广东中能司法鉴定所 广东清远 511500
摘要：目的：分析法医毒物分析中LC-MS/MS定性分析结果及其判定指标。方法：选择研究于2020年11月-2021年5月间的8种法医毒物，做LC-MS/MS定性结果分析，通过优化色谱和质谱条件，配制不同浓度的血液添加样品和相应浓度的标准品溶液分析定性参数的偏差范围。结果：本次研究发现，8种毒物的检测限、线性范围处于理想水平，线性相关系数较高；准确度、精密度RSD表示，本文所介绍的定性分析结果具有可行性，数据准确度较高。结论：在法医毒物分析中，LC-MS/MS定性分析结果显示毒物离子比率偏差与浓度存在相关性，本文所研究的定性指标评估标准能够满足法医毒物分析的基本要求，值得关注。
关键词：法医毒物；LC-MS/MS；定性分析；偏差范围
前言
法医毒物分析主要针对生物药材中的毒物进行检测，而考虑到生物检材中的复杂性会导致检测结果的可靠性受到影响。现阶段LC-MS/MS（液相色谱—质谱）检测方法作为一种科学检测手段得到广泛应用，在生物样品的定性分析中发挥着重要作用，但是考虑到法医毒物分析的特殊性，在检测过程中更好的确定定性指标则是提高检测质量的关键[1]。现代研究普遍认为，判定指标的设定范围过小可能会导致漏检现象，而指标过大则会造成假阳性问题，所以必须要设定一种更加严格的检测定性标准，这也是本文研究的主要目的。
1.材料与方法
1.1试验仪器与材料
本次研究中使用液相色谱串联质谱仪（生产单位美国ABSCIEX，型号TripleQuad3500），纯水机（生产单位成都优普公司，型号UPT-Ⅰ-10L），电子分析天平（生产单位岛津公司，型号AUW120D）。
本次试验中所使用的药物获取时间段为2020年11月-2021年5月，包括吗啡、舒乐安定、咪达唑仑、安定、氯硝安定、苯巴比妥等，研制成纯度≥99.7%的粉末，由西格玛提供；甲基苯丙胺、氯胺酮的标准为1mg/ml，提高单位为公安部物证鉴定中心；甲醇、乙酰等提供单位为天津一方科技公司；去离子水、甲酸铵等，由美国Sigma公司提供。
1.2色谱条件与质谱条件
通过不同色谱柱分离，分别为色谱柱1：2.1×100mm3.5umColumn；色谱柱2：PlusC182.1×100mm3.5-Micron；流动相为：A20mmol/L乙酸铵和0.1%甲酸缓冲液，B甲醇。
在质谱条件，将各种毒物配置为1混标溶液，经ESI源（电喷雾电离源）检测，毒物在正离子模式做作MRM检测。
1.3配置标准溶液
分别称取准确重量的吗啡、舒乐安定、咪达唑仑、安定、氯硝安定、苯巴比妥配置成1.0mg/mL储备液，在-20℃环境下保存；之后用甲醇稀释的氯胺酮、甲基苯丙胺标准液、咪达唑仑-舒乐安定标准液与安定-氯硝安定混合标准液
1.4精密度与准确度控制
取缺血标本0.5g分别添加上述毒物标准溶液配置成样本之后，每个浓度分别做5次平行试验，计算准确度与回收率情况。一天内分别于早中晚三个时间段各检测一次，连续测量五天，计算日间精密度。
1.5检测限与工作曲线设置
毒品类：取血液样本0.5g，向其中添加适量的氯胺酮、吗啡以及甲基苯丙胺标准液后，使血液中的药物浓度维持在50-500ng/ml范围内，向血压样本中添加内标SKF525A，使浓度维持在20ng/ml，经测量计算氯胺酮、吗啡以及甲基苯丙胺三种物质的回归方程，按照信噪比3:1的标准计算出检测限。
