1.白玲珍 2.通讯作者：邰旭光
呼伦贝尔市精神卫生中心 022150
摘要：抑郁症是常见的精神疾病，目前对该病主要使用抗抑郁药物治疗，同时配合心理治疗。对患者抗抑郁用药治疗期间血药浓度的有效测定能够兼顾患者治疗有效性与安全性，充分依靠药物作用帮助患者改善抑郁症状，提高患者生活质量。本文主要对西酞普兰（citalopram）、米氮平（mirtazapine）、曲唑酮（trazodone）等常用的三种抗抑郁药物进行研究，通过实验方法证实高效液相串联质谱（HPLC-MS/MS）方法可同时测定上述三种药物的血药浓度，实际应用期间具有快速、准确、灵敏度高等优势。
关键词：抗抑郁药物；血药浓度；测定方法；HPLC-MS/MS；血浆
目前临床可使用的抗抑郁药物较多，但是因为患者个体差异以及不同患者用药依从性高低不同，致使部分患者在治疗期间存在耐受性较差、治疗反应不足等问题，影响到患者实际的治疗效果[1]。临床文献报道指出抑郁症患者即使使用相同剂量的药物，但是不同患者药代动力学参数存在差异，不同患者在稳态浓度方面也存在较大差异性[2]。通过同时对不同抗抑郁药物血药浓度的测定，为不同患者的个性化治疗提供依据。本文主要对HPLC-MS/MS同时测定西酞普兰、米氮平、曲唑酮血药浓度试验过程分析如下。
1、资料与方法
1.1材料与试剂
试验仪器：高效液相色谱系统、串联质谱仪、离心机、旋涡混合仪、电子分析天平、移液枪、超纯水仪等。
试剂包括：西酞普兰（纯度99.4%，批号：100885-201802）、米氮平（纯度98.9%，批号：101016-200801）、曲唑酮（纯度≥98.0%，批号018F0429），自制超纯水、20.0%脂肪乳、甲醇、乙腈以及空白人血浆。
1.2方法
1.2.1确定色谱条件
色谱柱为：Kinetex C18（50mm×2.1mm，2.6μm），流动相为0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B），柱温40℃，流速设置为0.4ml/min，进样量2μl。洗脱梯度：0-0.5min。10.0%B；0.5-2.5min，10.0%B-80.0%B；2.5-3min，80.0%B；3-3.2min，80.0%B-10.0%B；3.2-4min，10.0%B；
1.2.2质谱条件
电离模式选择ESI源，选择正离子模式。喷雾电压5500V，雾化温度450℃，气帘气40psi，碰撞气9psi，雾化气与辅助气均为50psi，不同待测物相关参数如下：（1）西酞普兰，母离子325.2m/z，子离子109.0m/z，CE/V为30，DP/V为40，驻留时间40ms；（2）米氮平，母离子266.2m/z，子离子195.1m/z，CE/V为33，DP/V为120，驻留时间40ms；（3）曲唑酮，母离子372.1m/z，子离子176.1m/z，CE/V为31，DP/V为70，驻留时间40ms[3]。
1.2.3配制溶液
配置对照品以及内标溶液，准确称量三种适量对照组溶液，并通过甲醇溶解，制作成1mg/ml的对照品储备溶液；储备液配置成含有不同成分的对照品，其中西酞普兰与米氮平含量为8μg/ml，曲唑酮为20μg/ml，4℃备用。准确抽取对照组储备液，并通过甲醇予以稀释，其中西酞普兰含量为4000ng/ml、米氮平1600ng/ml、曲唑酮10000ng/ml。同样方法配置质控溶液，其中西酞普兰含量为6000ng/ml、米氮平1200ng/ml、曲唑酮15000ng/ml。
精准称量伏立康唑对照品，将其通过甲醇溶解，配置长内标储备液，浓度为1mg/ml，准确抽取质控储备液，然后通过乙腈稀释液稀释，使其浓度达到80ng/ml[4]。
