唐宇 陈果 周良君 杨红 王学军
（绵阳市疾病预防控制中心；四川绵阳 621000）
【摘要】目的：探讨胶体金试剂检测血清中新型冠状病毒特异性抗体的价值。方法：对44份新冠病毒感染者标本、44份非新冠者标本和160份2018年采集的健康儿童的血清进行新冠特异性抗体检测，用特异性、敏感性和功效率指标评价研究试剂。结果：研究试剂敏感性75.00%（33/44），特异性95.59%（195/204），功效率91.94%（228/248），160份儿童标本中检出7份样本IgM或IgG抗体阳性（4.38%）。结论：抗体检测试剂有较好的敏感性和特异性，能辅助核酸检测作为疑似病例的确证手段。
【关键字】新型冠状病毒；IgM；IgG；胶体金
Evaluation of a domestic SARS-COV-2 colloidal gold assay
TANG Yu, CHEN Guo, ZHOU Liangjun, YANG Hong, WANG Xuejun.
(Mianyang Center for Disease Control and Prevention, Mianyang 621000, China)
Corresponding author：TANG Yu， Email：2021726101@qq.com
【Abstract】Objective：To explore the value of novel coronavirus specific antibody in serum with colloidal gold reagent Methods：Tests were carried out on 44 infected SARS-CoV-2 people, 44 uninfected SARS-CoV-2 people and 160 healthy children.
We evaluated the reagent with sensitivity, specificity and efficacy. Results：The reagent we studied had a sensitivity of 75.00% (33/44), specificity of 95.59%（195/204） and efficacy of 91.94%（228/248）. Conclusion: Antibody reagent was found to have good sensitivity and specificity, and could assist nucleic acid detection as a means to confirm suspected cases.
【Key words】SARS-CoV-2; IgM；IgG；Colloidal gold
2019年12月以来,一种不明原因的肺炎在湖北武汉市部分医院陆续出现，后来证实这是由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）导致的严重呼吸道疾病[1]。截止2020年6月18日，我国累计报告新型冠状病毒肺炎确证病例83325例[2]，全球（中国以外）累计确诊8437868例[3]。SARS-CoV-2感染者的早发现对控制COVID-19传播有举足轻重的作用。《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》新增了新型冠状病毒特异性抗体IgM和IgG阳性作为确诊标准。[4]胶体金法检测特异性抗体通常具有检测门槛低、样品采集便捷稳定、工作负荷较小等优点，可能更适用于基层医疗机构对需要进行SARS-CoV-2检测的人群进行筛查实验等。[5]本研究评价一种国产胶体金法试剂检测新冠感染者、疑似病例和密切接触者、疫情爆发前的健康婴幼儿血清中特异性抗体的诊断指标，目的是为临床应用提供数据支持。
1材料与方法
1 .1标本来源
纳入研究的血清样本共248份，其中2020年1月21日及之后采集的样本88份，它们分别是来自22名RT-PCR法检测新冠病毒核酸检测阳性者的不同发病时间的样本44份，采集时间为发病后0~85天；核酸检测结果为阴性且后期随访排除新冠感染的其他人群样本44份。2018年12月采集的来自160名健康婴幼儿样本160份。
1.2研究方法
采集血清标本，用于检测特异性IgM、IgG抗体，试剂为英诺特（唐山）生物技术有限公司生产的新型冠状病毒（2019-nCoV）抗体检测试剂盒。
所有试剂均在效期内使用，检测操作和判断结果严格按照试剂盒说明书进行。
1.3 统计学方法
使用SPSS 22.0软件分析数据。用率表示计数资料，Fisher确切概率法进行组间比较,检验水准为α=0.05。使用敏感性、特异性和功效率评价抗体试剂的检验效能。
2 结果
2.1研究试剂的敏感性
