等损伤，产科大出血，甚至无法彻底止血、失血性休克、弥漫性血管内凝血引起死亡等严重不良结局。在此背景下，若能够在妊娠期对胎盘植入进行早期诊断，积极进行相关干预，做好术前准备，可有效改善母婴结局，降低孕产妇产后出血发生率及死亡率。
1.资料与方法
1.1基本资料
收集2018年1月至2019年12月于我院行剖宫产分娩的凶险性前置胎盘孕妇100例（其中按有无胎盘植入分为胎盘植入组39例及非胎盘植入组61例）以及同期行剖宫产的既往有剖宫产史、此次妊娠胎盘位置正常的孕妇（对照组）60例。植入组、非植入组及对照组孕妇平均年龄分别为（30.26±1.86）岁、（31.02±1.66）岁、（30.97±1.95）岁，平均孕周（36.39±0.52）周、（36.50±0.61）周、（36.67±0.55）周，剖宫产次（1.22±0.39）次、（1.19±0.37）次、（1.25±0.41）次，3组产妇上述资料差异无统计学意义（P＞0.05），可进行对比。
1.2方法
（1）3组孕妇入院后休息30min，于安静状态下抽取肘外周静脉血6ml置于未加抗凝剂的生化管中,室温静止30min后，4℃离心机3000×g离心15min,留取血清标本,置于-80℃冰箱冻存待用。
（2）AFP的测定采用甲胎蛋白电化学发光检测试剂盒,利用双抗体夹心法原理。10ul标本、生物素化的单克降AFP特异抗体和钉(Ru)标记的单克隆AFP特异抗体混匀,形成夹心复合物；加入链霉亲和素包被的微粒6.5ul进行卵育,卵育时间10min,将上述所形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上；通过光电倍增器检测结果由机器自动通过2点校正的定标曲线计算而得到[1]。
（3） 将血清于4℃离心机3000g离心15min,去除残留细胞及细胞碎片，转移上清至去RNA酶的EP管中；采用Exoquick Exosome试剂盒提取血清exosome,具体操作依照说明书进行；取500ul血清,加入120ul Exoquick试剂,充分混匀；4℃下静置30min,1500×g离心30min,弃去上清,再次1500×g离心5min弃去上清,所得到的沉淀即为exosome。
（4）按照 Seramir Exosome RNA提取试剂盒操作说明进行操作：向所得到的exosome沉淀中加入350ul的LYSIS Buffer,涡旋震荡15秒，室温静置5分钟使其完全溶解，加入200ul无水乙醇,涡旋10秒，组装吸附柱和收集管，将上述液体全部转移至装入吸附柱的收集管中，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中，向吸附柱中加入400ul的WASHBuffer， 13000rpm离心1分钟,共洗涤2次，倒掉收集管中的废液, 13000rpm离心2分钟以便晾干，将吸附柱置于一个新的的1.5ml无RNase的离心管中,加入30ul ELUTION Buffer，2000rpm离心2分钟，增加转输至13000rpm离心1分钟，最终每500ul血清来源的exosome可得到约30-40ul RNA溶解液,然后采用Gen5酶标对3组RNA进行酶浓度的测定[2]。
1.3观察指标
测定3组孕妇血清exosomal RNA和AFP水平。
1.4统计学方法
采用新版SPSS23.0对收集的数据加以分析，当P＜0.05时，提示数据间的对比存在意义。
2.结果
非植入组与对照组孕妇血清exosomal RNA和AFP水平无明显差异（t＝0.5722、1.4009，P＝0.5683、0.1639）；植入组孕妇血清exosomal RNA和AFP水平则显著高于非植入组和对照组（t＝11.3436、9.5871、23.2749、24.3488，P＝0.0000、0.0000、0.0000、0.0000），差异有统计学意义，见表1。
.png)
3.讨论
近年来虽然人们对胎盘植入诊断的产前检查越来越重视，但仍有将近一半的胎盘植入孕妇不能在分娩前得到明确诊断，以至于不能在分娩阶段做好充分准备，易出现严重并发症。现阶段对于胎盘植入的诊断检查主要是借助超声、MRI等影像学及一些血清生化学检查方法，而最常用的是超声检查。而对凶险性前置胎盘合并胎盘植入孕妇的早期诊断，还存在一定的难度。同时影像学检查仍缺乏统一的诊断标准，非常容易受到多种因素的影响，包括胎盘植入至子宫的位置及深度（如胎盘位于子宫后壁时，受胎先露的影响超声很难观察清楚）、检查的时机、检查者的经验等，诊断的准确度有待提高。目前已知的一些检测胎盘植入的血清生化指标如血清游离胎儿DNA、游离胎盘mRNA及肌酸激酶（CK）等，其特异性并不高。
AFP与胎盘绒毛膜有着一定的相关性，是一种胎儿来源的糖蛋白，若绒毛膜屏障受损、功能发生异常，则AFP浓度会随之增加。有研究指出[3]，AFP水平的升高使得孕产妇不良妊娠结局的发生率上升，如胎盘不良、新生儿窒息、子痫前期等。exosomal在羊水、腹水、乳汁、尿液、外周血中均可检出，是细胞的正常代谢产物，在妊娠期间，胎盘可释放exosoml到母体循环，参与妊娠期间母胎界面的免疫调节、子宫螺旋动脉的重塑和胎盘屏障的形成等重要的调控，exosomal RNA属于小分子miRNA。有学者指出[4]，它能够促进血管内皮的生长、肿瘤细胞的迁移，但其与胎盘植入关系的报道较少，尚无明确机制；而我区尚无相关报道。本研究中，非植入组与对照组孕妇血清exosomal RNA和AFP水平无明显差异（P＞0.05）；植入组孕妇血清exosomal RNA和AFP水平则显著高于非植入组和对照组（P＜0.05），差异有统计学意义。
综上所述，本研究结果显示血清exosomal RNA和AFP水平在产前单胎孕妇产前胎盘植入诊断中意义显著，在未来的诊断检查中应该具有较高的临床应用价值。但因受样本量小的影响，本研究结论仍需进一步探讨研究。
参考文献：
[1]周冰峰,侯敬,付久园,等.彩色多普勒超声联合血清学标志物对胎盘植入的诊断价值[J].国际检验医学杂志,2020,041(011):1326-1328,1332.
[2]吴华臣,李丽华,刘燕君,等.彩色多普勒超声检查联合AFP、CK监测对产前胎盘植入诊断的价值研究[J].临床和实验医学杂志,2018,17(24):101-104.
[3]赵雅堃.血清外体RNA及AFP对胎盘植入的临床诊断价值[D].2017.
[4]朱晓童,陈晓,钱天烨,等.孕中,晚期母体血清甲胎蛋白测定联合影像学对前置胎盘合并胎盘植入诊断价值探讨[J].中国计划生育学杂志,2020, 028(004):519-523.