杨玉昕
北京中医药大学附属护国寺中医医院，北京 100035
摘要：目的 :抽查鉴别药房蝉蜕中药的真伪。方法 :从来源、性状、显微、理化等方面探讨鉴定标准 ,查阅资料验证真伪。结果 :为临床用药提供安全保障，为医院药材合理应用提供依据。
临床药师在检查药品质量时，发现药房近期进货的蝉蜕附着有灰白色不明物见图1，灰白色不明物分为两种，第一种不规则散在蝉蜕各个地方，另一种在蝉蜕腹部。为保障临床用药提供安全保障，药师从来源、性状、显微、理化等方面对该批蝉蜕进行鉴定。
1 方法与结果
1.1性状来源鉴定
药典规定的性状来源：为蝉科昆虫黑蚱的若虫羽化时脱落的皮壳。商品习称“土蝉衣”。夏、秋二季收集,除去泥沙,晒干。本品略呈椭圆形而弯曲,长约3.5cm,宽约2cm,表面黄棕色,半透明有光泽。头部有丝状触角1对,多已断落,复眼突出。额部先端突出,口吻发达,上唇宽短,下唇伸长成管状。胸部背面呈十字形裂开,裂口向内卷曲,脊背旁具小翅2对;腹面有足3对,被黄棕色细毛。腹部钝圆,9节，环节双线，黑色与棕褐色相间。体轻,中空,易碎。无臭，气微，味淡。以体轻、完整、色黄亮者为佳。本品性状特点见图2。本品与药典记载存在出入：第一，蝉蜕偏窄，大多数偏短小。第二，蝉蜕整体颜色偏浅，土蝉衣颜色应该更偏深，偏黑棕一点。第三，本品质较以往蝉蜕硬、韧，较不易破碎。
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1.1.1前足特征
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1.1.2蝉蜕和中国僚蝉蝉蜕性状对比
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可以看出中国僚蝉偏窄，偏短小，整体颜色偏浅，且具有具白色蜡粉。本品很有可能本品为中国僚蝉很可能为中国僚蝉，但到底是不是还需进一步理化或者光谱鉴定分析。
1.2理化鉴别
1.2.1用酸浸泡本品灰白色不明物
本品第一种灰白色物不溶于酸，第二种灰白色物有疏水性亦不溶于酸
1.2.2用酒精浸泡本品灰白色不明物
浸泡一小时后，第二种灰白色物质溶于乙醇，但是不溶于水。虫蜡指由昆虫所产生的蜡。白色或淡黄色固体；性质稳定，不溶于水，易溶于苯、汽油等有机溶剂。第二种灰白色不明物有可能是蜡类物质。
1.3显微鉴别
在显微镜下观察本品灰白色不明物发现本品第一种白色不明物与白僵蚕中的菌丝体相似，见图4。白僵菌菌落为白色粉状物，产品为白色或灰白色粉状物。菌体遇到较高的温度自然死亡而失效。其杀虫有效物质是白僵菌的活孢子。孢子接触害虫后，在适宜的温度条件下萌发，生长菌丝侵入虫体内，产生大量菌丝和分泌物，使害虫生病，约经4－5天后死亡。死亡的虫体白色僵硬，体表长满菌丝及白色粉状孢子。孢子可借风、昆虫等继续扩散，侵染其他害虫。另查阅资料我们得知，出土后的若虫（知了龟）以及羽化后的成虫天敌较多，如癞蛤蟆、蛇、鼠类、刺猬、野猫、麻雀和螳螂等都喜食若虫（知了龟），白僵菌、绿僵菌和虫生藻菌（蝉花）等微生物也寄生危害。另外，水灾和农药化肥等的污染对若虫（知了龟）或蝉的危害也较大，养殖时应加以注意和保护。所以很有可能本品第一种灰白色物质是白僵菌。
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1.4 红外光谱
红外光谱结果见图5。
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红框处是酰胺II带的峰非常明显，此峰为蛋白质峰。有此峰原因第一可能为基源问题；第二可能加了动物胶或混合胶质。
糖区的峰像糊精的峰，原因第一可能为基源问题，第二可能是加了糊精类物质。
蝉蜕通常刷糖水、刷胶造假增重。蝉蜕刷糖水、加胶可以增加光亮度、不易破碎，此批蝉蜕质偏硬、韧第一有可能是基源问题，第二有可能刷了糖水、加胶。
2 结论
此批蝉蜕所带的白色物质，从性状上分可分为两种：一种为类虫蜡的成分可能和基源有关。一种高度怀疑为白僵菌，若想进一步确定，需要做进一步的理化鉴定、真菌培养等
