黄华 谢文东 孙娅娜 杜洪淼 谷雨
北京市产品质量监督检验院，北京 101300
摘要：建立了一种全新的以QuEChERS法为样品前处理技术结合UPLC-TQS法快速测定动物源性食品多种兽药残留的方法。样品经甲醇-乙腈混合溶液提取并通过DISQUETM净化管净化，上清液经正己烷除去脂肪、样品浓缩后用色谱柱进行分离，以甲醇5mmol/L醋酸铵含0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，多反应监测(MRM)模式检测，外标法定量。结果表明：目标物在1~50μg/kg的空白添加浓度范围内均有良好线性关系，相关系数r≥0.99；样品中多种药物的检出限(LOD)均为0.5μg/kg，定量限(LQD)均为1.0μg/kg；在5~20μg/kg的添加水平范围内平均回收率为75.8%~93.2%，(RSD)为3.1%~13.2%。该方法具备快速、简便、准确性高、用性强等特点，适合动物源性食品中多类药物残留的定性定量检测。
关键词：QuEChERS；UPLC-TQS；苯并咪唑；大环内酯；青霉素
引言
随着人们对动物源食品由需求型向质量型的转变，动物源食品中的兽药残留已逐渐成为全世界关注的一个焦点。由于养殖人员对科学知识的缺乏以及一味地追求经济利益，致使滥用兽药现象在当前畜牧业中普遍存在。滥用兽药极易造成动物源食品中有害物质的残留，这不仅对人体健康造成直接危害，而且对畜牧业的发展和生态环境也造成极大危害。
由于许多药物在化学性质上有很大的差别，目前现有的药物残留分析方法一般是按照化学结构类似的原则，来开发同种族药物的相应检测方法，例如本文同时针对多类药物的检测分析方法较少，随着超高效液相色谱串联质谱技术的快速发展，动物源性食品中兽药多残留检测范围已逐步从单一类别发展为多种不同类别兽药的同时定性与定量分析。
本文建立了一种全新的以QuEChERS为样品前处理技术与超高效液相色谱法-串联质谱法(UPLC-MS/MS)有机结合，快速测定动物源性食品中多类兽药残留的检测方法。本方法具备快速、简便、准确性高及通用性强等特点，适合对动物源性食品中多类药物残留的定性定量检测。对动物源性食品中兽药残留的检测与监控具有很大的意义。
1 实验部分
1.1 仪器和试剂
ACQUITY UPLC—TQS检测器质谱联用仪（美国waters公司）；3-18K型高速冷冻离心机（德国SIGMA公司）；OA-SYSTM型氮吹仪；CQ25-12D型超声波清洗器；Milli-Q Academic超纯水系统（美国Millipore公司）；DISQUE TM萃取管（50mL，内含4g硫酸镁、1g氯化钠、1.5g柠檬酸钠）（美国waters公司）。
乙腈、甲醇、甲酸、乙酸铵均为HPLC级；正己烷、乙酸；分析纯。
标准品：克林霉素、替米考星、青霉素V、泰勒菌素、氨苄西林、双氯青霉素均购自Dr.Ehrenstorfer公司。
1.2 标准工作液的配制
将各标准品用甲醇配制成质量浓度为1μg/mL的标准储备液，并根据需要用甲醇稀释成适当质量浓度的混合标准工作溶液，于棕色储存瓶中保存。
1.3 UPLC-TQS条件
1.3.1 超高效液相色谱条件色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 (1.7μm，2.1×100mm)；柱温：40oC；样品室温度：10 oC；进样体积：10μL；流速：0.3mL/min；流动相；甲醇(A)和0.1%甲酸-5mmol/L乙酸铵水溶液(B)；梯度洗脱程序：0~14min，10%A~95%A；14~17min，95%A~95%A；17~18min，95%A~10%A；18~20min，10%A~95%A。
1.3.2 质谱条件:电喷雾离子源(ESI)，正离子模式；毛细管电压：3.3kv;离子源温度：
150 oC；锥孔反吹气流量：150L/h；脱溶剂气温度：400 oC；脱溶剂气流量：900L/h；多反应监测(MRM)模式。
1.4 样品前处理
准确称取鸡肉组织试样2.0g，加入DISQUE TM萃取管中，加入20mL甲醇-乙腈（2:1），涡旋使之充分混合，超生提取10min，4 oC下10000r/min离心10min，移取上清液10mL于离心管中，加入10mL正己烷，涡旋振荡混匀，4 oC下10000r/min离心10min，弃除正己烷层，下层提取液氮气流吹干，加入1mL乙腈—乙酸铵（1:9）溶解残渣，滤膜过滤至进样瓶中，测定分析。
