真菌临床检验技术之我见

发表时间:2021/6/16   来源:《医师在线》2021年11期   作者:王勇
[导读] 真菌感染作为一种新型临床常见疾病,近年来随着医学研究力度的不断增加
        王勇
        广元市精神卫生中心   四川省广元市    628000
        真菌感染作为一种新型临床常见疾病,近年来随着医学研究力度的不断增加,新型治疗方法逐渐被研制出来,其中最具代表性的治疗方式就在于真菌治疗。但是,随着真菌治疗使用的日益广泛与普及,因为真菌感染的疾病日益增多,而这一现象也逐渐引起更多人的关注。在临床上真菌感染疾病的治疗方式比较单一、有效药物缺失,为致力于提高疾病治愈率与降低死亡率,就需要做到尽早诊断与及时检出。而最为重要的一点,在医院临床检验中真菌感染治疗是最为薄弱的环节,且重视程度不够,专业从事人员又比较少,由此极易造成真菌感染疾病临床治疗方式不完善的情况,为此人们需要高度重视真菌感染疾病的临床治疗工作。
1临床致病真菌分类
        基于形态学可将临床致病真菌分为三大类,即酵母菌、霉菌、双向型真菌。这些真菌基于致病部位又可以分为两种,即浅部真菌、深部真菌。而霉菌是造成浅部感染的主要菌种,酵母菌、双向型真菌极易造成深部真菌,也包括曲霉菌、青霉菌、毛霉菌等少数霉菌。
2我国真菌感染疾病的临床治疗技术现状
        当前,培养法、非培养法是两种比较常用的真菌检验方法,主要涉及形态学观察、分子生物学测试、分子生物学检验等。在相关生化、分子生物学检验等方面的研究与真菌临床检验的一般方法、国外都取得很大进展,简短综述存在数篇。
        在各种因素的限制下促使国内无法深入的研究临床真菌检验方法学,诸如工作条件、研究条件、人员素质等 ,但是对相关领域的探索依然在继续。值得一提的是,国内研究完全按照我国当前的临床检验条件,因此能够更有针对性的开展工作,促使所取得的结果也极具借鉴价值。
3临床治疗方式
        3.1形态学观察
        这种方法中主要包括两种最为经典的检验方法,即直接镜检法、培养法。其中,直接镜检法也涉及两种方法,即湿片镜检、干片镜检,这是一种简易、快速有效的方法,能够快速的诊断与监测一些危重患者的深部真菌病,但是常规检查法的检出率不高,无法顺利的开展诊断工作,为有效解决方法学上的不足与缺陷和提高真菌检出率,有必要采用多次制片与重复检测的方法。
        培养学也分为大培养学、小培养学,相对比较简单、易于普及,能够提供真菌的耐药特征,这是当前一种应用最广的方法。大培养适用于培养无菌部位的体液真菌,诸如血液、脑脊液、胸腹水、骨髓等,液体沙氏培养基、脑心浸液培养基等是最主要的培养基。小培养基适用于培养各种部位的各类型标准,诸如脓液、组织、粪便、毛发,培养基主要包括沙氏平斜面、真菌分离的蔡氏培养基、马铃薯葡萄糖培养基。培养法的优点主要表现出来结果准确可靠、阳性检出率高,但是缺点在于操作比较繁琐、耗时较长,无法快速的做出诊断。在培养法中根据不同真菌代谢过程中所产生的不同代谢物、特异性酶可以制作出相应的成品显色试剂盒 ,诸如YBC卡、CANDIFAST试剂盒、MicroScan鉴定板,在此基础上通过鉴定培养能够得到真菌种类。站在这个角度上,可以在生化检测法的范畴中纳入培养法。


        通过有机结合培养法和标本片植被,可以用一滴培养基在无菌载玻片上做小培养,一旦发现样本培养基中出现菌丝或孢子,需要马上进行干燥处理并采用阿拉伯树胶将其固封在盖玻片的四周,如此可将样品标本长时间的保存下来,方便直接开展镜检操作,这属于一种改良的小培养法。通过检测毛发、指甲等处的浅部真菌发现,相比较于采用10%KOH涂片镜检法,采用沙堡氏琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、玉米粉葡萄糖琼脂所得到的真菌阳性率明显要高很多。针对那些直接镜检结果为阴性的标本,培养时阳性率依然高达21.08%,因此在临床上也需要谨慎的对待那些直接镜检为阴性的标本。
        3.2生化检测法
        真菌在生产过程中所产生的代谢产物、特异性酶不仅种类繁多而且数量比较多。针对临床真菌感染,采用生化方式直接检测体液中的相关物质含量,有助于尽早发现深部真菌感染,这种方法凭借自身所具有的优点,在市场上具有良好的前景,诸如标准化操作、快捷可靠、系统误差小。在这一方面,我国许多科研工作者进行了许多有益的尝试、探索。
        研究发现,1-3-β-D葡萄糖在所有真菌细胞膜上都存在,而不存在于其他微生物、动物、人体的细胞与细胞外液中,为此在诊断深部真菌感染时可以测试人体体液中的1-3-β-D葡萄糖含量。同时,早期诊断真菌感染的另一种方法就在于测定血清葡聚糖含量,但是这种方法存在一定缺陷,即无法明确感染真菌的种类,而这也是全部生化测定方中所存在的一个共同问题。
        真菌的另一种代谢产物就在于阿拉伯糖醇,其具有D-阿拉伯糖醇、L-阿拉伯糖醇这两种不同的同分异构体形式,这两种形式可以在健康人的血液、尿液中同时存在,但是D-阿拉伯糖醇与感染之间的关系尤为密切。D-阿拉伯糖醇在系统性真菌病患者的血液浓度中比较高,相应的会提高其与L-阿拉伯糖醇的比值。为更好的分析两种形式在动物、人体水平上的比值差异,就可以采用气相色谱-质谱联用技术。
        此外,白色念珠菌患者血浆中含有较多的烯醇酶美,这是临床诊断白色念珠菌感染的一个重要标准。
        3.3分子生物学检测法
        现如今,随着分子生物学的快速发展,其在技术上日益成熟,并迅速的介入到诸多生命科学领域中,诸如医学、药学与微生物学等,对人们的思维方式、科研行为产生很大的影响与改变。在真菌临床检验方面,分子生物学的应用主要涉及两个重要方面,即鉴定真菌菌种(尤其是那些在形态学上很难确定的新种,利用分子生物学能够完全确定)、直接检测人体中真菌感染情况。
        针对不同种类的致病性真菌,采用真菌通用引物rDNA ITS和常规聚合酶链反应(PCR)扩增技术能够进行准确的鉴定,尤其是那些种类繁多、分类学上存在局限性的菌种,通过对比其18S亚基同源序列,能够对其种群类别做出准确地归属划分。
        总之,随着生物学的发展与医学水平的不断提高,促使各类器官移植手术获得有效开展,在临床上免疫抑制剂也获得广泛应用,但是临床上的各种不合理医疗、过度医疗行为导致致病性真菌感染的情况日益加重,因为真菌感染所造成的疾病逐渐从之前的从属地位逐渐上升到许多领域的主要矛盾、致死因素,而现有的临床检验方式水平较低,导致很难及时的发现真菌感染和积极的开展对症治疗,这种不平衡状态也很难提高真菌感染性疾病的治疗成功率。
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