1、王玉娟 2、陈海刚
海南通用三洋药业有限公司 570312
复方烟酸缓释片是以缓释烟酸与辛伐他汀为主药制成的复方口服固体制剂，已在国外上市但未在国内上市，原研药缓释烟酸辛伐他汀片由美国Abbott公司研制，2008年2月获FDA批准上市，商品名为SIMCOR，用于治疗单用辛伐他汀或单用缓释烟酸治疗效果欠佳的高甘油三酯血症（Fredrickson分型Ⅳ）患者，降低其TG[1]。本文参照USP27 Oil-and Water-Soluble Vitamins with Mineral Tablets质量标准[1]、辛伐他汀质量标准WS1-（X-064）-2003Z[2]、辛伐他汀片质量标准WS1-（X-240）-2004Z[3]、中国药典2005年版二部烟酸片质量标准[4]对本品烟酸有关物进行了系统研究，确定了本品有关物质检测方法，为今后有效地控制本品有关物质提供了科学依据。
一、样品及对照品来源
样品：复方烟酸缓释片，海南通用三洋药业有限公司自制。
样品规格、批号详见下表：
规格(1) 0.5g/20mg：每片含烟酸0.5g与辛伐他汀20mg；
批号：070924、070926、070928、
规格(2) 1.0g/20mg：每片含烟酸1.0g与辛伐他汀20mg。
批号：071210、071212、071214
对照品：烟酸（批号：100434-200301）、辛伐他汀（批号：100601-200502）均由中国药品生物制品检定所提供。
二、烟酸有关物质条件
因为复方烟酸缓释片中缓释烟酸与辛伐他汀极性差异很大，且规格差别也很大，很难在同一色谱条件下同时检测，所以选择分别控制烟酸与辛伐他汀的有关物质。
照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录Ⅴ D）测定
仪器：日立L-7110泵；L-7420紫外检测器；
色谱柱：Phenomenex Fusion-RP 250mm×4.6mm；
流动相：0.1mol/L醋酸钠溶液（用醋酸调pH值至5.4）；
检测波长：262nm；流速：1.0ml/min。理论板数按烟酸峰计算不低于2000。
三、烟酸有关物质方法验证
3.1流动相选择
参考USP27 Oil-and Water-Soluble Vitamins with Mineral Tablets质量标准[1]中烟酸的测定方法2，以0.1mol/L醋酸钠溶液（用醋酸调pH5.4）为流动相。
取烟酸20.07mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取10μl进样，记录色谱图，烟酸主峰保留时间为6.4分钟，理论塔板数为10177。
另取辛伐他汀20.39mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取10μl进样，结果辛伐他汀不出峰，表明辛伐他汀不影响烟酸有关物质测定。
3.2 检测波长的选择
取烟酸对照品适量，用流动相制成每1ml约含烟酸20μg的溶液，照紫外-可见分光光度法（中国药典2005年版二部附录Ⅳ A），在200~400nm波长范围内测定吸光度，结果表明：烟酸在262nm的波长处有最大吸收，故选择262nm作为烟酸有关物质测定波长。
3.3 破坏试验
采用070924批规格0.5g/20mg复方烟酸缓释片进行破坏试验。
a、高温破坏 取本品细粉适量（约相当于烟酸10mg），置试管中，在电炉上加热变黑，并继续加热20分钟，放冷，加流动相溶解并全部转移至25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：本法能有效地将杂质峰与主峰分离。
b、酸破坏 取本品细粉适量（约相当于烟酸10mg），置25ml量瓶中，加盐酸4ml使溶解，置水浴中加热40分钟，放冷，用饱和氢氧化钠溶液调至中性，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：本法能有效地将杂质峰与主峰分离。
c、碱破坏 取本品细粉适量（约相当于烟酸10mg），置25ml量瓶中，加饱和氢氧化钠溶液4ml使溶解，水浴加热40分钟，放冷，用盐酸中和至中性，并用流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：本法能有效地将杂质峰与主峰分离。
d、氧化破坏 取本品细粉适量（约相当于烟酸10mg），置25ml量瓶中，加 30%双氧水1ml，水浴加热20分钟，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：本法能有效地将各杂质峰与主峰分离。
e、光照破坏 取本品细粉适量（约相当于烟酸10mg），置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，置光照度为4500lx的光照箱中放置24小时，过滤，取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：本法能有效地将各杂质峰与主峰分离。