制备含药血浆与质控血浆，分别抽取上述制备的20μl标准溶液，并加入380μL空白人血浆中，含药血浆浓度：西酞普兰含量为400ng/ml、米氮平200ng/ml、曲唑酮1000ng/ml。同样方法配制质控血浆，其中西酞普兰含量为300ng/ml、米氮平60ng/ml、曲唑酮750ng/ml。
1.2.4处理血浆样品
室温解冻，涡旋混合均匀，1.5mlEP管中加入50μL人血浆样品，然后加入伏立康唑内控溶液150μL，涡旋3min，离心8min，离心率13000r/min，抽取20μL上清液，加入180μL纯水，混合，进样2μL。
1.2.5线性范围
根据《生物样本定量分析方法验证指导原则》（2015版）记录好对应的色谱图，线性回归峰面积以及浓度值。确定的线性回归方程为：西酞普兰：Y=0.014X+0.0185，米氮平：Y=0.0138X+0.00952；曲唑酮：Y=0.0098X+0.0261。
1.2.6回收率分析
按照试验操作，分别配制6份样品，包括低浓度、中浓度与高浓度，根据含量测定方法对其回收率进行检测，其中西酞普兰在12-300ng/mL浓度范围回收率在89.19%-99.17%；米氮平在12-300ng/mL浓度范围回收率在92.74%-99.95%；曲唑酮在30-750ng/mL浓度范围回收率在96.11%-96.94%，总体回收率较高。
1.2.7临床试验分析
分别对15例西酞普兰、15例米氮平与15例曲唑酮治疗的抑郁症患者进行血药浓度测定。对应的血药浓度范围为：西酞普兰：7.62-63.15ng/ml；米氮平：25.71-55.58ng/ml；曲唑酮：384.47-1300.04ng/ml。
2、分析讨论
本研究对常用的西酞普兰、米氮平、曲唑酮等抗抑郁药物血药浓度予以试验，具体应用HPLC-MS/MS方法。生物样品前处理中的蛋白沉淀剂选择甲醇、乙腈，可保证较高的样品响应度；通过超纯水稀释处理，能够消除过饱和以及待测物的基质效应。通过对其利用HPLC-MS/MS试验分析，有效的实现了对不同抗抑郁药物的血药浓度检测，确定出了最低点与最高点。实际应用中能够同时对三种抗抑郁药物使用期间的血药浓度予以检测。
从整个试验过程分析，前期样品同甲醇、乙腈等处理操作简单，所需要的样品量很少，血浆用量也仅为50μL。整个样本分析时间不超过5min，试验中的回收率较高；试验分析基础上通过临床实际治疗患者的血药浓度分析，了解到不同患者用药后的抗抑郁药物实际血药浓度，为评估患者的用药安全提供依据。整个操作均严格按照试验分析方法，符合试验分析的规范操作方法，能够用于实际临床分析[5]。
鉴于本次研究中仅对三种抗抑郁血药浓度予以分析，后期研究中可对更多血药浓度进行试验分析，以期为更多抗抑郁药物的临床应用提供支持。
参考文献
[1]王玲娇,周春华,王建欣,等.HPLC-MS/MS法同时测定癫痫患者血浆中拉莫三嗪和丙戊酸钠的浓度[J].中国临床药理学杂志,2019,35(19):2390-2394.
[2]商福丽.HPLC法同时测定人血浆中紫杉醇、多西他赛及环磷酰胺的浓度[J].中国临床药学杂志,2020,29(02):125-128.
[3]肖昌琼,陈锐.RP-HPLC法同时测定人血浆中多种抗癫痫药物浓度[J].海峡药学,2020,32(03):52-54.
[4]于盼盼,刘军,杨忠杰,等.HPLC-MS/MS法同时测定人血浆中6种抗抑郁药的浓度[J].中国医院药学杂志,2020,40(05):494-500.
[5]郭璨,于静,李乾琛,等.HPLC-MS/MS法同时测定癫痫伴抑郁患者血浆中卡马西平和文拉法辛的浓度[J].中国医院药学杂志,2019,39(22):2278-2282.