此批蝉蜕通过红外光谱分析，排除基源问题的话，很有可能刷了动物胶或混合胶类，也可能添加了糊精类成分。
3 思考与讨论
3.1 基源对治疗作用的影响
蝉蜕主要含有甲壳质、蛋白质、氨基酸以及人体所需的多种微量元素。不同基源的蝉蜕所含成分比例必有所不同。例如蝉蜕中含有微量元素，其含量与品种有关 。经过对成分进行分析发现微量元素中 Al、P、Ca、Mg 的含量对抗惊厥的作用有影响。不同基源的蝉蜕抗惊厥效果不同，中国僚蝉具体效果大小还需要进一步研究。又如蝉蜕中含有大量的氨基酸类成分 , 分为游离氨基酸和水解氨基酸，12 种游离氨基 酸 ,17 种水解氨基酸。其中丙氨酸、天冬氨酸、脯氨酸 含量较高;丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酸、 和氨基丁酸次之;异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸缬氨酸、 鸟氨酸、蛋氨酸含量较低。不同基源氨基酸种类、比例绝对有所不同，从而影响其治疗效果。
3.2 本品被白僵菌感染但是没有菌丝的原因
第一，温湿度不够，当粉状孢子侵犯虫体后，由于温湿度不符合白僵菌发芽、菌丝生长所需要的环境，所以虽感染但未致死。第二，菌丝向虫体内长，当昆虫组织器官大部分被破坏，菌丝成束穿出体表，形成气生菌丝。第三，有可能有菌丝，但是在采收加工过程中，水洗干燥过程中，表面菌丝遭到破环。
3.3 感染白僵菌对药材影响
3.3.1对有效成分的影响
白僵菌分生孢子在寄主表皮或气孔、消化道上，遇适宜条件开始萌发，出生芽管。同时产生脂肪酶、蛋白酶、几丁质酶溶解昆虫的表皮，由芽管入侵虫体，在虫体内生长繁殖，消耗寄主体内养分，形成大量菌丝和孢子，布满虫体全身。同时产生各种毒素，如白僵菌素，纤细素和卵孢霉素等。白僵菌素为含N-甲基氨基酸的环状肽。白僵菌素为针状无色晶体，加醋酸铅于水溶液中可产生絮状白色沉淀，对茚三酮显正反应。所以对药材可能存在的影响为：药材甲壳素（几丁质）、蛋白质有效成分可能降低和白僵菌素、卵孢霉素的产生。
3.3.2 药理作用可能存在的影响
现代药理研究表明蝉蜕抗惊厥、镇静止痛、镇咳、祛痰、平喘、解痉、抗炎、 抗氧化、抗肿瘤、抗凝、对心脑血管保护等作用.第一，白僵菌素对支气管哮喘模型小鼠的气道炎症有抑制作用,能减少炎症因子的表达,并可能促进炎症细胞凋亡。第二，白僵菌素与酮康唑联用对治疗深部真菌感染疾病具有协同作用,不仅可以提高酮康唑治疗深部真菌感染的疗效,而且可以降低由于大剂量使用酮康唑而引起的肝毒性。第三，白僵菌素对三硝基苯磺酸导致的小鼠结肠炎具有显著的改善作用,且其改善效果优于地塞米松。第四，卵孢霉素具有广谱的体外抗菌、抗氧化和细胞毒活性。所以在某种程度上，被白僵菌感染的蝉蜕可能增加其镇咳平喘、抗真菌、抗炎、抗氧化和细胞毒活性。但是，甲壳素具有抗菌抗感染、抗病毒、降低血糖、调节免疫、抵抗肿瘤和辐射、护肝解毒等多种药理作用。蝉蜕蛋白具有抗氧化作用，同时蝉蜕可能通过调节氨基酸递质含量发挥抗惊厥作用。由于被白僵菌感染的蝉蜕这些有效成分会减少，所以这方面的治疗作用有可能会减弱。
3.3.3 白僵菌的毒副作用
有研究表明用50亿/g活孢子制剂大白鼠腹腔注射和灌胃LD50分别为0.6±0.1g/kg及10.0g/kg，而用纯孢子腹腔注射大白鼠LD50为128士12mg/kg，为低毒类微生物农药，对人、畜无致病作用，属弱的变态反应源，无“三致”问题。该制剂对人畜无毒，对果树安全，但对蚕有害。人体接触过多，有时会产生过敏性反应，出现低烧，皮肤刺痒等。也有研究表明对猪肠上皮细胞有细胞毒性，在增殖细胞中，用10μm 白僵菌素孵育24h，完全破坏细胞活性。还有研究表明卵孢霉素对肾、脾细胞毒性，用20μm到200μm的不同浓度的卵孢霉素处理白变种实验小鼠。暴露24小时后，进行组织病理学观察，卵孢菌素诱导的活性氧生成水平升高，丙二醛水平升高，线粒体膜电位（MMP）丧失，谷胱甘肽羟化酶产生量呈剂量依赖性。氧化应激相关基因（SOD1和CAT）表达显著抑制，凋亡或氧化应激中的mRNA表达水平增加。
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