2 结果与讨论
2.1 UPLC-TQS条件的优化
实验发现,在乙酸铵中加入0.1%甲酸来控制流动相的pH，可以在保持较好分离度的前提下获得理想的色谱峰、减小加合峰、增大分子离子峰的峰强度。因此本文0.1%甲酸乙酸铵-甲醇作为流动相。6种药物质谱参数见表1。
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2.2 前处理条件的优化
本实验以回收率为指标分别考察了甲醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯等单一溶剂对鸡肉中6
种药的提取效率。结果表明，甲醇、乙腈作为提取溶剂提取率高于其他试剂。由于各种药物的性质不同，为了兼顾多种药物同时检测，分别考察了不同比例的甲醇、乙腈混合溶剂，最终选择甲醇乙腈(2:1) 混合溶剂，提取效果最佳。
2.3 线性关系和检出限
分别准确移取适量的6种药物混合标准工作溶液，添加到2.0g空白鸡肉中，按1.4的前处理方法，1~50μg/kg范围内各组分峰面积对相应的添加含量之比呈线性关系，相关系数的范围为0.9841~0.9969，结果见表2。
采用在空白组织中添加目标组分的方法，依据特征离子色谱峰的信噪比(S/N)大于3为检出限(LOD)，(S/N)大于10为定量限(LQD)，得到6种药物的LOD为0.5μg/kg，LQD为1μg/kg。
2.4 回收率与精密度
取5、10、20μg/kg的阳性添加试样，按照1.4的步骤操作，添加6水平，计算回收和、精密度，回收率为75.8%~93.2%，相对标准偏差为3.1%~13.2%，结果见表2。
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3 结论
本文将在蔬菜水果农药残留分析中采用的 样品处理技术QuEChERS引入到鸡肉中兽药多残留的分析中，通过优化样品预处理及色谱 质谱测定条件，建立了一次同时提取，UPLC-TQS测定鸡肉肉中37种兽药的方法。该方法样品前处理成本低廉、简便快速、灵敏可靠，适合对鸡肉中磺胺类、喹诺酮类、苯并咪唑类、四环素类、大环内酯类和青霉素类药物残留进行确证和定量测定。
参考文献：
[1]StolkerAAM,ZuidemaT,NielenMWF.TrACTrendsAnal[J].Chem.,2007,26(10):967-979
[2]SunL,ZhangL,ZhuYL,etal.Chinese Journal of Chromatography(孙雷,张骊,朱永林,等.色谱),2008,26(6):706
[3]LiuJj,SheYX,LiuHB,etal.Chinese Journal of Analysis Laboratory(刘佳佳,佘永新,刘洪斌,等.分析化学实验室),2011,30(2):9
[4]YinJY,XieDH,ChenJ,etal.Journal of Chinese Mass SpectrometrySociety(殷居易,谢东华,陈杰,等.质谱学报),2009,30(4):193
[5]DanaherM,DeRuyckH,CrooksSRH,etal.J.Chromatogr.B,2007,845(1):1
[6]SminkBE,BrandsmaJE,DijkhuizenA,etal.J.Chromatogr.B,2004,811(1):13-20
[7]PangGF,CaoYZ,ZhangJJ,etal.J.Chromatogr.A,2006,1125(1):1
[8]LiFG,SuM,LiXY,etal.Chinese Journal of Chromatography(李锋格,苏敏,李晓岩,等.色谱).2011,29(2):120
[9]GuoDH,DengXJ,ZhaoSZ,etal.Chinese Journal of Analytical Chemistry(郭德华,邓晓军,赵善贞,等.色谱),2010,38(3):318
[10]WangL,LiYQ,WangHB,etal.Chinese Journal of Analytical Chemistry(王炼,黎源倩,王海波,等.色谱),2011,39(2):203