44份核酸检测阳性者的血清样本中，IgM阳性32例，敏感性72.73%（32/44）；IgG阳性33例，敏感性75%（33/44）；IgM和IgG联合检测阳性（即IgM和/或IgG阳性）33例，总体符合率75%（33/44）。
2.2研究试剂的特异性
44份来自2020年采集的非新冠的其他人群血清样本中，IgM阴性42例，特异性95.45%（42/44）；IgG阴性43例，特异性97.73%（43/44）；IgM和IgG联合检测阴性（即IgM和IgG均阴性）42例，符合率95.45%（42/44）。
160份来自2018年采集的健康婴幼儿血清样本中，IgM阴性154例，特异性96.25%（154/160）；IgG阴性159例，特异性99.38%（159/160）；IgM和IgG联合检测阴性153例，符合率95.63%（153/160）。
两类样本符合率的Fisher确切概率法：P=0.615，两次采样检测结果的符合率差异不具有统计学意义，不能认为研究试剂在上述两类人群中的符合率有差异。
IgM和IgG联合检测总特异性95.59%（195/204）。
2.3研究试剂的功效率
研究试剂的IgM检测功效率为91.94%（228/248），IgG检测功效率为94.76%（235/248），IgM和IgG联合检测（IgM和/或IgG阳性判为阳性，IgM和IgG均阴性判为阴性）功效率为91.94（228/248）。
血清样本中的IgM和IgG阳性率随着发病时间的增加而增加。在发病时间≤8天时，血清样本中IgM和IgG的阳性率较低；发病时间≥33天时，IgM和IgG的阳性率均为100%。
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3 讨论
通常来说，人体被病毒感染后，浆细胞会产生一系列特异性抗体，其中IgM是最早出现的，有报道显示新型冠状病毒感染者发病后最早2天就有特异性IgM抗体检出，IgM持续时间短，是病毒感染急性期的标志；IgG约在感染后3周达到检出水平，在体内持续时间长，是感染中后期和既往感染的标志。[4][6][7]在部分人群中，发病一周内的临床诊断病例的IgM/IgG双抗体阳性率是核酸检测的1.5倍[8] 。《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》中将IgM和IgG的检出作为疑似患者诊断为确诊患者的标准：血清中新型冠状病毒特异性IgG和IgM阳性；血清中新型冠状病毒特异性IgG由阴性转为阳性；恢复期血清中新型冠状病毒特异性IgG较急性期4倍以上升高。[4]胶体金法检测血清中特异性抗体检测时间短，15分钟即可出结果，操作简单、对设备要求低，适用于基层医疗机构对新型冠状病毒的筛查和核酸检测实验室的补充试验等[4] [8][9]。本次研究试剂的特异性IgM和IgG抗体联合检测敏感性75.00%，特异性95.59%，功效率91.94%，低于有关报道[8]，可能是抽样误差导致。
一般来说，抗体的产生需要时间，发病时间较短的核酸检测阳性患者体内抗体没有产生至足够检测的量、产生的抗体和病毒发生中和反应以至于不能被检出和试剂本身敏感性不足等因素，可能是导致核酸检测阳性者出现两种抗体阴性的原因。
非新冠人群中的一例IgM和IgG抗体均阳性的受试者为女性，83岁，无新冠相关的流行病学史和临床表现，经随访排除新冠感染。样本情况良好，没有出现溶血、脂血和黄疸等[9][10]。研究表明，一种冠状病毒结构蛋白诱导产生的部分抗体可能在不同冠状病毒抗体检测中导致交叉反应[11][12]。我们不排除这例抗体检测阳性结果是由于交叉反应导致的。进一步研究不同因素对抗体检出结果的影响，能一定程度上帮助对抗体检测结果的分析。
2018年12月采集的健康婴幼儿血清样本距离检测时，在-75℃环境下冻存了已超过18个月，根据以往抗体在血清中相对稳定的经验，我们开展了这部分样本的检测。由于不能排除新型冠状病毒通过母婴传播的可能性，结合婴幼儿社交需求小，和新冠感染者接触的概率相对较小[13][14][15][16]。我们初步猜测，在没有新冠感染的群体中，研究试剂的特异性指标在一定程度上和本研究中关于婴幼儿血清的特异性指标是相似的。绵阳地区大部分人口可能暂未对新冠病毒产生“群体免疫力”。
综上所诉，抗体检测试剂具有较满意的特异性、针对发病17天及以上的患者有较满意的敏感性，能较好的辅助核酸检测作为疑似病例的确证手段；单独作为筛查试剂使用时，对于发病时间小于等于8天的新冠感染者有较大的漏检可能。
本研究样本量较少，有一定的局限性，开展大样本量的检测可以更好地分析不同因素对抗体检测结果的影响。
参考文献
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通信作者：唐宇，E-mail：2021726101@qq.com
基金资助：四川省科技计划资助项目（2020YFS0015）； 2020年绵阳市科技局新型冠状病毒肺炎应急科研项目（2020YJKY018）；