苯二氮䓬类：取血液样本0.5g，添加安定-氯硝安定、舒乐安定-咪达唑仑混合标准液，使血液样本中的咪达唑仑以及舒乐安定的浓度维持在20-200ng/ml，血液中的氯硝安定与安定的浓度维持在10-1000mg/ml内，再添加内标SKF525A，使其浓度维持在20ng/ml，经检测计算出四种物质的回归方案，并根据信噪比3:1的标准计算出检测限数据。
巴比妥类：取血液样本0.5g，添加一定量的苯巴比妥标准品，使血液样本中的苯巴比妥浓度维持在0.5-10.0，并添加内标烯丙异丙巴比妥，使其浓度维持在5.0，并经监测计算苯巴比妥回归方程，根据信噪比3:1的标准计算出苯巴比妥的检测限。
2结果
2.1毒物的检测线以及工作曲线情况
记录本次研究中8种毒物的检测线以及工作曲线情况后，详细资料如表1所示。
表1毒物检测线与工作曲线
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2.2准确度与精密度
本次试验结果显示8种毒物检测的准确度与精密度检测结果良好，证明本文所建立的方法具有满意的准确度，详细资料见表2。
表2精度与准确度
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3讨论
目前在法医毒物司法鉴定中，需要保包含法医可以鉴定的毒物（如化学药品、氯化物）等，并且与人体治疗药物有关的有毒物质也被纳入到法医毒物鉴定中。现阶段很多毒物的代谢物及其生物标记也是法医司法鉴定的重要内容。由此可见，现阶段法医毒物司法鉴定的难度逐渐增大。随着相关技术的发展，关于法医毒物的LC-MS/MS定性分析已经成为快速检测重要组成部分，但是在实际上，LC-MS/MS定性分析结果必须要形成正确的判定指标，并在该指标技术上对毒物进行有效检测这是提高检测结果质量的关键。随着仪器技术的发展，法医毒物监测对仪器的灵敏度提出了更高要求，并且现阶段部分案件的实际情况来看，越来越多的毒物检测依赖液相色谱-质谱检测技术，尤其是在浓度较低的毒物定性中液相色谱-质谱发挥着重要作用[2]。目前法医毒物司法鉴定的内容复杂，司法鉴定中的常见毒物有安眠药、毒品等，这些毒物的定性分析是整个工作的重点，而针对定性判定的内容，则需要合理划分检测的数据范围，避免假阳等问题[3]。因此为了能够适应未来法医毒物LC-MS/MS定性分析要求，需要明确其判定指标。在上述要求的基础上，本文基于LC-MS/MS定性分析的要求在优化色谱与质谱条件的基础上，配置了不同浓度的血样样本以及浓度标准溶液，并确定了工作曲线以及检测限。本文的研究结果显示，8种毒物的检测限与线性范围等均满足质量管理要求，其对应的相关系数满意，提示相关指标具有可行性。同时从准确度与精密度来看，本次试验中8种毒物的准确度与精密度等均处于满意水平，进一步论证本次研究中所始终的方法具有线性关系好、精准度与灵活度高等优点，满足法医司法毒物LC-MS/MS定性分析处理的要求。
综上所述，在法医毒物司法分析鉴定中LC-MS/MS定性分析具有可行性，值得推广。
参考文献
[1]闵涛,刘少丹,辛国斌,等.8种常见药（毒）物LC-MS/MS定性分析的保留时间和离子丰度比[J].法医学杂志,2020,36(2):216-222.
[2]魏娟,姚广哲,欧阳慧子,等.UPLC-Q-TOF-MS/MS法快速定性分析通脉养心丸中的化学成分[J].天津中医药大学学报,2019,38(4):393-399.
[3]邓思珊,刘洪旭,马丽红,等.三叶青叶黄酮类化学成分的UPLC- MS/MS定性分析及HPLC含量测定[J].中国医药导报,2018,15(33):80-84,88.