金曦
苏州大学附属儿童医院, 江苏省苏州市.
[摘要] 目的 将微注凝胶抗人球蛋白试验应用于新生儿溶血病的血清学检测，对实验室诊断结果进行观察总结。方法 选择149例疑似为新生儿溶血病的血标本，用微注凝胶卡式法进行三项试验，即直接抗人球蛋白试验、血清游离抗体试验、红细胞抗体释放试验，并整理试验结果。结果 在149份随机样本中，阳性10例，弱阳性22例，微柱凝胶抗人球蛋白试验所测得的游离试验和释放试验的阳性率高，释放试验在三项试验中灵敏度最高。结论 新生儿溶血病实验室检测中，微柱凝胶法具有简单易行、高灵敏性以及可重复性等优点，实际应用效果好。
[关键词] 微柱凝胶；新生儿溶血病；抗人球蛋白；溶血三项试验
1. 引言
新生儿ABO溶血病（HDN）是由于母、婴血型不合，发生在胎儿和早期新生儿的一种免疫性溶血性疾病 [1]。胎儿从父亲处获取红细胞，若这种红细胞与母亲不同，则当胎盘出血时胎儿体内的红细胞会进入母亲体内，这种红细胞为母体的异种抗原，在母体内产生红细胞免疫抗体—IgG血型抗体。该抗体在胎儿体内会与体内的红细胞发生同种免疫反应，进而破坏胎儿的红细胞或使红细胞发生凝聚，出现贫血、溶血等不良症状，严重时会出现核黄疸，甚至造成新生儿死亡。
人类血型系统在遗传上是相互独立的，根据国际输血协会的认可，目前人类已有30余种血型系统，ABO血型系统是广为人知的血型系统，也是抗原性最强的血型系统之一[2]。对于新生儿溶血病，ABO-HDN最为常见， Rh-HDN次之，其他系统的发病情况比较罕见。新生儿溶血病对婴儿的健康产生严重危害，因而受到妇幼医学界的重视。随着科学技术的进步，无论是实验室检测技术还是临床治疗技术，对新生儿溶血病的防范和治愈都有了极大提高。
2. 实验室检测技术
新生儿溶血病的实验室检查方法分为产前检查和产后检查，产前检查主要包括夫妇血型鉴定以及夫妇ABO血型不配合时做效价测评。
确定HDN最直接有效的方法是做产后检查，其判断依据是实验室的血型血清学诊断。分为三个步骤：第一步为血型鉴定，第二步为溶血三项试验，第三步利用三项试验结果来诊断ABO-HDN情况 [2]。
直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验、以及抗体释放试验是血液血清学检测的“溶血三项”试验。试管法抗人球蛋白试验是以前临床常用的HDN三项试验，该方法有操作步骤多、持续时间又长、不同的人观察结果迥异等缺点 [3]。自上世纪90年代国外有人首次将微柱凝胶技术应用于临床血型血清学检测之后，国内陆续有人将微柱凝胶抗人球蛋白试验引入ABO-HDN检测中[4-6]，并与传统试管法测得的结果进行比较和分析，发现微注凝胶技术在新生儿溶血病检测中具有操作简单、敏感度高、稳定性与重复性高、易于存放等突出优点。
微注凝胶技术使用一种改进型的抗人球蛋白来进行三项试验，是建立在传统血型血清学检测基础上的一种检测技术。微注凝胶孔的内容物上部分为凝胶，下部分为抗人球蛋白试剂。使用一定浓度的凝胶可形成小于红细胞直径的微小孔，起到分子筛的作用。正常红细胞由于变形作用可通过这个间隙，但凝聚后的红细胞变形能力差，所以会被筛选下来。离心作用后正常的红细胞会凝聚并下沉在凝胶下方，呈阴性反应；而聚集的红细胞沉积在凝胶顶部，呈阳性反应。
微柱凝胶技术已在国内得到广泛应用，本文就作者所在单位—苏州大学附属儿童医院的实验室检测状况，就近年来随机抽取的149例疑似HDN患儿的诊断报告作如下整理。
3. 材料与方法
3.1标本来源 随机抽取2020年1~6月本院门诊和住院部临床疑似HDN的新生儿149例，年龄1h~20d。
3.2仪器与试剂 GRIFOLS抗人球蛋白卡、恒温孵育箱、定速离心机、57℃恒温水浴箱。抗A、B、D血型定性试剂，人ABO血型反定型用红细胞均由上海血液生物医药有限责任公司提供。
3.3检测方法 按要求采集被检查者血液标本3ml以上，无需抗凝。其基本程序为第一步进行血型测定（ABO及RhD），第二步进行血液血清学检测的溶血三项试验。
A.血型鉴定
试管法，抗A、抗B、抗D血清加被检者5%红细胞悬液，以3400r/min离心15s后震荡观察结果。
B.溶血三项试验
直接抗人球蛋白试验：将被检者红细胞进行离心，分离积压红细胞，使用生理盐水3次洗涤彻底之后，将微注凝胶反应卡加入，定速离心机离心9min后观察结果。
血清游离抗体试验：加ABO标准红细胞于被检者血清，将微注凝胶反应卡加入，放入恒温的37℃孵育箱15min后进行9min的恒速离心，观察结果。
红细胞抗体释放试验：加等量生理盐水于洗净后的积压红细胞，将其放入56℃的恒温水浴箱进行孵育，这个过程持续摇动10min，立即以3500r/min保温离心1min，取上清放散液。将ABO标准红细胞加入放散液，37℃孵育15min后离心9min，观察结果[4,6]。
4结果
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149份临床印象为新生儿黄疸，疑似为HDN的血样中，Rh血型均为阳性。三项试验结果阳性，其中A型患儿25例，占78.13%（25/32），B型患儿6例，占18.75%（6/32）。在O型的患儿41例，40例直抗为阴性，由此不能证实由免疫抗体引起的新生儿溶血病。其中一例为直抗阳性，由输血科工作人员送至苏州市中心血站后鉴定确认为“抗E”抗体引起的新生儿溶血病。
在三项试验中，直抗阳性者1例，游离试验阳性者32例，释放试验阳性者26例。根据试验结果发现释放试验具有最高的敏感度，是新生儿溶血病的最有利判据。
5讨论
新生儿ABO溶血病（HDN）主要是因为母亲和婴儿血型不同进而引发的一种免疫性溶血性疾病，其中发病情况最高的是母亲血型为O型而婴儿血型为A型或者B型。常出现在第一胎，第二胎也有可能发病，通常发病较轻。随着孕妇妊娠次数的增多，会提高IgG抗体的效价，那么婴儿患病几率也越高，病情也更为严重[7]。目前微注凝胶技术已逐渐作为常规血型免疫学检测技术，广泛应用于临床试验，具有操作简单、高特异性、高灵敏度及良好的可重复性等优点[8]。溶血三项中，三项结果结合起来可帮助诊断新生儿溶血病。抗体释放试验最为重要，可作为诊断新生儿溶血病的依据。通过此试验，为临床诊治提供依据。早期进行治疗可减少此疾病后遗症发生，对新生儿溶血病的防治和优生优育均有重要的临床意义。
参考文献：
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[4]刘洋, 雷婷, 陈双,等. 抗人球蛋白试验的微柱凝集法与传统试管法在自身免疫性溶血性贫血检测中的对比研究[J]. 新疆医科大学学报, 2013(11):1583-1586.
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