1、王玉娟，2、傅超婷
海南通用三洋药业有限公司 570312
甘磷酸胆碱是一种半合成的磷脂酰胆碱衍生物，被称为新型的胆碱能药物。甘磷酸胆碱除了在磷脂合成方面起作用以外，还能促进大脑乙酰胆碱的合成和释放，对轻中度的阿尔茨海默症有较好的治疗作用，也适用于缺血性脑卒中恢复期、短暂性脑缺血发作患者，改善所致的血管性认知功能障碍（VCI）。本品1990年首次在意大利上市销售，我国尚无批准上市，目前国内外关于甘磷酸胆碱软胶囊的质量评价研究少，甘磷酸胆碱为液体，水溶性好，口服软胶囊进入胃肠道能快速崩解溶出，被人体吸收，达到有效血药浓度而显效，避免了使用长期注射剂给患者带来的诸多不便。本文参考中国药典的溶出度方法，拟建立甘磷酸胆碱软胶囊溶出方法，选取意大利上市的甘磷酸胆碱软胶囊，对其溶出行为进行研究，为国内甘磷酸胆碱软胶囊开发的质量研究提供一定的参考。
1.原料药及样品来源
甘磷酸胆碱原料药：来源：意大利 Euticals SPA； 批号：10/04400
甘磷酸胆碱对照品：来源：Sigma-Aldrich ；纯度：98.00%。
甘磷酸胆碱工作对照品: 来源：10/04400批甘磷酸胆碱原料药
含量(折水后):100.1%(自己标定)
甘磷酸胆碱软胶囊：自制，批号：110701、110801、110802、110803。
甘磷酸胆碱软胶囊市售品：批号11108，意大利ITALFARMACO S.p.A公司
杂质对照品：氯化胆碱、甘油磷脂酰乙醇胺、甘油磷脂酰肌醇对照品均由意大利 Euticals SPA提供
空白辅料：制剂室提供，本品空白辅料为内容物辅料甘油，及软胶囊壳
2仪器与试剂
ZRS-8G智能药物溶出仪 天津市天大天发科技有限公司
高效液相色谱仪（LC-10 ATvp泵，LC Solution工作站）岛津公司
Sedex 75型蒸发光散射检测器
甲醇：色谱纯，天津市康科德科技有限公司
纯化水：自制
3溶出测定方法
用氨基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（70:30）为流动相；用蒸发光散射检测器检测（漂移管温度为80℃,载气流速为2.0L/min）。
取本品，照溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录X C，第二法），以水900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经30分钟，取溶液2ml滤过，作为供试品溶液；另取甘磷酸胆碱对照品适量，用水溶解制成每1ml中含444μg的溶液，作为对照品溶液；照含量测定项下的方法精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以外标法计算。
4方法验证与结果
4.1检测条件的建立
色谱柱用氨基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（70:30）为流动相；用蒸发光散射检测器检测（漂移管温度为80℃,载气流速为2.0L/min），进样量为20μl。
4.1.1辅料干扰试验
取甘磷酸胆碱原料,制成每1ml中含444μg的样品溶液。另取空白辅料（甘油）适量与空心软胶囊1粒，加水溶解并稀释成相应的浓度，配制成与样品中辅料相同浓度的空白辅料溶液。上述各溶液分别取20μl注入液相色谱仪,用蒸发光散射检测器检测；各溶液色谱图中的色谱峰保留时间结果见表1。
.png)
结论：检测结果表明，空心软胶囊以及空白辅料（辅料为甘油）对主成分检测结果均无影响。
4.1.2 线性范围
取甘磷酸胆碱适量,用水配制成浓度溶出度测定方法与含量测定方法相同，其线性范围结果见表2。
.png)
图1 溶出度测定的线性范围
线性方程：A=6000000C-401278（A，峰面积；C，浓度，mg/ml），R2=0.9994。
结论：甘磷酸胆碱在0.196mg/ml～1.568mg/ml浓度范围内，峰面积与溶液浓度线性关系良好。
4.13精密度试验
取甘磷酸胆碱适量,用水配制成浓度约为444μg/ml的溶液，连续测量6次。计算，试验结果见表3。
.png)
结论：精密度试验结果良好。
4.2溶出方法的建立
4.2.1溶出介质的选用
甘磷酸胆碱易溶于水，为可溶性药物。在4个不同pH的溶出介质中，对样品进行溶出曲线考察。所选用溶出介质为0.1mol/L的盐酸溶液，pH4.5的醋酸盐缓冲液，pH6.8的醋酸盐缓冲液和水，对样品的溶出特性进行评价。
4.2.2原料在溶出介质的稳定性考察