3.4 空白辅料干扰试验
称取空白辅料（含相应量辛伐他汀）11.28mg，置25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：空白辅料不干扰本品中烟酸有关物质的测定。
3.5 定量限和检测限
定量限 精密称取烟酸对照品适量，用流动相溶解并稀释成含每1ml中含烟酸0.326μg的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，测得样品的响应值约为基线噪音信号的10倍高，故烟酸的定量限为3.26ng，见附图10-16。
检测限 精密称取烟酸对照品适量，用流动相溶解并稀释成1ml中含烟酸0.0978μg的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，测得样品的响应值均约为基线噪音信号的3倍高，故烟酸的检测限约为0.98ng。
3.6 线性范围及回归方程
精密称取烟酸对照品20.38mg，置100ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；分别精密量取贮备液0.4、1.2、2.0、2.8、3.6ml，置5个10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。分别取上述溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积对浓度作曲线，用最小二乘法计算回归方程及相关系数。结果见表1。
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回归方程：Amount（μg/ml）=7.689e-005×Area+2.923e-002
相关系数：r=0.9999
结果表明：烟酸在浓度为1.6～14.7μg/ml的范围内线性关系良好。
3.7 精密度试验
取烟酸有关物质线性项下中间浓度的溶液，重复进样6次，记录色谱图，并计算主峰面积的相对标准偏差，结果见表2。
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结果表明：复方烟酸缓释片中烟酸有关物质测定精密度试验结果良好。
3.8 溶液稳定性试验
取烟酸有关物质线性项下中间浓度的溶液，分别于0、2、4、6、8小时进样，记录色谱图，并计算主峰面积的相对标准偏差，结果见表3。
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结果表明：复方烟酸缓释片中烟酸有关物质测定溶液至少在8小时内稳定
四、 烟酸有关物质的测定
取本品细粉适量（约相当于烟酸20mg），置25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的20%；再精密量取供试品溶液及对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至烟酸主峰保留时间的3倍，供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，量取各杂质峰面积之和与对照溶液主峰面积的比值即得杂质含量。两种规格各三批样品照上述方法检验，结果见表4、5。
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结果表明：两种规格各三批复方烟酸缓释片中烟酸的有关物质均小于1.0%。
五、结论
在此色谱条件下，烟酸在浓度1.6～14.7μg/ml的范围内，峰面积对浓度呈良好的线性关系，Amount= 7.689e-005×Area+2.923e-002，r=0.9999；且能有效地将热、酸、碱、氧化及光照等各条件下降解的杂质与主峰完全分离，专属性强；烟酸的定量限为3.26ng；检测限为0.98ng；辛伐他汀及辅料不干扰烟酸有关物质的测定；重复性进样6次的RSD为0.51%，即精密度高；溶液在8小时内稳定，RSD=0.94%。。经验证本方法可用于本品烟酸有关物的测定，为本品质量研究提供科学依据。
参考文献：
[1]USP27 Oil-and Water-Soluble Vitamins with Mineral Tablets质量标准.
[2]国家药典委员会编. 国家食品药品监督管理局国家药品标准: 新药转正标准第34册,标准号为: WS1-（X-064）-2003Z的辛伐他汀质量标准.
[3]国家药典委员会编. 国家食品药品监督管理局国家药品标准: 新药转正标准第57册,标准号为: WS1-（X-240）-2004Z的辛伐他汀片质量标准.
[4]中国药典2005年版二部 烟酸片质量标准.