甘磷酸胆碱在0.1mol/L盐酸溶液，pH4.5醋酸盐缓冲液，pH6.8醋酸盐缓冲液和水中均易溶解，因此，直接用对应的溶出介质制成每1ml中含444μg的溶液，作为样品溶液。上述各样品溶液于室温放置0、2、4、6、8、12小时，用ELSD检测器分别测定响应值，考察甘磷酸胆碱在上述介质中的响应值变化情况,结果见表1。
.png)
结论：甘磷酸胆碱原料在各溶出介质的溶液室温放置12小时基本稳定。
4.2.3滤膜吸附试验
精密称取甘磷酸胆碱对照品适量，分别以0.1mol/L的盐酸溶液、水、pH4.5的醋酸盐缓冲液、pH6.8的醋酸盐缓冲液为溶剂，配制成每1ml中含444μg的对照品溶液。取上述各样品溶液用0.45μm滤膜过滤，用ELSD检测器分别测定滤前与滤后溶液的响应值。结果见表6。
.png)
结论：结果表明，滤膜对甘磷酸胆碱没有吸附，对甘磷酸胆碱软胶囊溶出检测无干扰。
4.2.4溶出介质的筛选
1） 0.1mol/L的盐酸溶液中
取自制品（110701批）及市售品（11108批），照溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录X C，第二法），以0.1mol/L的盐酸溶液900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，分别测定5、10、15、20、30、45分钟时的溶出度，测定结果见表7。
.png)
结论：自制品与市售品在0.1mol/L盐酸溶液中10分钟前均未溶出，两者均在15分钟测出溶出量，根据溶出曲线数据结果及溶出曲线图判断，自制品与市售品在0.1mol/L盐酸溶液中的溶出行为基本一致。
2） 水中
取自制品（110701批）及市售品（11108批），照溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录X C，第二法），以水900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，分别测定5、10、15、20、30、45分钟时的溶出度，测定结果见表8。
.png)
图3、 自制品与市售品在水中的溶出曲线
结论：自制品与市售品在水中10分钟前均未溶出，两者均在15分钟测出溶出量，根据溶出曲线数据结果及溶出曲线图判断，自制品与市售品在水中的溶出行为基本一致。
3） pH4.5的醋酸盐缓冲液中
取自制品（110701批）及市售品（11108批），照溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录X C，第二法），以pH4.5的醋酸盐缓冲液900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，分别测定5、10、15、20、30、45分钟时的溶出度，测定结果见表9。
.png)
结论：自制品与市售品在pH4.5醋酸盐缓冲液中10分钟前均未溶出，两者均在15分钟测出溶出量，根据溶出曲线数据结果及溶出曲线图判断，自制品与市售品在pH4.5醋酸盐缓冲液中的溶出行为基本一致。
4） pH6.8的醋酸盐缓冲液中
取自制品（110701批）及市售品（11108批），照溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录X C，第二法），以pH6.8的醋酸盐缓冲液900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，分别测定5、10、15、20、30、45分钟时的溶出度，测定结果见表10。
5结论
采用上述高效液相色谱法测定甘磷酸胆碱软胶囊的溶出度，经方法学研究，结果表明，回收率、准确度、精密度符合要求，在测定浓度范围内线性关系良好，其溶液在室温12小时内稳定，溶出均一性良好，批间重现性好，可以采用高效液相色谱法测定甘磷酸胆碱软胶囊的溶出度；比较了甘磷酸胆碱软胶囊自制品与上市品（意大利ITALFARMACO S.p.A公司生产）在pH1.0的盐酸溶液、pH4.5的醋酸盐缓冲液、pH6.8的醋酸盐缓冲液和水中的溶出曲线，结果自制品与上市品的溶出过程基本一致，本品在四种溶出介质的溶出曲线测定结果显示在10分钟后软胶囊囊壳开始破裂，30分钟时内容物溶出达到85%以上，四种介质溶出过程无明显差别。参照《口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》，将溶出度限度定为30分钟时在水中的溶出量不得低于标示量的85%。
参考文献
1.中国药典2010版二部附录
b